Histoloji tədqiqat üsulları normal, patoloji və eksperimental şəraitdə insanların, heyvanların və bitkilərin hüceyrə və toxumalarının quruluşunu və funksiyasını öyrənmək üçün istifadə olunur. G. m.-nin əsası və. - hüceyrə və toxumaların mikroskopik müayinəsi üçün preparatların hazırlanmasında istifadə olunan metodoloji üsulların məcmusudur. Hüceyrə və toxumaların mikroskopik tədqiqi tədqiq olunan obyektin vəziyyətindən asılı olaraq iki əsas yolla həyata keçirilə bilər: canlı hüceyrə və toxumaların tədqiqi, xüsusi fiksasiya hesabına öz quruluşunu saxlayan qeyri-canlı hüceyrə və toxumaların tədqiqi. texnikalar. Canlı obyektlərin - həyati (supravital) tədqiqi hüceyrələrdə və toxumalarda fizioloji prosesləri, onların intravital quruluşunu müşahidə etməyə imkan verir. Maye mühitdə sərbəst asılmış hüceyrələrdə (qan hüceyrələri, qırıntıların epitel hüceyrələri və s.), həmçinin xüsusi qida mühitində yetişdirilən hüceyrə və toxuma mədəniyyətlərində aparılır. İntravital müşahidənin obyekti nazik, şəffaf toxuma filmləri (, üzgüçülük membranı) ola bilər. Eksperimental tədqiqatlarda bioloji pəncərələr üsulu (şəffaf kameraların implantasiyası) və təbii şəffaf mühitdə, məsələn, heyvanların gözünün ön kamerasında toxuma implantlarının öyrənilməsi istifadə olunur. Qarşıda duran vəzifədən asılı olaraq həyati tədqiqatlarda müxtəlif xüsusi mikroskopiya üsullarından istifadə olunur: qaranlıq sahə, faza-kontrast, flüoresan, qütbləşmə, ultrabənövşəyi. Vital histoloji üsullar əsasən bioloji və biotibbi tədqiqatlar üçün istifadə olunur. Onların geniş istifadəsi sağ qalan toxumaların xüsusiyyətləri ilə əlaqəli böyük texniki çətinliklərlə məhdudlaşır. Tibbi tədqiqatlarda, xüsusilə anatomik patologiya laboratoriyalarının təcrübəsində sabit obyektlərin öyrənilməsi üsullarından istifadə olunur. Fiksasiyanın məqsədi hüceyrələrin və toxumaların ölümdən sonra dəyişikliklərin inkişafına mane olan kimyəvi maddələrə tez məruz qalaraq intravital quruluşunu qorumaqdır. Fiksasiya metodunun seçimi tədqiqatın məqsədlərindən və sabitlənəcək materialın xüsusiyyətlərindən asılıdır. Beləliklə, tərkibində ağır metalların duzları olan fiksasiya qarışıqları (məsələn, sublimat) nazik hüceyrə strukturlarını müəyyən etmək üçün istifadə olunur.Sitoloji məqsədlər üçün ən yaxşı fiksator elektron mikroskopiyada tez-tez istifadə olunan osmium tetroksiddir. Universal fiksator formaldehiddir, 10% formalin məhlulu şəklində istifadə olunur. Vahid və tam olması üçün toxuma parçaları kiçik olmalıdır və bərkidici mayenin həcmi bərkidiləcək materialın həcmindən dəfələrlə çox olmalıdır. Fiksasiyadan sonra parçalar adətən suda və ya spirtdə yuyulur. Bərk toxuma komponentləri (məsələn, kalsium yataqları) dekalsifikasiya üsullarından istifadə etməklə çıxarılır. Adətən ekspress diaqnostikada istifadə edilən toxuma kəsiyini hazırlamağın ən sürətli və asan yolu parça və dondurucu mikrotomda toxuma kəsiklərinin əldə edilməsidir. Bununla belə, kifayət qədər nazik kəsiklər, eləcə də kiçik obyektlərdən və çürüyən toxumalardan kəsiklər əldə etmək çətindir. Buna görə də, toxuma parçaları, bir qayda olaraq, sızdırmazlıq mühitinə - və ya selloidinə tökülür. Sabit artan gücü olan spirtlərdə susuzlaşdırılır, ara həlledicidən (ksilen və ya parafin üçün, seloidin üçün spirt-efir) keçirilir və parafin və ya selloidin ilə hopdurulur. parafində daha incə hissələr əldə etməyə imkan verir (5-8-dən 1-2 mikron) selloidindən daha çox. Mikroskopik müayinə üçün bölmələr slayd və ya fırlanan mikrotomdan istifadə etməklə hazırlanır. Ultra nazik kəsiklər (qalınlığı 90-100-dən 5-15-ə qədər nm) elektron mikroskopik tədqiqatlar üçün zəruri olan ultratomda hazırlanır. Ultratomlardan yarı nazik kəsiklər əldə etmək üçün işıq mikroskopiyasında da istifadə olunur. Hazırlanmış bölmələr boyaları fərqli qəbul edən hüceyrələrin və toxumaların strukturlarını aydın şəkildə vurğulamaq üçün boyanır. Əsas boyalar - boyayıcı əsaslar və onların duzları (, toluidin mavisi, mavi, bismark qəhvəyi) - sözdə bazofil strukturları (hüceyrə nüvələri, birləşdirici toxuma) ləkələyir. Turşu boyalar - rəngləndirici turşular və onların duzları (pikrin turşusu, eritrozin) - asidofil və ya oksifil strukturları (hüceyrə sitoplazması, kollagen, elastik liflər) ləkələyir. boyanma emprenye ilə fərqlənməlidir - ağır metalları (məsələn, gümüş, qızıl, osmium) duzlarından bərpa etmək və bununla da sıx bir rəng əldə etmək üçün hüceyrə və toxumaların müəyyən sahələrinə əsaslanan xüsusi bir üsul. Histoloji preparatın hazırlanması onun obyektin strukturlarının, rənginin və şəffaflığının qorunmasını təmin edən mühitlərdə yerləşdirilməsi ilə başa çatdırılır. Çox vaxt, məsələn, bu məqsədlər üçün üzvi qatranlar istifadə olunur.
1. Kiçik tibb ensiklopediyası. - M .: Tibb Ensiklopediyası. 1991-96 2. İlk yardım. - M.: Böyük Rus Ensiklopediyası. 1994 3. Tibbi terminlərin ensiklopedik lüğəti. - M.: Sovet Ensiklopediyası. - 1982-1984-cü illər.
Digər lüğətlərdə "Histoloji tədqiqat metodlarının" nə olduğuna baxın:
İnsan anatomiyasında metodik yanaşmalar və tədqiqat metodları- Bəzən eşidir ki, anatomiyada öyrənməyə, araşdırmaya heç nə qalmayıb, guya bütün mövzular tükənib, öyrənilə biləcək hər şey artıq öyrənilib, bütün məsələlər həll olunub. Sanki insan bədəninin quruluşuna aid olan hər şey, ...... İnsan anatomiyası üzrə terminlər və anlayışlar lüğəti
LABORATORİYA TƏDQİQAT- LABORATORİYA TƏDQİQATLARI. LABORATORİYA İŞLƏRİNƏ baxın. Etibarlı tədqiqat nəticələrinin alınmasının ən mühüm şərti təhlil obyektlərinin düzgün seçilməsi, onların vaxtında seçilməsi və tədqiqat probleminin formalaşdırılmasıdır. Nümunə götürmə qaydaları... Balıq Xəstəlikləri: Təlimat Kitabı
I Medicine Medicine sağlamlığın möhkəmləndirilməsinə və saxlanmasına, insanların ömrünün uzadılmasına, insanların xəstəliklərinin qarşısının alınmasına və müalicəsinə yönəlmiş elmi bilik və təcrübə sistemidir. Bu vəzifələri yerinə yetirmək üçün M. strukturu öyrənir və ...... Tibb ensiklopediyası
Mikroskopdan istifadə edərək müxtəlif obyektlərin öyrənilməsi yolları. Biologiya və tibbdə bu üsullar ölçüləri insan gözünün ayırd edə bilməyəcəyi qədər uzanan mikroskopik obyektlərin quruluşunu öyrənməyə imkan verir. M.m.i-nin əsası. təşkil edir…… Tibb ensiklopediyası
- (histoloji situs hüceyrəsi + Yunan logos doktrinası) hüceyrələrin struktur xüsusiyyətlərinin, toxuma orqanlarının hüceyrə tərkibinin, insan və heyvanların bədən mayelərinin normal və patoloji proseslərdə mikroskopdan istifadə edərək öyrənilməsinə əsaslanır. C. və...... Tibb ensiklopediyası
I Histologiya (yunanca histos toxuma + logos tədrisi) çoxhüceyrəli heyvanlarda və insanlarda toxumaların təkamülünü, onların orqanizmdə inkişafını (histogenez), quruluşunu, funksiyalarını və qarşılıqlı təsirini öyrənən biotibbi elmdir. G.-nin əsas tədqiqat mövzusu ...... Tibb ensiklopediyası
I Vulva (vulva; pudendum femininum) xarici qadın cinsiyyət orqanları (Beynəlxalq Anatomik Nomenklaturaya görə qadın cinsiyyət sahəsi). Anatomiya və fiziologiya. Vulva (şəkil 1) çanaq sümüklərinin xaricində yerləşir və onlara əlavə olunur ... ... Tibb ensiklopediyası
Müxtəlif xəstəlik proseslərinin orqanizmdə törətdiyi dəyişiklikləri öyrənərək, özünəməxsus tədqiqat metodları ilə həm bu xəstəlik proseslərini, həm də xəstəliyin və ölümün klinik mənzərəsi ilə əlaqədar əhəmiyyətini müəyyən etməyi qarşısına məqsəd qoymuşdur ... ... Ensiklopedik lüğət F.A. Brockhaus və I.A. Efron
I Biopsiya (yunanca bios həyat + opsis görmə, vizual qavrayış) diaqnostik məqsədlər üçün mikroskopik müayinə üçün toxumaların, orqanların və ya hüceyrə süspansiyonlarının intravital alınması, həmçinin patoloji prosesin dinamikasını və təsirini öyrənmək ... ... Tibb ensiklopediyası
Heyvanların toxumalarını öyrənən elm. Toxuma forma, ölçü və funksiya baxımından və metabolik məhsullarında oxşar olan hüceyrələr qrupudur. Bütün bitki və heyvanlarda, ən ibtidai olanlar istisna olmaqla, bədən toxumalardan ibarətdir, ... ... Collier Ensiklopediyası
- (yunan ἱστός toxuma və yunan λόγος bilik, söz, elmdən) canlı orqanizmlərin toxumalarının quruluşunu öyrənən biologiya sahəsi. Bu, adətən toxumanın nazik təbəqələrə bölünməsi və mikrotomun istifadəsi ilə həyata keçirilir. Anatomiyadan fərqli olaraq, ... ... Vikipediya
Kitablar
- Çox Miyeloma və Plazma Hüceyrə Xəstəlikləri, Ramasami Kartik, Lonial Sagar. Kitab çoxlu miyeloma və digər plazma hüceyrə xəstəliklərinin əsas klinik aspektlərini təqdim edir. Laboratoriya tədqiqatları, patogenezi, diaqnozu və müalicəsi təsvir edilmişdir. İkincidə…
Tədqiqat obyektləri sabit (ölü) və ya canlı hüceyrələr və toxumalar ola bilər.
Xammalın və heyvandarlıq məhsullarının mikrostrukturunu öyrənmək üçün, bir qayda olaraq, sabit hüceyrə və toxumalardan istifadə olunur. Hazırlıqlar müvəqqəti, tək bir araşdırma üçün nəzərdə tutulub və saxlanıla bilən və dəfələrlə araşdırıla bilən daimidir. Bundan əlavə, ümumi və ya bütün hazırlıqlar istifadə olunur.
Müvəqqəti dərmanlar nisbətən tez bişirilə bilər; bunun üçün tədqiq olunan material sabitlənir və dondurucu bir mikrotomda kəsiklər alınır, olmadıqda toxuma və ya orqanın nazik bir hissəsi skalpel və ya bıçaqla edilə bilər. Yaranan hissə ləkələnir, bir şüşə slaydın üzərinə qoyulur və sonra bir damla qliserin tətbiq edilir və örtüklə örtülür. Nişastanı aşkar etmək üçün kalium yodiddə yodun məhlulu istifadə olunur: 0,5 q kalium yodid az miqdarda suda həll edilir, 1 q kristal yod əlavə edilir və 100 sm 3-ə su əlavə edilir. Şüşə slaydda yerləşən nazik bir kolbasa, pendir və digər materiala bir neçə damcı reagent tətbiq olunur, nişasta mavi-bənövşəyi rəngə çevrilir.
Ümumi və ya Bütöv Hazırlıqlar toxuma və ya orqan kəsimi alınmadan müayinə edilir. Məsələn, fiksasiya, yuyulma və boyanmadan sonra dərialtı toxuma filmi və ya bitki kökünün əzilmiş preparatı slayd və örtük arasında bağlanır. Ayrı-ayrı struktur elementləri müəyyən etmək üçün dərialtı toxuma və ya hamar əzələ toxumasının sabit və ləkələnmiş hissələri bir şüşə slaydda bir iynə ilə qoparılır - bu cür preparatlar qoparılmış adlanır. Bəzi hallarda, məsələn, göz almasının tor qişasının filmini və ya tadpole dərisini araşdırarkən, fiksasiya və yuyulduqdan sonra rəngləmə aparılmır, çünki hüceyrələrdə təbii rəngə malik olan üzvi daxilolmalar (piqment) var.
Histoloji preparatın hazırlanma üsulu. Sabit hüceyrə və toxumaların öyrənilməsinin əsas üsulu histolojidir, yəni. xüsusi mühitdə qapalı ləkələnmiş toxuma bölməsinin öyrənilməsi. Kesimləri əldə etmək üçün test materialının parafinə və ya selloidinə tökülməsi istifadə olunur ki, bu da nazik kəsiklər (müvafiq olaraq 5-7 mikron və ya 10-30 mikron) əldə etməyə imkan verir, kəsiklərin tez hazırlanması (40-60 mikron), dondurulması texnikasından istifadə olunur.
Histoloji nümunənin hazırlanmasında əsas mərhələlər bunlardır: nümunə götürmə, fiksasiya, yuyulma, susuzlaşdırma, parafinə və ya selloidinə daxil etmə, boyanma, örtük altına yerləşdirmə.
Seçim nümunəsi tədqiqatın məqsədi və materialın strukturu nəzərə alınmaqla hazırlanır. Nümunənin ölçüsü orta hesabla 2,5-3,0 sm-dən çox olmamalıdır.Qaraciyər və dalaq nümunələri kapsulla götürülür. Atriumun parçaları ürəkdən kəsilir, çünki membranlar ventriküllərdən daha incədir və bir hazırlıqda epikard, miokard və endokardın topoqrafik əlaqəsini görmək olar. Böyrəklərdən, limfa düyünlərindən, adrenal bezlərdən, səthə perpendikulyar olan səthə dərin gedən orqanların hissələri kəsilir ki, preparat üzərində korteks və medulla aşkar edilir. Dəyişdirilmiş orqanların preparatlarını hazırlamaq lazımdırsa, lezyonun keçid zonası nümunəyə daxil olması üçün təsirlənmiş ərazi ilə sərhəddə sınaq materialının parçaları kəsilir. Skelet əzələlərindən nümunələr kəsilməlidir ki, əzələ lifləri uzununa və eninə hissələrdə olsun. Kıyılmış ət, kəsmik və digər xırdalanan nümunələrdən nümunələr əvvəlcə cuna parçasına qoyulur və iplə bağlanır. Nəzərə almaq lazımdır ki, sinə boşluğunu açarkən ağciyərlər elastiklik səbəbindən çökür, havadarlığını əhəmiyyətli dərəcədə itirir, buna görə də çıxarılan tənəffüs orqanlarının traxeyasına bir şüşə və ya rezin boru daxil edilir, bunun vasitəsilə hava orta dərəcədə enjekte edilir. . Daxil edilmiş borunun altındakı traxeyaya ipək ligature tətbiq olunur və tam daldırma üçün bir yük bağlanır. Bağırsaqları düzəltmək üçün orqanın fiksasiya üçün nəzərdə tutulmuş bir hissəsi əvvəlcədən hər iki tərəfdən ligaturlarla sarılır. Nümunələr nümunənin sayı və tarixini göstərən qalın kağız etiketlərlə təmin edilir.
fiksasiya, olanlar. təbii (ömürlük) arxitektonikanın qorunması strukturların canlı protoplazmasını dəyişməz vəziyyətə keçirmək üçün həyata keçirilir. Fiksativlərin hərəkəti biofiziki proseslər nəticəsində toxuma və orqanlarda zülalların geri dönməz laxtalanmasının baş verməsi ilə özünü göstərir. Orqandan alınan toxuma nümunəsi mümkün qədər tez fiksatora batırılır; materialın və bərkidici mayenin həcminin nisbəti ən azı 1:9 olmalıdır (şək. 3).
Fiksasiya bir qədər sıxılmaya və nümunənin həcminin azalmasına səbəb olur. Çox vaxt fiksasiya üçün 10-12% formalin, etil spirti, aseton istifadə olunur. Sabitləyici mayenin göstərilən konsentrasiyasını hazırlamaq üçün 40% formalin kran suyu ilə seyreltilir. Etil spirti (100% mütləq və ya 96%) bölmələrdə sulu fiksatorlarda (məsələn, glikogen) həll olunan maddələri müəyyən etmək lazım olduğu hallarda istifadə olunur. Asetonda tədqiq olunan material (məsələn, beyin) yalnız bir neçə saat sabitlənir. Tədqiq olunan orqan, məsələn, sümük toxuması əhəng ehtiva etdikdə, kalsifikasiya və ya kalsifikasiya aparılır. Bunun üçün gündə 2-3 dəfə dəyişdirilən azot turşusunun 5-8% sulu məhlulunda kiçik bir sümük parçası endirilir (onu ipdən asmaq daha yaxşıdır). Dekalsifikasiyanın nəticəsi sümüyə nazik iynənin vurulması ilə mühakimə olunur: müqavimət yoxdursa, dekalsifikasiya tamamlanır. Belə bir pro-
qızartı artıq miqdarda fiksatorun çıxarılması üçün aparılır, məsələn, formalinlə fiksasiya edildikdən sonra yuyulma axan su ilə aparılır.
Dehidrasiya artan konsentrasiyalı etil spirtində materialı sıxlaşdırmaq üçün aparılır: 50-70-100. 50% və 70% spirt hazırlamaq üçün 96% spirt distillə edilmiş su ilə seyreltilir. 100% spirt hazırlamaq üçün mis sulfatı tamamilə susuzlaşana qədər qızdırmaq və susuzlaşdırılmış ağ tozun üzərinə 96% etil spirti əlavə etmək lazımdır. Alkoqolun hər konsentrasiyasında material parçaların ölçüsünə, orqanın strukturuna görə 1-24 saat saxlanılır; 70% spirtdə, material bir neçə gün saxlanıla bilər.
doldurmaq elə bir mühitdə aparılır ki, sınaq nümunəsi bərk olur, bu da nazik kəsiklər əldə etməyə imkan verir. Bunun üçün parafin (1-4 saat emprenye), celloidin (üç həftə emprenye) istifadə edin. Yağları aşkar edərkən və boş toxumaların və orqanların öyrənilməsi üçün jelatinə tökmək istifadə olunur.
dilimlər kirşə və ya fırlanan mikrotomlarda qəbul edin. Ən incə hissələr (5-7 mikron) parafinə daxil edilmiş materialdan hazırlana bilər. Seloidinlə doldurulmuş materialdan 15-20 mikron qalınlığında kəsiklər hazırlanır. Xammalın və heyvan mənşəli məhsulların mikrostrukturunu öyrənmək üçün, bir qayda olaraq, dondurma üsulundan istifadə olunur. Bu, preparatın hazırlanmasını sürətləndirir, çünki uzun müddət susuzlaşdırma və tökülmə mərhələləri aradan qaldırılır. Fiksasiya və yuyulduqdan sonra əşyanın parçaları dondurucu mikrotomun yaş mərhələsinə yerləşdirilir və 40-60 mkm qalınlığında kəsiklər alınır. Bölmələr bir fırça ilə suya köçürülür, orada düzəldilir, ən incə boz rəngli qırıntıların görünüşünü əldə edir.
Bölmənin rənglənməsi işıq mikroskopunda müayinə üçün nəzərdə tutulmuş preparatlarda müxtəlif strukturların kontrastını artırmaq üçün həyata keçirilir. Boyanma prosesində mürəkkəb kimyəvi və fiziki proseslər baş verir, buna görə də bir üsul seçərkən müxtəlif fiziki-kimyəvi xüsusiyyətlərə malik müəyyən boyalar üçün hüceyrə strukturlarının seçici yaxınlığı nəzərə alınır.
Əsas (bazal), asidik və xüsusi boyalar var. Əsas boyalarla boyanmış strukturlar deyilir bazofil, turşu boyaları - oksifil, asidofil, eozinofilik.
Əsas (bazal) boyalardan nüvənin xromatini və tərkibində protein olan digər strukturları mavi və ya bənövşəyi rəngə boyayan hematoksilin istifadə olunur; karmin, nüvəni açıq qırmızıya boyayır, safranin - tünd qırmızı boya, tionin - mavi boya.
Turşu boyalardan eozin (sitoplazmanı çəhrayı rəngə boyayır), pikrik turşusu (sarı), fuksin (kərpic rəngi), indiqo karmin (mavi) istifadə olunur.
Xammalın və heyvandarlıq məhsullarının mikrostrukturunu öyrənərkən ən çox hematoksilin və eozin ilə birləşmiş rəngləmə istifadə olunur. Bunun üçün sudan kəsiklər 1-3 dəqiqə hematoksilin məhluluna köçürülür; 20-30 dəqiqə suda yuyulur, 3-5 dəqiqə eozin məhluluna qoyulur və 3-5 dəqiqə su ilə yuyulur. Qalan su filtr kağızı ilə çıxarılır, 1-2 dəqiqə ərzində 96% etanol damcısı vurulur və ksilen və ya toluolda 25% karbol turşusu məhlulunda susuzlaşdırılır. Sonra kəsilmiş yerə 1-2 damcı balzam vurulur və örtüklə örtülür.
Yağlı inklüzyonları rəngləndirən boyalardan tez-tez Sudan 111 istifadə olunur.95 sm 3 85% etil spirtində boya məhlulu hazırlamaq üçün 5 sm 3 aseton əlavə edilir və doymuş məhlul alınana qədər Sudan III tozu tökülür. boya həddindən artıq olmalıdır). Qarışıq 50% C-ə qədər qızdırılır və süzülür. Dondurucu mikrotomda alınan kəsiklər 1-2 dəqiqə ərzində 50% etanolda, sonra isə 25 dəqiqə ərzində III Sudanda yerləşdirilir. Bölmələr 50% spirtdə yuyulur, distillə edilmiş su ilə yuyulur və qliserin-jelatinə qoyulur.
Neytral yağ damcıları yağlarda Sudan III-ün əriməsi səbəbindən narıncıya çevrilir. Yağ daxilolmaları osmik turşu ilə də aşkar edilə bilər, yağ strukturları isə qara rəngə boyanır.
Qapaq altındakı nəticə havanın keçməsinə imkan verməyən və kəsimi uzun müddət saxlaya bilən mühitlərdə aparılır. Ləkələnmiş hissələr artan gücü olan spirtlərdə susuzlaşdırılır və küknar, Kanada balzamı və ya qliserol-jelatində örtük altında yerləşdirilir (preparat spirtlər və ksilen ilə təmasda olmamalıdır).
Elektron mikroskopiya üçün nümunələrin hazırlanması. Bioloji obyektləri öyrənmək üçün iki növ elektron mikroskop istifadə olunur: ötürücü (ötürmə) və skan edən (raster).
Transmissiya elektron mikroskopunda müayinə üçün obyektin işlənməsi prinsipi optik mikroskoplarla eyni prinsiplərə əsaslanır: nümunə götürmə, fiksasiya, yuyulma, susuzlaşdırma, tökmə, ultranazik kəsiklərin hazırlanması, kontrast.
Seçim nümunəsi tədqiqatın məqsədi və materialın strukturu nəzərə alınmaqla, işıq mikroskopiyası ilə eyni qaydalara riayət edilməklə həyata keçirilir. Öyrənilən materialın hissələrinin həcmi 1 mm 3-dən çox olmamalıdır. Fiksasiyanın əsas məqsədi toxumanı mümkün qədər həyata yaxın saxlamaqdır.
Fiksasiya Quruluşların daha yaxşı qorunması üçün həyata keçirilir, buna görə də müəyyən bir pH və izotonikliyi olan reagentlərdən istifadə etmək lazımdır, dəyərləri sabitlənmiş toxuma növü ilə müəyyən edilir. Fiksasiya prosesi iki mərhələdə aparılır: prefiksasiya və postfiksasiya. Prefiksasiya üçün 2,5-3% qlutaraldehid məhlulu (pH 7,2-7,4) istifadə olunur, fiksasiya müddəti 2-4 saatdır.Postfiksasiya 2% həllində (pH 7,2-7,4 ) - 1- 2 saat.Daxili quruluşu qorumaq üçün aşağı temperaturlu fiksatordan (0-4 °C) istifadə etmək, fosfat-bufer, kakodilat, veronal-asetat məhlulları üzərində fiksator hazırlamaq məsləhət görülür.
qızartı 30% soyuq spirt ilə 5-7 dəfə aparılır, obyekt 30 dəqiqə spirtin hər bir hissəsində saxlanılır, yəni. fiksatorun oksidləşdirici təsiri dayandırıldıqda fiksatordan belə vəziyyətə yuyulur.
Dehidrasiya artan gücü olan etil spirtləri ilə həyata keçirin: 30, 50, 70, 96, 100% 30 dəqiqə. Bəzi tökmə üsulları üçün susuzlaşdırma üçün aseton və propilen oksidin əlavə edilməsi tövsiyə olunur.
doldurmaq epoksi qatranlarında (araldit, epon və s.) aparılır. Kapsulalarda qatranların polimerləşməsi, bir qayda olaraq, 1-2 gün ərzində sərtləşənə qədər 60 ° C-də bir termostatda aparılır.
Ultra nazik hissələr ultramikrotomda şüşə bıçaqlardan istifadə etməklə əldə edilir, bunun üçün epoksi bloklar tetraedral kəsilmiş piramida şəklində itilənir. Serial bozumtul hissələr 10% etanollu vannaya yerləşdirilir. Yaranan hissələr mis və ya palladium torlarına quraşdırılır, səthində əvvəlcədən bir formavar filmi tətbiq olunur. Lazımi strukturları aşkar etmək üçün torlardakı kəsiklər qurğuşun sitrat və uranil asetatın məhlulları ilə işlənir.
üçün skan edən elektron mikroskopiya sınaq nümunəsi yuxarıda göstərilən fiksatorlardan istifadə edərək, tədqiqatın məqsədindən asılı olaraq sabitlənir, susuzlaşdırılır. Susuzlaşdırmadan sonra nümunə tutucu obyektə yapışdırılır, püskürtmə qurğusuna yerləşdirilir və çox nazik qızıl və ya platin təbəqəsi ilə örtülür. Transmissiya elektron mikroskopiyasından fərqli olaraq, skan edən elektron mikroskopiya korroziyaya səbəb olan preparatlardan istifadə edə bilər: tədqiqat obyekti bəzi sərtləşdirici maddələrlə tökülür, sonra tökmələr və səthlər yoxlanılır. Dondurma - çipləmə yolu ilə əldə edilən replikaları da öyrənirlər. Bu vəziyyətdə, obyektin səthinin parçalanması təəssüratı yoxlanılır. Kontrastı artırmaq üçün replikalar metal hissəcikləri (qızıl, platin) və ya kömür səpməklə kölgələnməlidir.
test sualları
- 1. Hüceyrə strukturlarının, toxumalarının və orqanlarının öyrənilməsində hansı üsullardan istifadə olunur?
- 2. Histoloji preparatların hazırlanması üçün nümunələr götürülərkən hansı əsas qaydalara əməl edilməlidir?
- 3. Sümük toxumasından preparatların hazırlanmasının xüsusiyyətləri hansılardır?
- 4. Test materialı necə sabitlənir?
- 5. Preparatların susuzlaşdırılması üçün nədən istifadə olunur?
- 6. Sınaq materialını tökmək üçün hansı mühitlərdən istifadə olunur?
- 7. Piy toxumasını aşkar etmək üçün hansı boyadan istifadə olunur?
- 8. Ən çox istifadə olunan bölmə üsulu hansıdır və niyə?
- 9. Nümunələrin ötürülməsi və skan edilməsi üçün elektron mikroskopiyaya hazırlanmasının əsas mərhələlərini adlandırın.
Histologiya - (yunan dilində "gistos" - toxuma, logis - təlim) Bu, çoxhüceyrəli orqanizmlərin və insanların toxumalarının quruluşu, inkişafı və həyati fəaliyyəti haqqında elmdir. Bu elmin predmeti olan obyektlər adi gözlə əlçatmazdır. Buna görə də histologiyanın tarixi ən kiçik obyektləri adi gözlə öyrənməyə imkan verən belə alətlərin yaradılması tarixi ilə sıx bağlıdır. 2
Histologiya kursu şərti olaraq aşağıdakı bölmələrə bölünür: n 1. Sitologiya hüceyrə haqqında elmdir. n 2. Embriologiya orqanizmin yaranmasından tam formalaşmasına qədər inkişaf haqqında elmdir. n 3. Ümumi histologiya - toxumalara xas olan ümumi qanunauyğunluqlar haqqında elm. n 4. Şəxsi histologiya - orqan və sistemlərin quruluşunu, inkişafını öyrənir.
SITOLOGİYA - (yun. κύτος "hüceyrə" və λόγος - "öyrənmək", "elm") n Biologiyanın canlı hüceyrələri, onların orqanellərini, quruluşunu, fəaliyyətini, hüceyrələrin çoxalması, qocalması və ölməsi proseslərini öyrənən bölməsi. dörd
EMBRİOLOGİYA n (digər -yunanca ἔμβρυον - embrion, embrion + λόγος-dan -λογία - tədris) embrionun inkişafını öyrənən elmdir. 5
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 1590. Jansen mikroskopu icad etdi, onun böyüdülməsi iki linzanın birləşməsi ilə təmin edildi. 1665. Robert Huk ilk dəfə hüceyrə terminindən istifadə etmişdir. 1650-1700-cü illər. Anthony van Leeuwenhoek ilk dəfə bakteriya və digər mikroorqanizmləri təsvir etmişdir. 1700-1800-cü illər. Müxtəlif toxumaların, əsasən də tərəvəzlərin çoxlu yeni təsvirləri və rəsmləri nəşr edilmişdir. 1827-ci ildə Karl Baer məməlilərdə yumurta kəşf etdi. 1831-1833-cü illər. Robert Braun bitki hüceyrələrindəki nüvəni təsvir etdi. 1838-1839-cu illər. Botanik Matthias Schleiden və zooloq Teodor Schwann müxtəlif alimlərin fikirlərini birləşdirərək canlı orqanizmlərdə quruluş və funksiyanın əsas vahidinin hüceyrə olduğunu irəli sürən hüceyrə nəzəriyyəsini formalaşdırdılar. 1855 Rudolf Virchow bütün hüceyrələrin hüceyrə bölünməsi nəticəsində əmələ gəldiyini göstərdi.
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 1665. Mantarın bir hissəsini mikroskop altında araşdıran ingilis alimi, fizik Robert Huk onun arakəsmələrlə ayrılmış hüceyrələrdən ibarət olduğunu kəşf etdi. Bu hüceyrələri o, "hüceyrələr" adlandırdı.
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 17-ci əsrdə Leeuvenhoek mikroskop hazırladı və insanlar üçün mikrokosmosun qapısını açdı. Təəccüblənən tədqiqatçıların gözləri qarşısında müxtəlif kirpiklər, rotiferlər və digər kiçik canlılar parladı. Məlum oldu ki, onlar hər yerdə var - bu ən kiçik orqanizmlər: suda, peyində, havada və tozda, torpaqda və oluklarda, heyvan və bitki mənşəli çürüyən tullantılarda.
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 1831-1833. Robert Braun bitki hüceyrələrindəki nüvəni təsvir etdi. 1838-ci ildə alman botaniki M.Şleyden nüvəyə diqqət çəkərək onu hüceyrənin yaradıcısı hesab etmişdir. Şleydenin fikrincə, nüvə dənəli maddədən kondensasiya olunur, onun ətrafında nüvə, nüvənin ətrafında isə hüceyrə əmələ gəlir və nüvə hüceyrə əmələ gəlməsi prosesində yox ola bilər.
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi Alman zooloqu T.Şvann göstərmişdir ki, heyvan toxumaları da hüceyrələrdən ibarətdir. O, nüvələri olan hüceyrələrin bütün canlıların struktur və funksional əsasını təşkil etdiyini ifadə edən bir nəzəriyyə yaratdı. Hüceyrə quruluşu nəzəriyyəsi 1839-cu ildə T.Şvann tərəfindən tərtib edilmiş və nəşr edilmişdir. Onun mahiyyətini aşağıdakı müddəalarla ifadə etmək olar: 1. Hüceyrə bütün canlıların quruluşunun elementar struktur vahididir; 2. Bitki və heyvanların hüceyrələri müstəqildir, mənşəyinə və quruluşuna görə bir-birinə homologdur. Hər bir hüceyrə digərlərindən asılı olmayaraq, hamısı ilə birlikdə fəaliyyət göstərir. 3. Bütün hüceyrələr struktursuz hüceyrələrarası maddədən əmələ gəlir. (Səhv!) 4. Hüceyrənin həyat fəaliyyətini qabıq müəyyən edir. (Səhv!)
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 1855-ci ildə alman həkimi R.Virxov ümumiləşdirmə apardı: hüceyrə ancaq əvvəlki hüceyrədən yarana bilər. Bu, orqanizmlərin böyüməsi və inkişafının hüceyrə bölünməsi və onların sonrakı differensasiyası ilə əlaqəli olduğunun dərk edilməsinə gətirib çıxardı, toxuma və orqanların formalaşmasına səbəb oldu.
Karl Baer tərəfindən hüceyrə nəzəriyyəsinin yaradılması tarixi Hələ 1827-ci ildə Karl Baer məməlilərdə yumurtanı kəşf etdi, məməlilərin inkişafının mayalanmış yumurtadan başladığını sübut etdi. Bu o deməkdir ki, hər hansı bir orqanizmin inkişafı bir mayalanmış yumurtadan başlayır, hüceyrə inkişaf vahididir.
Hüceyrə nəzəriyyəsinin yaranma tarixi 1865-ci il İrsiyyət qanunları nəşr olundu (Q.Mendel). 1868 Nuklein turşuları aşkar edildi (F. Mişer) 1873 Xromosomlar aşkar edildi (F. Şnayder) 1874 Bitki hüceyrələrində mitoz aşkar edildi (İ. D. Çistyakov) 1878 Heyvan hüceyrələrinin mitoz bölünməsi aşkar edildi (V. Fleminq, P. İ. Peremezhko) Fleming - bölünmə zamanı xromosomların davranışı. 1882 Heyvan hüceyrələrində meyoz aşkar edildi (V.Fleminq) 1883 Cinsiyət hüceyrələrində xromosomların sayının somatik hüceyrələrdən iki dəfə az olduğu göstərildi (E.Van Beneden) 1887-ci il Bitki hüceyrələrində meyoz aşkar edildi (E.Strasburqer ) 1898-ci ildə Golgi hüceyrənin mesh aparatını, Golgi aparatını kəşf etdi. 1914 İrsiyyətin xromosom nəzəriyyəsi formalaşdırıldı (T.Morgan). 1924 Yer üzündə həyatın mənşəyi haqqında təbii-elmi nəzəriyyə nəşr olundu (A. İ. Oparin). 1953-cü il DNT-nin strukturu haqqında fikirlər formalaşdırıldı və onun modeli yaradıldı (D.Watson və F.Crick). 1961 Genetik kodun təbiəti və xassələri müəyyən edilir (F. Crick, L. Barnet, S. Benner).
Müasir hüceyrə nəzəriyyəsinin əsas müddəaları 1. Hüceyrə elementar canlı sistem, orqanizmlərin quruluş, həyat fəaliyyəti, çoxalma və fərdi inkişafı vahididir. 2. Bütün canlı orqanizmlərin hüceyrələri homoloji, quruluş və mənşəcə vahiddir. 3. Hüceyrə əmələ gəlməsi. Yeni hüceyrələr yalnız əvvəllər mövcud olan hüceyrələrin bölünməsi nəticəsində yaranır. 4. Hüceyrə və orqanizm. Hüceyrə müstəqil bir orqanizm ola bilər (prokaryotlar və birhüceyrəli eukariotlar). Bütün çoxhüceyrəli orqanizmlər hüceyrələrdən ibarətdir. 5. Hüceyrələrin funksiyaları. Hüceyrələrdə maddələr mübadiləsi, qıcıqlanma və həyəcanlılıq, hərəkət, çoxalma və diferensiallaşma həyata keçirilir. 6. Hüceyrə təkamülü. Hüceyrə təşkilatı həyatın başlanğıcında yarandı və nüvəsiz formalardan (prokaryotlar) nüvə formalarına (eukariotlar) qədər uzun bir təkamül yolu keçdi.
HİSTOLOJİ NÜMUNƏLƏRİN MİKROSKOPİKASI ÜSULLARI 1. İşıq mikroskopiyası. 2. Ultrabənövşəyi mikroskopiya. 3. Floresan (lüminessent) mikroskopiya. 4. Faza kontrastlı mikroskopiya. 5. Qaranlıq sahə mikroskopiyası. 6. Interferens mikroskopiyası 7. Polarizasiya mikroskopiyası. 8. Elektron mikroskopiyası. 17
Mikroskop n Bu optik alət kiçik obyektləri müşahidə etməyə imkan verir. Şəklin böyüdülməsinə obyektiv linzalar və göz qapaqları sistemi vasitəsilə nail olunur. Güzgü, kondensator və diafraqma işıq axını istiqamətləndirir və obyektin işıqlandırılmasını tənzimləyir. Mikroskopun mexaniki hissəsinə aşağıdakılar daxildir: ştativ, obyekt masası, makro və mikrometr vintləri, boru tutacağı. on səkkiz
Mikroskopiyanın xüsusi üsulları: - faza-kontrast mikroskop - (canlı ləkələnməmiş cisimlərin tədqiqi üçün) - mikroskop canlı və ləkəsiz obyektləri tədqiq etməyə imkan verir. İşıq rəngli obyektlərdən keçdikdə işıq dalğasının amplitudası, rəngsiz cisimlərdən keçəndə işıq dalğasının fazası dəyişir ki, bu da faza-kontrast və interferensiya mikroskopiyasında yüksək kontrastlı təsvirin alınması üçün istifadə olunur. - qaranlıq sahə mikroskopu (canlı ləkəsiz obyektləri öyrənmək üçün). Boyanmamış materialın ziddiyyətli strukturlarını vurğulayan xüsusi bir kondansatör istifadə olunur. Qaranlıq sahə mikroskopiyası canlı obyektləri müşahidə etməyə imkan verir. Müşahidə olunan obyekt qaranlıq sahədə işıqlandırılmış kimi görünür. Bu zaman işıqlandırıcıdan gələn şüalar obyektə yan tərəfdən düşür və mikroskopun linzalarına yalnız səpələnmiş şüalar daxil olur. 19
Mikroskopiyanın xüsusi üsulları Luminescent mic-p (canlı ləkəsiz cisimlərin tədqiqi üçün) Mikroskopiya floresan (lüminessent) obyektləri müşahidə etmək üçün istifadə olunur. Floresan mikroskopda güclü mənbədən gələn işıq iki filtrdən keçir. Bir filtr nümunənin qarşısındakı işığı bloklayır və nümunəni həyəcanlandıran dalğa uzunluğunun işığını flüoresan etməyə imkan verir. Digər filtr floresan obyektin yaydığı dalğa uzunluğunun işığının keçməsinə imkan verir. Beləliklə, flüoresan cisimlər bir dalğa uzunluğunun işığını udur və spektrin başqa bir bölgəsində işıq saçır. -ultrabənövşəyi qabiliyyəti m-pa) mic-p (rezolyusiyanı artırır -polyarizasiya mikrofon-p (molekulların nizamlı düzülüşü ilə tədqiqat obyektləri üçün - skelet, əzələ, kollagen lifləri və s.) mikroskopiya - rəngsiz anizotrop strukturların təsvirinin formalaşması ( məsələn kollagen lifləri və miofibrillər kimi).20
Mikroskopiyanın xüsusi üsulları - müdaxilə mikroskopiyası (hüceyrələrdə quru qalığı təyin etmək, obyektlərin qalınlığını təyin etmək üçün) - mikroskopiya faza-kontrast və qütbləşmə mikroskopiyasının prinsiplərini özündə birləşdirir və ləkələnməmiş cisimlərin kontrast şəklini almaq üçün istifadə olunur. Xüsusi müdaxilə optikləri (Nomarsky optikləri) diferensial müdaxilə kontrastlı mikroskoplarda tətbiq tapmışdır. C. Elektron mikroskopiya: -ötürmə (ötürülmə yolu ilə cisimlərin öyrənilməsi) -skan edilməsi (cisimlərin səthinin öyrənilməsi) Nəzəri olaraq ötürülmə EM-nin ayırdetmə qabiliyyəti 0,002 nm-dir. Müasir mikroskopların real ayırdetmə qabiliyyəti 0,1 nm-ə yaxınlaşır. Bioloji obyektlər üçün praktikada EM qətnaməsi 2 nm-dir. 21
Xüsusi Mikroskopiya Texnikaları Transmissiya elektron mikroskopu, vakuumda katod filamentinin buraxdığı elektronların keçdiyi sütundan ibarətdir. Halqa maqnitləri ilə fokuslanmış elektron şüa hazırlanmış nümunədən keçir. Elektron səpilmənin xarakteri nümunənin sıxlığından asılıdır. Nümunədən keçən elektronlar fokuslanır, flüoresan ekranda müşahidə edilir və foto lövhədən istifadə edərək qeydə alınır. Tədqiq olunan obyektin səthinin üçölçülü görüntüsünü almaq üçün skan edən elektron mikroskopdan istifadə edilir. Hüceyrə membranlarının daxili quruluşunu öyrənmək üçün çipləmə üsulu (dondurma-yarılma) istifadə olunur. Hüceyrələr krioprotektorun iştirakı ilə maye azot temperaturunda dondurulur və çiplər hazırlamaq üçün istifadə olunur. Parçalanma təyyarələri lipid ikiqatının hidrofobik ortasından keçir. Membranların açıq daxili səthi platinlə kölgələnir, nəticədə əldə edilən replikalar skan edilmiş EM-də öyrənilir. 22
Xüsusi (qeyri-mikroskopik) üsullar: 1. Sito- və ya histokimya - mahiyyəti müxtəlif maddələrin (zülalların, fermentlərin, yağların, karbohidratların, liflərin) miqdarını müəyyən etmək üçün hüceyrələrdə və toxumalarda yüngül son məhsulla ciddi spesifik kimyəvi reaksiyaların istifadəsidir. və s.). İşıq və ya elektron mikroskop səviyyəsində tətbiq oluna bilər. 2. Sitopotometriya - üsul 1 ilə birlikdə istifadə olunur və sitohistokimyəvi üsulla müəyyən edilmiş zülalların, fermentlərin və s.-nin kəmiyyətini müəyyən etməyə imkan verir 3. Avtoradioqrafiya - tərkibində kimyəvi elementlərin radioaktiv izotopları olan maddələrin orqanizmə yeridilməsi. Bu maddələr hüceyrələrdə metabolik proseslərə daxil edilir. Lokalizasiya, orqanlarda bu maddələrin sonrakı hərəkəti histoloji preparatlarda radiasiya ilə müəyyən edilir, bu preparata tətbiq olunan foto emulsiya ilə tutulur. 4. Rentgen şüalarının difraksiya analizi - hüceyrələrdə kimyəvi elementlərin miqdarını təyin etməyə, bioloji mikro obyektlərin molekulyar quruluşunu öyrənməyə imkan verir. 24 5. Morfometriya - biolun ölçüsünün ölçülməsi. hüceyrə və subhüceyrə səviyyələrində strukturlar.
Xüsusi (qeyri-mikroskopik) üsullar 6. Mikrourgiya - mikroskop altında mikromanipulyatorla çox incə əməliyyatların aparılması (nüvə transplantasiyası, hüceyrələrə müxtəlif maddələrin yeridilməsi, biopotensialların ölçülməsi və s.) 6. Hüceyrə və toxumaların kultivasiya üsulu - in. müxtəlif bədən toxumalarına implantasiya edilmiş qida mühitində və ya diffuziya kameralarında. 7. Ultrasentrifuqa - müxtəlif sıxlıqlı məhlullarda sentrifuqasiya yolu ilə hüceyrələrin və ya hüceyrəaltı strukturların fraksiyalaşdırılması. 8. Eksperimental üsul. 9. Toxuma və orqan transplantasiyası üsulu. 25
Fiksasiya hüceyrələrin, toxumaların və orqanların quruluşunu qoruyur, onların bakterial çirklənməsinin və fermentativ həzminin qarşısını alır, kimyəvi çarpaz əlaqə vasitəsilə makromolekulları sabitləşdirir. 32
Fiksinq maye formalin, spirtlər, glutaraldehid - Ən çox yayılmış fiksatorlar; Cryofixation - Strukturların ən yaxşı qorunması nümunələrin maye azotda (-196 ° C) ani dondurulması ilə təmin edilir; Liyofilizasiya - kiçik toxuma parçaları metabolik prosesləri dayandıran sürətli dondurmaya məruz qalır. Susuzlaşdırma - suyun çıxarılmasının standart proseduru artan gücü olan spirtlərdə dehidrasiyadır (70-dən 60% -ə qədər). Doldurma - parçanı davamlı edir, kəsmə zamanı əzilməsinin və qırışmasının qarşısını alır, standart qalınlıqda kəsiklər almağa imkan verir. Ən çox yayılmış yerləşdirmə mühiti parafindir. Celloidin, plastik media və qatranlar da istifadə olunur. 33
Dehidrasiya sabit toxumanı yerləşdirmə mühitinə nüfuz etməyə hazırlayır. Fiksasiyadan sonra canlı toxumadan su, eləcə də fiksasiya qarışıqlarından (əksər fiksatorlar sulu məhlullardır) su tamamilə çıxarılmalıdır. Suyun çıxarılması üçün standart prosedur, 60 ° -dən 100 ° -ə qədər artan spirtlərdə susuzlaşdırmadır. 34
Doldurma bölmələrin hazırlanmasından əvvəl olan zəruri prosedurdur. Doldurma parçanı davamlı edir, kəsmə zamanı əzilməsinin və qırışmasının qarşısını alır, standart qalınlıqda nazik kəsiklər əldə etməyə imkan verir. Ən çox yayılmış yerləşdirmə mühiti parafindir. Celloidin, plastik media və qatranlar da istifadə olunur. 35
Dönər mikrotom. 40 n Üzərində bir orqan parçası olan bloklar daşınan obyekt tutacağına bərkidilir. Aşağı salındıqda, ardıcıl bölmələr bıçaqda qalır, onlar bıçaqdan çıxarılır və sonrakı emal və mikroskopiya üçün bir şüşə slaydda quraşdırılır.
Histosection boyanma üsulları: n Nüvə (əsas): n hematoksilin - ləkələr n n n n nüvələr mavi; dəmir hematoksilin; azur II (bənövşəyi rəngdə); karmin (qırmızı rəngdə); safranin (qırmızı); metil mavisi (maviyə qədər); toluidin (mavi rəngdə); tionin (mavi rəngdə). n Sitoplazmik- (turşu): n eozin - çəhrayı rəngdə; n eritrozin; n narıncı "G" ; n turş fuchsin - qırmızıya qədər; n pikrik turşusu - sarı; n Konqo - qırmızı - qırmızı 44
Histoseksiyaların boyanması üçün XÜSUSİ Üsullar n Sudan III – lipidlərin və yağların narıncı rəngdə boyanması; n osmik turşu - lipidlərin və yağların qara rəngdə rənglənməsi; n orcein - elastik liflərin qəhvəyi rənglənməsi; n gümüş nitrat - tünd qəhvəyi rəngdə sinir elementlərinin hopdurulması. 45
Hüceyrə strukturları: n OXYPHILIAn turş boyalarla çəhrayı rəngə boyama qabiliyyəti n Bazofil əsas boyalarla mavi rəngə boyanma qabiliyyəti n Neytrofiliya - n bənövşəyi turşu və əsas boyalarla boyama qabiliyyəti. 47
1
Hüceyrə n sitoplazmadan, nüvədən, membrandan ibarət elementar canlı sistemdir və heyvan və bitki orqanizmlərinin inkişafı, quruluşu və həyatı üçün əsasdır.
Qlikokaliks zülalla əlaqəli saxaridlərdən və lipidlə bağlı saxaridlərdən ibarət epimembran kompleksidir. Funksiyalar n Qəbul (hormonlar, sitokinlər, mediatorlar və antigenlər) n Hüceyrələrarası qarşılıqlı əlaqə (qıcıqlanma və tanınma) n Parietal həzm (bağırsaq sərhəd hüceyrələrinin mikrovilliləri)
Sitolemmanın funksiyaları: - sərhədləşdirici; - maddələrin hər iki istiqamətdə aktiv və passiv daşınması; - reseptor funksiyaları; qonşu hüceyrələrlə əlaqə.
Əsas Tədqiqat obyektləri histoloji preparatlardır və əsas tədqiqat üsulu mikroskopiyadır.
Histoloji preparat kifayət qədər şəffaf (nazik) və kontrastlı olmalıdır. Həm canlı, həm də ölü (sabit) strukturlardan hazırlanır. Hazırlıq hüceyrələrin süspansiyonu, smear, iz, film, ümumi hazırlıq və nazik bir kəsik ola bilər.
Mikroskopik tədqiqatlar üçün histoloji preparatların hazırlanması prosesi aşağıdakı əsas mərhələləri əhatə edir: 1) materialın götürülməsi və bərkidilməsi; 2) materialın sıxılması; 3) bölmələrin hazırlanması; 4) boyanma və ya ziddiyyətli hissələr; 5) bölmələrin yekunu.
Boyanma üçün müxtəlif pH dəyərləri ilə xüsusi histoloji boyalar istifadə olunur: asidik, neytral və əsas. Onların ləkələdiyi strukturlar müvafiq olaraq oksifilik, neytrofil (heterofilik) və bazofil adlanır.
Histologiya elmi hansı metodlardan istifadə edir? Onlar kifayət qədər çoxdur və müxtəlifdir:
Mikroskopiya.
İşıq mikroskopiyası. Müasir mikroskoplar yüksək ayırdetmə qabiliyyətinə malikdir. Çözünürlük ayrı-ayrılıqda görünə bilən iki bitişik nöqtə arasındakı ən kiçik məsafə (d) kimi müəyyən edilir. Bu məsafə işığın dalğa uzunluğundan (λ) asılıdır və düsturla ifadə edilir: d = 1/2 λ.
Spektrin görünən hissəsinin minimum dalğa uzunluğu 0,4 µm-dir. Buna görə də, işıq mikroskopunun həlletmə gücü 0,2 µm, ümumi böyütmə isə 2500 dəfəyə çatır.
ultrabənövşəyi mikroskopiya . Ultrabənövşəyi işığın dalğa uzunluğu 0,2 µm-dir, buna görə də ultrabənövşəyi mikroskopun ayırdetmə qabiliyyəti 0,1 µm-dir, lakin ultrabənövşəyi şüalanma görünməz olduğundan, tədqiq olunan obyekti müşahidə etmək üçün lüminesans ekran lazımdır.
Floresan (lüminessent) mikroskopiya. Qısa dalğalı (görünməz) şüalanma, bir sıra maddələr tərəfindən udularaq, spektrin görünən hissəsinə çevrilərək daha uzun dalğa uzunluğu ilə işıq yayan elektronlarını həyəcanlandırır. Beləliklə, mikroskopun ayırdetmə qabiliyyətinin artması əldə edilir.
Faza kontrast mikroskopiyası rəngsiz obyektləri buraxmağa imkan verir.
Polarizasiya mikroskopiyası kollagen lifləri kimi histoloji strukturların arxitektonikasını öyrənmək üçün istifadə olunur.
elektron mikroskopiyası on minlərlə dəfə böyüdülmüş obyektləri tədqiq etməyə imkan verir.
Mikrofotoqrafiya və mikrofilmoqrafiya . Bu üsullar fotoşəkillərdə sabit obyektləri və hərəkətdə olan canlı mikroskopik obyektləri öyrənməyə imkan verir.
Keyfiyyət və kəmiyyət tədqiqatlarının üsulları.
Histo –və sitokimya , o cümlədən kəmiyyət, öyrənilən obyektlərin toxuma, hüceyrə və hüceyrəaltı səviyyələrdə keyfiyyətcə təhlilinə imkan verir.
Sitospekttrofotometriya Müəyyən dalğa uzunluğunun işığının onlarla əlaqəli boya tərəfindən udulması əsasında hüceyrə və toxumalarda müəyyən bioloji maddələrin kəmiyyət tərkibini öyrənməyə imkan verir.
Diferensial sentrifuqasiya bir-birindən kütləsi ilə fərqlənən hüceyrələrin məzmununu ayırmağa imkan verir.
Rentgenoqrafiya O, metabolik prosesə radioaktiv etiketin (məsələn, radioaktiv yod, H³-timidin və s.) daxil edilməsinə əsaslanır.
Morfometriya göz qapaqlarından - və obyekt-mikrometrlərdən və xüsusi torlardan istifadə edərək hüceyrələrin sahələrini və həcmini, onların nüvələrini və orqanoidlərini ölçməyə imkan verir.
Kompüter tətbiqi rəqəmsal materialın avtomatik emalı üçün.
Toxuma kulturası üsulu orqanizmdən kənarda hüceyrə və toxumaların canlılığının və bölünməsinin saxlanmasıdır. Bunun üçün hüceyrələrin həyati fəaliyyəti üçün bütün lazımi şəraitin yaradıldığı qida mühiti olan xüsusi qablar istifadə olunur. Bu metoddan istifadə etməklə hüceyrələrin differensiasiyasını və funksional inkişafını, onların bədxassəli transformasiyasının qanunauyğunluqlarını və şiş prosesinin inkişafını, hüceyrələrarası qarşılıqlı əlaqəni, virus və mikroorqanizmlərin hüceyrə və toxumaların zədələnməsini, dərmanların maddələr mübadiləsinə təsirini öyrənmək mümkündür. hüceyrə və toxumalarda gedən proseslər və s.
İntravital (həyati) boyanma faqositoz hadisələrini və makrofaqların fəaliyyətini, böyrək borularının filtrasiya qabiliyyətini və s.
Doku transplantasiyası üsulu. Bu üsul başqa orqanizmə köçürüldükdə hüceyrələrin davranışını və onların morfofunksional vəziyyətini öyrənmək üçün istifadə olunur. Məsələn, bu üsul heyvanları öldürücü dozada radiasiyaya məruz qoymaq üçün istifadə olunur.
Mikromanipulyasiya. Bu üsul molekulyar biologiyada, gen mühəndisliyində, həmçinin klonlaşdırmada mikromanipulyatordan istifadə edərək haploid xromosom dəsti olan yumurtadan nüvə çıxarıldıqda və diploid xromosom dəsti olan somatik hüceyrə nüvəsi köçürüldükdə istifadə edilmişdir.
Mövcuddur bir çox tədqiqat metodları, bunlar arasında aşağıdakılar fərqlənir: film və video çəkilişdən istifadə edərək canlı embrionların müşahidəsi (əsasən təcrübədə istifadə olunur). Bunun üçün embrionun inkişaf etdiyi termal kameraya qoşulan xüsusi mikrofotoqrafik cihaz istifadə olunur. Toyuq embrionunun inkişafını öyrənərkən, məsələn, şəffaf bir plaka ilə bağlanan qabıqda bir pəncərə düzəldirsiniz. Bu üsul inkişaf prosesində embrionların forma və ölçülərindəki dəyişikliklərin dinamikasını izləməyə və dəqiqləşdirməyə imkan verdi.
Sabit Dilim Metodu işıq və elektron mikroskopiya, historradioavtoqrafiya, histo və immunositokimyadan istifadə edən embrionlar. Bu üsullar embrionun hissələrinin inkişaf dinamikasında toxuma və hüceyrədaxili dəyişiklikləri təhlil etməyə imkan verir. Histo- və immunositokimyəvi metodların köməyi ilə embrion hüceyrələrində baş verən biokimyəvi proseslər - DNT, RNT, zülallar, spesifik reseptor zülalları və s. sintezi öyrənilir.Bu üsullardan istifadə etməklə inkişafda hüceyrə və toxumaların differensiasiyası haqqında mühüm məlumatlar əldə edilmişdir. embrionların və döllərin.
İşarələmə üsulu, 1925-ci ildə W.Foqt (1888-1941) tərəfindən təklif edilmiş, inkişaf etməkdə olan embrionda hüceyrə hərəkətlərini öyrənməyə imkan verir. Bunun üçün embrionlar üçün toksik olmayan markerlər (məsələn, neytral qırmızı, kömür hissəcikləri), həmçinin müəyyən zülallara qarşı antikorlar istifadə olunur. Antikorları istifadə edərkən, onların flüoresan boya və mikrob zülalları ilə birləşmə qabiliyyəti istifadə olunur. Floresan mikroskopiyanın köməyi ilə boyanın paylanması izlənilir və embrionun inkişaf edən toxumalarında zülal sintezinin dinamikası öyrənilir.
Mikrocərrahiyyə üsulları 20-ci əsrin əvvəllərində G. Spemann (1869-1941) məktəbinin nümayəndələri tərəfindən hazırlanmışdır. Bunlara daxildir: heyvan yumurtalarının qabıqlarının çıxarılması, bir embrionun hissələrinin digərinə köçürülməsi və s. hüceyrələr. Transplantasiya bir növ mikrocərrahiyyə olaraq hüceyrə miqrasiyasının yollarını və toxuma inkişaf mənbələrini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Eyni zamanda, embrionun yeri, məsələn, bildirçin, uzaq yerin yerinə toyuq embrionunun eyni yerinə köçürülür. Bıldırcın hüceyrəsi nüvələri xarakterik bir quruluşa malikdir və buna görə də toyuq embrion hüceyrələrinin nüvələrindən fərqlənir.
eksplantasiya- embrionun kiçik bir sahəsinin kəsilməsi və süni mühitdə becərilməsi. Bu üsuldan istifadə edərək, embrionun müəyyən bir sahəsindən toxumaların inkişaf mənbələri haqqında məlumat əldə etmək və inkişafın histogenetik nümunələrini müəyyən etmək mümkündür.
Nüvə transplantasiyası- embrionların klonlaşdırılması üsulu. Məsələn, nüvəsi ultrabənövşəyi şüa ilə təsirsiz hala salınmış qurbağa yumurtasına caynaqlı qurbağanın bağırsaq epitelinin hüceyrələrindən nüvələrin köçürülməsi yeni fərdlərin meydana gəlməsinə səbəb oldu (Gerdon təcrübələri). Bu təcrübələr yüksək onurğalıların klonlaşdırılmasının əsasını qoydu və məşhur qoyun Dollinin (1997-ci ildə) yaranmasına kömək etdi. Oxşar embrioloji təcrübələr inandırıcı şəkildə sübut etdi ki, somatik hüceyrələrin nüvələrində yeni bir orqanizmin inkişafı üçün genetik məlumatların tam dəsti var.
Ən son nailiyyət eksperimental embriologiya in vitro gübrələmə üsulunun inkişafı idi. Sonsuzluğun müalicəsinin əsasını in vitro şəraitdə doğulan embrionların uşaqlıq yoluna nəqli təşkil edir. 1973-cü ildə L.Şetls (ABŞ) sonsuz qadının yumurtalığından yumurtlama öncəsi yumurtanı çıxararaq ərinin spermatozoidləri ilə mayalandırmışdır. Bu, sonsuzluğun müalicəsi üçün insan embrionlarının köçürülməsi texnikasının başlanğıcı idi. Lakin yalnız 1978-ci ildə Böyük Britaniyada 8 blastomer mərhələsində olan insan embrionunun sonsuz qadının uşaqlıq yoluna uğurlu transplantasiyası nəticəsində 2,5 günlük kultivasiyadan sonra dünyada ilk dəfə çəkidə olan “probuk” uşaq doğuldu. 2700 q çıxdı.