طرق البحث النسيجي تستخدم لدراسة بنية ووظيفة الخلايا والأنسجة للإنسان والحيوان والنبات في الظروف العادية والمرضية والتجريبية. أساس G.M. و. هو - مجموعة من التقنيات المنهجية المستخدمة في تصنيع مستحضرات الخلايا والأنسجة لفحصها المجهري. يمكن إجراء الدراسة المجهرية للخلايا والأنسجة بطريقتين رئيسيتين ، اعتمادًا على حالة الكائن قيد الدراسة: دراسة الخلايا والأنسجة الحية ، ودراسة الخلايا والأنسجة غير الحية التي تحتفظ ببنيتها بسبب التثبيت الخاص. التقنيات. تتيح دراسة الكائنات الحية - الحيوية (فوق الحجاجية) - مراقبة العمليات الفسيولوجية في الخلايا والأنسجة ، وهيكلها داخل الرحم. يتم إجراؤه على الخلايا المعلقة بحرية في وسط سائل (خلايا الدم ، الخلايا الظهارية من الكشط ، إلخ) ، وكذلك على الخلايا والأنسجة المزروعة على وسائط مغذية خاصة. يمكن أن يكون موضوع الملاحظة داخل الحجاج عبارة عن أغشية أنسجة رقيقة وشفافة (غشاء سباحة). في الدراسات التجريبية ، يتم استخدام طريقة النوافذ البيولوجية (زرع غرف شفافة) ودراسة زراعة الأنسجة في بيئة شفافة طبيعية ، على سبيل المثال ، في الغرفة الأمامية لعين الحيوانات. اعتمادًا على المهمة المطروحة ، يتم استخدام طرق الفحص المجهري الخاصة المختلفة في الدراسات الحيوية: المجال المظلم ، تباين الطور ، التألق ، الاستقطاب ، الأشعة فوق البنفسجية. تستخدم الأساليب النسيجية الحيوية بشكل أساسي في البحوث البيولوجية والطبية الحيوية. استخدامها على نطاق واسع محدود بسبب الصعوبات التقنية الكبيرة المرتبطة بخصائص الأنسجة الباقية. في البحث الطبي ، وخاصة في ممارسة مختبرات علم الأمراض التشريحية ، يتم استخدام طرق دراسة الأشياء الثابتة. الغرض من التثبيت هو الحفاظ على التركيب الداخلي للخلايا والأنسجة عن طريق تعريضها سريعًا لعوامل كيميائية تمنع تطور تغييرات ما بعد الوفاة. يعتمد اختيار طريقة التثبيت على أهداف الدراسة وخصائص المادة المراد إصلاحها. وبالتالي ، يتم استخدام مخاليط التثبيت المحتوية على أملاح المعادن الثقيلة (على سبيل المثال ، المتسامي) لتحديد الهياكل الخلوية الرقيقة ، وأفضل مثبت للأغراض الخلوية هو رابع أكسيد الأوزميوم ، والذي يستخدم غالبًا في الفحص المجهري الإلكتروني. المثبت العالمي هو الفورمالديهايد ، ويستخدم في شكل محلول فورمالين 10٪. لكي تكون موحدة وكاملة ، يجب أن تكون قطع الأنسجة صغيرة ، ويجب أن يكون حجم سائل التثبيت أكبر بعدة مرات من حجم المادة المراد إصلاحها. بعد التثبيت ، عادة ما يتم غسل القطع بالماء أو الكحول. تتم إزالة مكونات الأنسجة الصلبة (على سبيل المثال ، رواسب الكالسيوم) باستخدام تقنيات إزالة الكلس. الطريقة الأسرع والأسهل لتحضير قسم الأنسجة ، والتي تُستخدم عادةً في التشخيص السريع ، هي القطعة والحصول على أقسام الأنسجة في مشراح التجميد. ومع ذلك ، من الصعب الحصول على أقسام رقيقة بما فيه الكفاية ، وكذلك أجزاء من الأجسام الصغيرة والأنسجة المتحللة. لذلك ، يتم سكب قطع من الأنسجة ، كقاعدة عامة ، في وسط مانع للتسرب - أو السيلويدين. يتم تجفيف المادة الثابتة في كحولات ذات قوة متزايدة ، وتمريرها من خلال مذيب وسيط (زيلين أو بارافين ، وكحول إيثر للسيلويدين) ومشبعة بالبارافين أو السيلويدين. في البارافين يسمح لك بالحصول على أقسام أرق (من 5-8 إلى 1-2 ميكرون) من السيلويدين. يتم تحضير أقسام الفحص المجهري باستخدام شريحة أو مشراح دوار. أقسام رفيعة للغاية (سمك من 90-100 إلى 5-15 نانومتر) اللازمة للدراسات المجهرية الإلكترونية على شريحة فوقية. تُستخدم الموجات فوق الصوتية أيضًا في الفحص المجهري الضوئي للحصول على أقسام شبه رقيقة. المقاطع المحضرة ملطخة لتسليط الضوء بوضوح على تراكيب الخلايا والأنسجة التي ترى الأصباغ بشكل مختلف. الأصباغ الرئيسية - قواعد التلوين وأملاحها (، أزرق تولويدين ، أزور ، بسمارك بني) - تلطخ ما يسمى الهياكل القاعدية (نواة الخلية ، النسيج الضام). الأصباغ الحمضية - أحماض التلوين وأملاحها (حمض البكريك ، الإريثروسين) - تلطيخ الهياكل الحمضية أو المؤكسدة (السيتوبلازم الخلوي ، الكولاجين ، الألياف المرنة). يجب تمييز التلوين عن طريق التشريب - طريقة خاصة تعتمد على مناطق معينة من الخلايا والأنسجة لاستعادة المعادن الثقيلة (على سبيل المثال ، الفضة والذهب والأوزميوم) من أملاحها وبالتالي الحصول على لون مكثف. يتم الانتهاء من تحضير المستحضر النسيجي عن طريق وضعه في وسائط تضمن الحفاظ على هياكل الكائن ولونه وشفافيته. في أغلب الأحيان ، تستخدم الراتنجات العضوية لهذه الأغراض ، على سبيل المثال.
1. موسوعة طبية صغيرة. - م: الموسوعة الطبية. 1991-1996 2. الإسعافات الأولية. - م: الموسوعة الروسية الكبرى. 1994 3. قاموس موسوعي للمصطلحات الطبية. - م: الموسوعة السوفيتية. - 1982-1984.
انظر ما هي "طرق البحث النسيجي" في القواميس الأخرى:
المناهج المنهجية وطرق البحث في علم التشريح البشري- يسمع المرء أحيانًا أنه لم يتبق شيء في علم التشريح للدراسة والبحث ، فمن المفترض أن جميع الموضوعات قد استنفدت ، وقد تمت دراسة كل ما يمكن دراسته بالفعل ، وتم حل جميع المشكلات. وكأن كل ما يتعلق ببنية جسم الإنسان ... ... مسرد للمصطلحات والمفاهيم في علم التشريح البشري
أبحاث معملية- بحث معمل. انظر الدراسات المعملية. إن أهم شرط للحصول على نتائج بحث موثوقة هو الاختيار الصحيح لأشياء التحليل واختيارها في الوقت المناسب وصياغة مشكلة البحث. قواعد أخذ العينات ... أمراض الأسماك: دليل
I Medicine Medicine هو نظام للمعرفة والممارسة العلمية يهدف إلى تعزيز الصحة والحفاظ عليها وإطالة عمر الناس والوقاية من الأمراض البشرية وعلاجها. لإنجاز هذه المهام ، يدرس M. الموسوعة الطبية
طرق دراسة الكائنات المختلفة باستخدام المجهر. في علم الأحياء والطب ، تتيح هذه الأساليب إمكانية دراسة بنية الأجسام المجهرية التي تتعدى أبعادها دقة العين البشرية. أساس M.m.i. يشكل ....... الموسوعة الطبية
- (الخلية النسيجية النسيجية + عقيدة الشعارات اليونانية) تعتمد على الدراسة باستخدام مجهر للسمات الهيكلية للخلايا والتركيب الخلوي لأعضاء الأنسجة وسوائل الجسم للإنسان والحيوان في العمليات الطبيعية والمرضية. جيم و ... ... الموسوعة الطبية
علم الأنسجة (نسيج الأنسجة اليوناني + تعليم الشعارات) هو علم طبي حيوي يدرس تطور الأنسجة وتطورها في الجسم (تكوين الأنسجة) والبنية والوظائف والتفاعل بين الحيوانات متعددة الخلايا والبشر. الموضوع الرئيسي لدراسة G. ... ... الموسوعة الطبية
الفرج (الفرج ؛ الفرج الأنثوي) الأعضاء التناسلية الأنثوية الخارجية (وفقًا للتسمية التشريحية الدولية للمنطقة التناسلية الأنثوية). علم التشريح وعلم وظائف الأعضاء. يقع الفرج (الشكل 1) خارج عظام العانة في الحوض ويلتصق بهما ... ... الموسوعة الطبية
دراسة التغيرات التي تحدث في الجسم بسبب العمليات المرضية المختلفة ، ويهدف من خلال طرق البحث المتأصلة فيه ، إلى تحديد عمليات المرض هذه ، وأهميتها فيما يتعلق بالصورة السريرية للمرض والوفاة ... ... القاموس الموسوعي F.A. Brockhaus و I.A. إيفرون
I خزعة (الحياة اليونانية + رؤية opsis ، الإدراك البصري) أخذ الأنسجة أو الأعضاء أو تعليق الخلية داخل الرحم للفحص المجهري لأغراض التشخيص ، وكذلك لدراسة ديناميات العملية المرضية والتأثير ... ... الموسوعة الطبية
العلم الذي يدرس أنسجة الحيوانات. النسيج عبارة عن مجموعة من الخلايا المتشابهة في الشكل والحجم والوظيفة وفي منتجاتها الأيضية. في جميع النباتات والحيوانات ، باستثناء الأكثر بدائية ، يتكون الجسم من أنسجة ، ... ... موسوعة كولير
- (من النسيج اليوناني والمعرفة اليونانية والكلمة والعلم) فرع من علم الأحياء يدرس بنية أنسجة الكائنات الحية. يتم ذلك عادةً عن طريق تشريح الأنسجة إلى طبقات رقيقة واستخدام مبضع. على عكس علم التشريح ، ...... ويكيبيديا
كتب
- أمراض المايلوما المتعددة وخلايا البلازما ، راماسامي كارتيك ، لونيل ساجار. يقدم الكتاب الجوانب السريرية الرئيسية للورم النخاعي المتعدد وأمراض خلايا البلازما الأخرى. يتم وصف الدراسات المختبرية والتسبب في المرض والتشخيص والعلاج. في الثانية ...
يمكن أن تكون كائنات الدراسة ثابتة (ميتة) أو خلايا وأنسجة حية.
لدراسة البنية المجهرية للمواد الخام ومنتجات الثروة الحيوانية ، كقاعدة عامة ، يتم استخدام الخلايا والأنسجة الثابتة. الاستعدادات مؤقتة ، مخصصة لدراسة واحدة ، ودائمة ، يمكن تخزينها وفحصها بشكل متكرر. بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدام المستحضرات الكاملة أو الكاملة.
عقاقير مؤقتةيمكن طهيها بسرعة نسبيًا ؛ لهذا ، يتم إصلاح المادة قيد الدراسة ويتم الحصول على أقسام على مشراح متجمد ؛ في حالة عدم وجودها ، يمكن صنع جزء رفيع من الأنسجة أو العضو باستخدام مشرط أو شفرة. القسم الناتج ملطخ ، ويوضع على شريحة زجاجية ، ثم يتم وضع قطرة من الجلسرين وتغطيته بغطاء. للكشف عن النشا ، يتم استخدام محلول اليود الموجود في يوديد البوتاسيوم: يذوب 0.5 جرام من يوديد البوتاسيوم في كمية صغيرة من الماء ، ويضاف 1 جرام من اليود البلوري ويضاف الماء إلى 100 سم 3. يتم تطبيق بضع قطرات من الكاشف على قطعة رقيقة من النقانق والجبن وغيرها من المواد الموجودة على شريحة زجاجية ، ويتحول النشا إلى اللون الأزرق البنفسجي.
مجموع أو كامل الاستعداداتفحص دون الحصول على جزء من نسيج أو عضو. على سبيل المثال ، يتم وضع فيلم من الأنسجة تحت الجلد أو تحضير مسحوق لجذر النبات بعد التثبيت والغسيل والتلطيخ بين شريحة وساترة. لتحديد العناصر الهيكلية الفردية ، يتم انتزاع القطع الثابتة والملطخة من الأنسجة تحت الجلد أو الأنسجة العضلية الملساء بإبرة على شريحة زجاجية - تسمى هذه المستحضرات منتفخة. في بعض الحالات ، على سبيل المثال ، عند فحص غشاء شبكية العين من مقلة العين أو جلد الشرغوف ، بعد التثبيت والغسيل ، لا يتم إجراء التلوين ، لأن الخلايا تحتوي على شوائب عضوية (صبغة) لها لون طبيعي.
طريقة تحضير المستحضر النسيجي.الطريقة الرئيسية لدراسة الخلايا والأنسجة الثابتة هي النسيجية ، أي دراسة قسم الأنسجة الملطخة المحاطة بوسط خاص. للحصول على المقاطع ، يتم استخدام صب مادة الاختبار في البارافين أو السيلويدين ، مما يجعل من الممكن الحصول على مقاطع رقيقة (5-7 ميكرون أو 10-30 ميكرون ، على التوالي) ، للتحضير السريع للمقاطع (40-60 ميكرون) ، التجميد يتم استخدام التقنية.
المراحل الرئيسية في تحضير العينة النسيجية هي: أخذ العينات ، التثبيت ، الغسيل ، الجفاف ، التضمين في البارافين أو السيلويدين ، التلوين ، وضعه تحت غطاء.
اختيار عينةمع الأخذ بعين الاعتبار الغرض من الدراسة وهيكل المادة. يجب ألا يزيد حجم العينة عن 2.5-3.0 سم في المتوسط ويتم أخذ عينات الكبد والطحال مع كبسولة. يتم قطع أجزاء من الأذين من القلب ، نظرًا لأن الأغشية أرق من تلك الموجودة في البطينين ، ويمكن للمرء في أحد التحضير أن يرى العلاقة الطبوغرافية بين النخاب وعضلة القلب والشغاف. من الكلى ، العقد الليمفاوية ، الغدد الكظرية ، يتم قطع أجزاء من الأعضاء التي تتعمق في السطح بشكل عمودي على السطح بحيث يتم الكشف عن القشرة والنخاع عند التحضير. إذا كان من الضروري تحضير مستحضرات للأعضاء المعدلة ، يتم قطع أجزاء من مادة الاختبار على الحدود مع المنطقة المصابة بحيث يتم تضمين المنطقة الانتقالية للآفة في العينة. يجب قطع عينات من عضلات الهيكل العظمي بحيث تكون ألياف العضلات في مقاطع طولية وعرضية. يتم أولاً وضع عينات من عينات اللحم المفروم والجبن القريش والعينات المتفتتة الأخرى في قطعة من الشاش وربطها بخيط. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند فتح تجويف الصدر ، تنهار الرئتان بسبب المرونة ، مما يؤدي إلى فقدان الهواء بشكل كبير ، وبالتالي يتم إدخال أنبوب زجاجي أو مطاطي في القصبة الهوائية لأعضاء الجهاز التنفسي المستخرجة ، والتي يتم من خلالها حقن الهواء بشكل معتدل . يتم وضع رباط حريري على القصبة الهوائية أسفل الأنبوب المُدخَل ، ويتم ربط الحمولة من أجل الانغماس الكامل. لإصلاح الأمعاء ، يتم ضم جزء من العضو المخصص للتثبيت مبدئيًا بأربطة على كلا الجانبين. يتم تزويد العينات بملصقات ورقية سميكة توضح عدد وتاريخ أخذ العينات.
تثبيت،أولئك. يتم الحفاظ على العمارة الطبيعية (مدى الحياة) من أجل نقل البروتوبلازم الحي للهياكل إلى حالة غير متغيرة. يتجلى عمل المثبتات في حقيقة أنه نتيجة للعمليات الفيزيائية الحيوية ، يحدث تخثر لا رجعة فيه للبروتينات في الأنسجة والأعضاء. يتم غمر عينة الأنسجة المأخوذة من العضو في المثبت بأسرع ما يمكن ؛ يجب أن تكون نسبة حجم المادة وسائل التثبيت على الأقل 1: 9 (الشكل 3).
يؤدي التثبيت إلى بعض الضغط وتقليل حجم العينة. في أغلب الأحيان ، يتم استخدام 10-12 ٪ من الفورمالين والكحول الإيثيلي والأسيتون للتثبيت. لتحضير التركيز المحدد لسائل التثبيت ، يتم تخفيف 40٪ من الفورمالين بماء الصنبور. يستخدم الكحول الإيثيلي (100٪ مطلق أو 96٪) في الحالات التي يكون فيها من الضروري تحديد المواد التي تذوب في المثبتات المائية (على سبيل المثال ، الجليكوجين) في الأقسام. في الأسيتون ، يتم إصلاح المادة قيد الدراسة (على سبيل المثال ، الدماغ) لبضع ساعات فقط. عندما يحتوي العضو قيد الدراسة ، مثل أنسجة العظام ، على الجير ، يتم إجراء إزالة الكالسيوم أو التكلس. للقيام بذلك ، يتم إنزال قطعة صغيرة من العظم (من الأفضل تعليقها على خيط) في محلول مائي بنسبة 5-8٪ من حمض النيتريك ، والذي يتم تغييره مرتين إلى ثلاث مرات في اليوم. يتم الحكم على نتيجة إزالة الكلس عن طريق غرز إبرة رفيعة في العظم: إذا لم تكن هناك مقاومة ، يتم الانتهاء من إزالة الكلس. بعد هذا المؤيد-
تدفق مائى - صرفلإزالة كمية زائدة من المثبت ، على سبيل المثال ، بعد التثبيت بالفورمالين ، يتم الغسيل بماء الصنبور الجاري.
تجفيفأجريت لضغط المواد في الكحول الإيثيلي بتركيز متزايد: 50-70-100. لتحضير 50٪ و 70٪ كحول ، يتم تخفيف 96٪ كحول بالماء المقطر. لتحضير كحول 100٪ ، من الضروري تسخين كبريتات النحاس حتى تجف تمامًا وإضافة 96٪ كحول إيثيلي إلى المسحوق الأبيض المجفف. في كل تركيز من الكحول ، يتم الاحتفاظ بالمادة لمدة 1-24 ساعة ، اعتمادًا على حجم القطع ، وهيكل العضو ؛ في 70٪ كحول ، يمكن الاحتفاظ بالمادة لعدة أيام.
يملأيتم إجراؤه في وسط بحيث تصبح عينة الاختبار صلبة ، مما يجعل من الممكن الحصول على مقاطع رقيقة. للقيام بذلك ، استخدم البارافين (التشريب لمدة 1-4 ساعات) ، السيلويدين (التشريب لمدة ثلاثة أسابيع). عند الكشف عن الدهون ودراسة الأنسجة والأعضاء الرخوة ، يتم استخدام صب الجيلاتين.
شرائحتلقي على مزلقة أو الدوران ميكروتومات. يمكن تصنيع الأجزاء الرقيقة (5-7 ميكرون) من مادة مدمجة في البارافين. يتم تحضير أقسام بسمك 15-20 ميكرون من المادة المملوءة بالسيلويدين. لدراسة البنية المجهرية للمواد الخام والمنتجات من أصل حيواني ، كقاعدة عامة ، يتم استخدام تقنية التجميد. يؤدي ذلك إلى تسريع عملية تحضير المستحضر ، حيث يتم التخلص من المراحل الطويلة من الجفاف والسكب. بعد التثبيت والغسيل ، توضع قطع الجسم على مرحلة مبللة من مشراح متجمد ويتم الحصول على أقسام بسمك 40-60 ميكرومتر. يتم نقل المقاطع بفرشاة في الماء ، حيث يتم تصويبها ، مما يكتسب مظهر أنحف قطع رمادية.
قسم تلطيخأجريت لزيادة تباين الهياكل المختلفة في المستحضرات المعدة للفحص في المجهر الضوئي. في عملية التلوين ، تحدث عمليات كيميائية وفيزيائية معقدة ، لذلك ، عند اختيار طريقة ، يتم أخذ التقارب الانتقائي لهياكل الخلايا لبعض الأصباغ ذات الخصائص الفيزيائية والكيميائية المختلفة في الاعتبار.
وهناك أصباغ أساسية (قاعدية) وحمضية وخاصة. تسمى الهياكل الملطخة بالأصباغ الأساسية قاعدية ،الأصباغ الحمضية - محبة للحمض ، اليوزيني.
من الأصباغ الأساسية (القاعدية) ، يتم استخدام الهيماتوكسيلين ، الذي يلطخ كروماتين النواة والتراكيب الأخرى التي تحتوي على البروتين باللون الأزرق أو الأرجواني ؛ قرمزي ، تلوين اللب باللون الأحمر الفاتح ، الزعفران - الطلاء الأحمر الداكن ، الثيونين - الطلاء الأزرق.
من الأصباغ الحمضية ، يتم استخدام الأيوزين (بقع السيتوبلازم الوردي) ، وحمض البيكريك (الأصفر) ، والفوكسين (لون القرميد) ، والنيلي القرمزي (الأزرق).
عند دراسة البنية المجهرية للمواد الخام ومنتجات الماشية ، غالبًا ما يتم استخدام التلوين المشترك مع الهيماتوكسيلين ويوزين. للقيام بذلك ، يتم نقل أجزاء من الماء لمدة 1-3 دقائق إلى محلول الهيماتوكسيلين ؛ يغسل بالماء لمدة 20-30 دقيقة ، يوضع في محلول يوزين لمدة 3-5 دقائق ويغسل بالماء لمدة 3-5 دقائق. تتم إزالة الماء المتبقي بورق الترشيح ، ويتم وضع قطرة من الإيثانول بنسبة 96٪ لمدة 1-2 دقيقة ، وتجفيفه في محلول 25٪ من حمض الكربوليك في زيلين أو التولوين. ثم يتم تطبيق 1-2 قطرات من المسكن على الجرح وتغطيتها بغطاء.
من الأصباغ التي تحتوي على شوائب دهنية ملونة ، غالبا ما يستخدم السودان 111. لتحضير محلول صبغ في 95 سم 3 من 85٪ كحول إيثيلي ، يضاف 5 سم 3 من الأسيتون ويسكب مسحوق سودان 3 حتى يتم الحصول على محلول مشبع. يجب احتواء الصبغة بشكل زائد). يسخن الخليط إلى 50٪ C ويرشح. يتم وضع المقاطع التي تم الحصول عليها على مشراح التجميد في 50٪ إيثانول لمدة 1-2 دقيقة ، ثم في السودان 3 لمدة 25 دقيقة. تشطف المقاطع بنسبة 50٪ كحول ، وتُغسل بالماء المقطر وتُدمج في الجلسرين الجيلاتين.
قطرات من الدهون المحايدة تتحول إلى اللون البرتقالي بسبب انحلال سودان 3 في الدهون. يمكن أيضًا اكتشاف شوائب الدهون باستخدام حمض الأوسميك ، في حين أن الهياكل الدهنية ملطخة باللون الأسود.
الخلاصة تحت الغطاءيتم إجراؤها في بيئات لا تسمح بمرور الهواء وتكون قادرة على الحفاظ على القطع لفترة طويلة. يتم تجفيف المقاطع الملطخة في الكحوليات ذات القوة المتزايدة وتوضع تحت غطاء من خشب التنوب أو البلسم الكندي أو الجلسرين الجيلاتين (يجب ألا يتلامس المستحضر مع الكحوليات والزيلين).
تحضير عينات المجهر الإلكتروني.لدراسة الكائنات البيولوجية ، يتم استخدام نوعين من المجاهر الإلكترونية: الإرسال (الإرسال) والمسح (النقطية).
يعتمد مبدأ معالجة كائن لفحصه في مجهر إلكتروني ناقل على نفس مبادئ المجاهر الضوئية: أخذ العينات ، التثبيت ، الغسيل ، الجفاف ، السكب ، تحضير المقاطع الرقيقة ، التباين.
اختيار عينةيتم إجراؤها مع مراعاة الغرض من الدراسة وهيكل المادة ، وفقًا لنفس قواعد الفحص المجهري الضوئي. يجب ألا يزيد حجم قطع المادة المدروسة عن 1 مم 3. الغرض الرئيسي من التثبيت هو إبقاء الأنسجة قريبة من الحياة قدر الإمكان.
تثبيتيتم تنفيذه من أجل الحفاظ على الهياكل بشكل أفضل ، وبالتالي ، من الضروري استخدام الكواشف ذات درجة الحموضة وتساوي التوتر ، والتي يتم تحديد قيمها حسب نوع النسيج الذي يتم إصلاحه. تتم عملية التثبيت على مرحلتين: البادئة والتثبيت اللاحق. في حالة البادئة ، يتم استخدام محلول من 2.5-3٪ من الجلوتارالدهيد (pH 7.2-7.4) ، ومدة التثبيت 2-4 ساعات ، ويتم إجراء ما بعد التثبيت في محلول 2٪ (pH 7.2-7.4) - 1- ساعتان للحفاظ على البنية داخل الحجاج ، يوصى باستخدام مثبت درجة حرارة منخفضة (0-4 درجة مئوية) ، وتحضير المثبتات على محلول الفوسفات ، كاكوديلات ، أسيتات فيرونال.
تدفق مائى - صرفيتم إجراؤه باستخدام كحول بارد بنسبة 30٪ 5-7 مرات ، ويتم الاحتفاظ بالجسم في كل جزء من الكحول لمدة 30 دقيقة ، أي تغسل من المثبت إلى مثل هذه الحالة عندما يتوقف العمل المؤكسد للمثبت.
تجفيفنفذ باستخدام كحول إيثيلي ذو قوة متزايدة: 30 ، 50 ، 70 ، 96 ، 100٪ لمدة 30 دقيقة. بالنسبة لبعض طرق الصب ، يوصى بإضافة الأسيتون وأكسيد البروبيلين لنزح المياه.
يملأيتم تنفيذه في راتنجات الايبوكسي (أرالدايت ، إبون ، إلخ). تتم بلمرة الراتنجات في الكبسولات في منظم حرارة عند 60 درجة مئوية حتى تصلب ، كقاعدة عامة ، في غضون 1-2 أيام.
أقسام رقيقة جدايتم الحصول عليها باستخدام سكاكين زجاجية على فائق الجسيمات ؛ لهذا الغرض ، يتم شحذ كتل الإيبوكسي على شكل هرم مبتور رباعي السطوح. توضع المقاطع المتسلسلة ذات اللون الرمادي في حمام يحتوي على 10٪ من الإيثانول. يتم تثبيت المقاطع الناتجة على شبكات نحاسية أو بلاديوم ، يتم على سطحها تطبيق فيلم فورمفار بشكل أولي. للكشف عن الهياكل الضرورية ، يتم معالجة الأقسام الموجودة على الشبكات بمحلول من سترات الرصاص وخلات اليورانيل.
إلى عن على مسح المجهر الإلكترونيتكون عينة الاختبار ثابتة ، مجففة ، اعتمادًا على الغرض من الدراسة ، باستخدام المثبتات المذكورة أعلاه. بعد الجفاف ، تُلصق العينة بجسم حامل ، وتوضع في وحدة ترشيش ومغطاة بطبقة رقيقة جدًا من الذهب أو البلاتين. على عكس المجهر الإلكتروني النافذ ، يمكن أن يستخدم المجهر الإلكتروني الماسح مستحضرات أكالة: يتم سكب موضوع الدراسة ببعض المواد الصلبة ، ثم يتم فحص القوالب والأسطح. كما يدرسون النسخ المتماثلة التي تم الحصول عليها عن طريق التجميد - التقطيع. في هذه الحالة ، يتم فحص انطباع بانقسام سطح الجسم. لزيادة التباين ، يجب تظليل النسخ المتماثلة عن طريق رش جزيئات معدنية (ذهب ، بلاتين) أو فحم.
أسئلة الاختبار
- 1. ما هي الأساليب المستخدمة في دراسة هياكل الخلايا والأنسجة والأعضاء؟
- 2. ما هي القواعد الأساسية التي يجب اتباعها عند أخذ العينات لتحضير المستحضرات النسيجية؟
- 3. ما هي ميزات تحضير المستحضرات من أنسجة العظام؟
- 4. كيف يتم إصلاح مادة الاختبار؟
- 5. ما الذي يستخدم في تجفيف المستحضرات؟
- 6. ما هي الوسائط المستخدمة لصب مادة الاختبار؟
- 7. ما هي الصبغة المستخدمة للكشف عن الأنسجة الدهنية؟
- 8. ما هي طريقة التقسيم الأكثر استخدامًا ولماذا؟
- 9. تسمية المراحل الرئيسية لتحضير العينات لنقلها ومسحها بالمجهر الإلكتروني.
علم الأنسجة - ("gistos" في اليونانية - الأنسجة ، والمنطق - التدريس) هذا هو علم التركيب والتطور والنشاط الحيوي لأنسجة الكائنات متعددة الخلايا والبشر. الأشياء التي هي موضوع هذا العلم لا يمكن الوصول إليها بالعين المجردة. لذلك ، يرتبط تاريخ علم الأنسجة ارتباطًا وثيقًا بتاريخ إنشاء مثل هذه الأدوات التي تسمح لنا بدراسة أصغر الأشياء بالعين المجردة. 2
ينقسم مسار علم الأنسجة تقليديا إلى الأقسام التالية: ن 1. علم الخلايا هو علم الخلية. ن 2. علم الأجنة هو علم التطور ، من البداية إلى التكوين الكامل للكائن الحي. ن 3. علم الأنسجة العامة - علم الأنماط العامة الكامنة في الأنسجة. ن 4. علم الأنسجة الخاص - يدرس بنية وتطور الأعضاء والأنظمة.
علم السيتولوجيا - ("الخلية" اليونانية و - "الدراسة" ، "العلم") ن فرع من علم الأحياء يدرس الخلايا الحية وعضياتها وبنيتها ووظائفها وعمليات تكاثر الخلايا والشيخوخة والموت. أربعة
علم الأجنة n (من يوناني ἔμβρυον - جنين ، جنين + -α من λόγος - تعليم) هو علم يدرس تطور الجنين. 5
تاريخ إنشاء نظرية الخلية 1590. اخترع يانسن المجهر ، حيث تم توفير التكبير عن طريق توصيل عدستين. 1665. استخدم روبرت هوك لأول مرة مصطلح الخلية. 1650-1700 سنة. وصف أنتوني فان ليوينهوك البكتيريا والكائنات الدقيقة الأخرى لأول مرة. 1700-1800 سنة. تم نشر العديد من الأوصاف والرسومات الجديدة لمختلف الأنسجة ، وخاصة الخضار. في عام 1827 اكتشف كارل باير البيضة في الثدييات. 1831-1833 سنة. وصف روبرت براون النواة في الخلايا النباتية. 1838-1839 سنة. جمع عالم النبات ماتياس شلايدن وعالم الحيوان ثيودور شوان أفكار علماء مختلفين وصاغوا نظرية الخلية ، التي افترضت أن الوحدة الأساسية للتركيب والوظيفة في الكائنات الحية هي الخلية. 1855 أظهر رودولف فيرشو أن جميع الخلايا تتشكل نتيجة لانقسامات الخلايا.
تاريخ إنشاء نظرية الخلية 1665. بعد فحص قسم من الفلين تحت المجهر ، اكتشف العالم الإنجليزي ، الفيزيائي روبرت هوك ، أنه يتكون من خلايا مفصولة بأقسام. هذه الخلايا أسماها "خلايا"
تاريخ إنشاء النظرية الخلوية في القرن السابع عشر ، صمم ليوينهوك مجهرًا وفتح الباب أمام الناس للعالم المصغر. ظهرت مجموعة متنوعة من الشركات العملاقة والروتيفيرا وغيرها من الكائنات الحية الصغيرة أمام أعين الباحثين المذهولين. اتضح أنها موجودة في كل مكان - هذه الكائنات الحية الأصغر: في الماء ، والسماد ، والهواء والغبار ، وفي التراب والمزاريب ، وفي النفايات المتعفنة من أصل حيواني ونباتي.
تاريخ إنشاء نظرية الخلية 1831-1833. وصف روبرت براون النواة في الخلايا النباتية. في عام 1838 ، لفت عالم النبات الألماني م. شلايدن الانتباه إلى النواة واعتبرها منشأ الخلية. وفقًا لشلايدن ، تتكثف النواة من مادة حبيبية ، تتشكل حولها نواة ، وقد تختفي حول النواة - خلية ، والنواة في عملية تكوين الخلية.
تاريخ إنشاء النظرية الخلوية أظهر عالم الحيوان الألماني تي شوان أن أنسجة الحيوانات تتكون أيضًا من خلايا. ابتكر نظرية تنص على أن الخلايا التي تحتوي على نوى تمثل الأساس البنيوي والوظيفي لجميع الكائنات الحية. تمت صياغة النظرية الخلوية للهيكل ونشرها من قبل T. Schwann في عام 1839. ويمكن التعبير عن جوهرها في الأحكام التالية: 1. الخلية هي الوحدة الهيكلية الأولية لبنية جميع الكائنات الحية. 2. خلايا النباتات والحيوانات مستقلة ومتجانسة في الأصل والبنية. تعمل كل خلية بشكل مستقل عن الخلايا الأخرى ، ولكن مع الجميع. 3. تنشأ جميع الخلايا من مادة عديمة الهيكل بين الخلايا. (خطأ!) 4. يتم تحديد نشاط حياة الخلية بواسطة القشرة. (خطأ!)
تاريخ إنشاء نظرية الخلية في عام 1855 ، قام الطبيب الألماني ر. فيرشو بتعميم: لا يمكن للخلية أن تنشأ إلا من خلية سابقة. أدى ذلك إلى إدراك حقيقة أن نمو الكائنات الحية وتطورها مرتبطان بانقسام الخلايا وزيادة تمايزها ، مما يؤدي إلى تكوين الأنسجة والأعضاء.
تاريخ إنشاء نظرية الخلية بواسطة كارل باير باك في عام 1827 ، اكتشف كارل باير البويضة في الثدييات ، وأثبت أن نمو الثدييات يبدأ بالبويضة المخصبة. هذا يعني أن تطور أي كائن حي يبدأ ببويضة واحدة مخصبة ، الخلية هي وحدة التطور.
تاريخ إنشاء النظرية الخلوية 1865 تم نشر قوانين الوراثة (ج. مندل). 1868 تم اكتشاف الأحماض النووية (F. Miescher) 1873 تم اكتشاف الكروموسومات (F. Schneider) 1874 تم اكتشاف الانقسام المتساوي في الخلايا النباتية (I.D Chistyakov) 1878 تم اكتشاف الانقسام الانقسام للخلايا الحيوانية (W. Fleming ، P. I. Peremezhko) 1879 Fleming - سلوك الكروموسومات أثناء الانقسام. تم اكتشاف عام 1882 Meiosis في الخلايا الحيوانية (W. 1898 اكتشف جولجي الجهاز الشبكي للخلية ، جهاز جولجي. 1914 تمت صياغة نظرية الكروموسوم للوراثة (T. Morgan). 1924 تم نشر النظرية العلمية الطبيعية لأصل الحياة على الأرض (A. I. Oparin). 1953 تمت صياغة أفكار حول بنية الحمض النووي وتم إنشاء نموذجها (D. Watson و F. Crick). 1961 تم تحديد طبيعة وخصائص الشفرة الجينية (F. Crick ، L. Barnet ، S. Benner).
الأحكام الرئيسية للنظرية الخلوية الحديثة 1. الخلية هي نظام حي أولي ، وحدة بنية ، نشاط حيوي ، تكاثر وتطور فردي للكائنات. 2. خلايا جميع الكائنات الحية متجانسة وموحدة في التركيب والأصل. 3. تكوين الخلية. تنشأ الخلايا الجديدة فقط عن طريق تقسيم الخلايا الموجودة مسبقًا. 4. الخلية والكائن الحي. يمكن أن تكون الخلية كائنًا مستقلاً (بدائيات النوى وحقيقيات النوى أحادية الخلية). تتكون جميع الكائنات متعددة الخلايا من خلايا. 5. وظائف الخلايا. في الخلايا ، يتم إجراء التمثيل الغذائي والتهيج والاستثارة والحركة والتكاثر والتمايز. 6. تطور الخلية. نشأ التنظيم الخلوي في فجر الحياة وقطعت شوطًا طويلاً في التطور التطوري من الأشكال الخالية من الأسلحة النووية (بدائيات النوى) إلى الأشكال النووية (حقيقيات النوى).
طرق مجهرية العينات الهيستولوجية 1. الفحص المجهري الضوئي. 2. الفحص المجهري فوق البنفسجي. 3. الفحص المجهري الفلوريسنت (الانارة). 4. الفحص المجهري الطوري. 5. الفحص المجهري للمجال المظلم. 6. الفحص المجهري للتداخل 7. الفحص المجهري للاستقطاب. 8. المجهر الإلكتروني. 17
ميكروسكوب ن تسمح لك هذه الأداة البصرية بمراقبة الأشياء الصغيرة. يتم تحقيق تكبير الصورة من خلال نظام العدسات الموضوعية وعينية. تقوم المرآة والمكثف والحجاب الحاجز بتوجيه تدفق الضوء وتنظيم إضاءة الجسم. يشتمل الجزء الميكانيكي من المجهر على: حامل ثلاثي القوائم ، ومنضدة كائن ، وبراغي ماكرو وميكرومتر ، وحامل أنبوب. الثامنة عشر
طرق الفحص المجهري الخاصة: - مجهر تباين الطور - (لدراسة الكائنات الحية غير الملوثة) - يتيح لك الفحص المجهري دراسة الكائنات الحية وغير الملوثة. عندما يمر الضوء عبر الأجسام الملونة ، يتغير اتساع الموجة الضوئية ، وعندما يمر الضوء عبر كائنات غير ملونة ، يتغير طور موجة الضوء ، والتي تُستخدم للحصول على صورة عالية التباين في الفحص المجهري لتباين الطور والتداخل. - مجهر المجال المظلم (لدراسة الكائنات الحية غير الملوثة). يتم استخدام مكثف خاص يسلط الضوء على الهياكل المتناقضة للمادة غير المصبوغة. يتيح الفحص المجهري للمجال المظلم مراقبة الكائنات الحية. يظهر الكائن المرصود مضيئًا في حقل مظلم. في هذه الحالة ، تسقط أشعة الإنارة على الجسم من الجانب ، والأشعة المتناثرة فقط تدخل عدسات المجهر. 19
طرق خاصة للفحص المجهري Luminescent mic-p (لدراسة الكائنات الحية غير الملوثة) يستخدم الفحص المجهري لمراقبة الأجسام الفلورية (الانارة). في المجهر الفلوري ، يمر الضوء من مصدر قوي عبر مرشحين. يحجب أحد المرشحات الضوء الموجود أمام العينة ويسمح للضوء بطول الموجة الذي يحفز العينة على التألق. يسمح المرشح الآخر بمرور ضوء الطول الموجي المنبعث من جسم الفلورسنت. وهكذا ، تمتص الأجسام الفلورية ضوءًا بطول موجي واحد وتنبعث منه ضوءًا في منطقة أخرى من الطيف. -القدرة على التعرق البنفسجي m-pa) mic-p (تزيد من دقة الاستقطاب mic-p (لأجسام البحث ذات الترتيب المنتظم للجزيئات - الهيكل العظمي والعضلات وألياف الكولاجين وما إلى ذلك) الفحص المجهري - تكوين صورة لهياكل متباينة الخواص غير ملونة (مثل 20
طرق خاصة للفحص المجهري - الفحص المجهري للتداخل (لتحديد البقايا الجافة في الخلايا ، وتحديد سمك الكائنات) - يجمع الفحص المجهري بين مبادئ تباين الطور والمجهر الاستقطاب ويستخدم للحصول على صورة تباين للأجسام غير الملوثة. لقد وجدت بصريات التداخل الخاصة (بصريات نومارسكي) تطبيقًا في المجاهر مع تباين التداخل التفاضلي. ج. المجهر الإلكتروني: - الإرسال (دراسة الأجسام من خلال الإرسال) - المسح (دراسة سطح الأشياء) من الناحية النظرية ، فإن دقة الإرسال EM هي 0.002 نانومتر. الدقة الحقيقية للمجاهر الحديثة تقترب من 0.1 نانومتر. بالنسبة للأجسام البيولوجية ، فإن دقة EM في الممارسة هي 2 نانومتر. 21
تقنيات الفحص المجهري الخاصة يتكون المجهر الإلكتروني النافذ من عمود تمر عبره الإلكترونات المنبعثة من خيوط الكاثود في الفراغ. يمر شعاع الإلكترون المركّز بواسطة مغناطيس الحلقة عبر العينة المعدة. تعتمد طبيعة تشتت الإلكترون على كثافة العينة. يتم تركيز الإلكترونات التي تمر عبر العينة ، ويتم ملاحظتها على شاشة الفلورسنت ، وتسجيلها باستخدام لوحة فوتوغرافية. يستخدم المجهر الإلكتروني الماسح للحصول على صورة ثلاثية الأبعاد لسطح الكائن قيد الدراسة. تُستخدم طريقة التقطيع (التجميد-الشق) لدراسة التركيب الداخلي لأغشية الخلايا. يتم تجميد الخلايا عند درجة حرارة النيتروجين السائل في وجود مادة واقية من التجمد وتستخدم لصنع الرقائق. تمر طائرات الانقسام خلال الوسط الطارد للماء للطبقة الدهنية الثنائية. السطح الداخلي المكشوف للأغشية مظلل بالبلاتين ، تتم دراسة النسخ المتماثلة الناتجة في مسح EM. 22
طرق خاصة (غير مجهرية): 1. الكيمياء الخلوية أو النسيجية - الجوهر هو استخدام تفاعلات كيميائية محددة بدقة مع منتج نهائي خفيف في الخلايا والأنسجة لتحديد كمية المواد المختلفة (البروتينات والإنزيمات والدهون والكربوهيدرات ، إلخ.). يمكن تطبيقها على مستوى الضوء أو المجهر الإلكتروني. 2. القياس الضوئي الخلوي - يتم استخدام الطريقة مع 1 وتجعل من الممكن قياس البروتينات والإنزيمات وما إلى ذلك التي تم تحديدها بواسطة الطريقة الكيميائية الهيستولوجية 3. التصوير الإشعاعي الذاتي - يتم إدخال المواد التي تحتوي على نظائر مشعة لعناصر كيميائية في الجسم. يتم تضمين هذه المواد في عمليات التمثيل الغذائي في الخلايا. يتم تحديد التوطين ، مزيد من الحركة لهذه المواد في الأعضاء على المستحضرات النسيجية عن طريق الإشعاع ، والتي يتم التقاطها بواسطة مستحلب فوتوغرافي مطبق على المستحضر. 4. تحليل حيود الأشعة السينية - يسمح لك بتحديد كمية العناصر الكيميائية في الخلايا ، لدراسة التركيب الجزيئي للأجسام الدقيقة البيولوجية. 24 5. قياس الشكل - قياس حجم بيول. الهياكل على المستويات الخلوية ودون الخلوية.
طرق خاصة (غير مجهرية) 6. تقنية مجهرية - إجراء عمليات دقيقة للغاية باستخدام معالج دقيق تحت المجهر (زرع نواة ، وإدخال مواد مختلفة في الخلايا ، وقياس الإمكانات الحيوية ، وما إلى ذلك) 6. طريقة زراعة الخلايا والأنسجة - في وسط المغذيات أو في غرف الانتشار ، مزروعة في أنسجة الجسم المختلفة. 7. التنبيذ الفائق - تجزئة الخلايا أو الهياكل تحت الخلوية بالطرد المركزي في محاليل ذات كثافات مختلفة. 8. الطريقة التجريبية. 9. طريقة زراعة الأنسجة والأعضاء. 25
يحافظ التثبيت على بنية الخلايا والأنسجة والأعضاء ، ويمنع تلوثها البكتيري وهضمها الأنزيمي ، ويثبت الجزيئات الكبيرة من خلال تشابكها الكيميائي. 32
تثبيت الفورمالين السائل والكحول والجلوتارالدهيد - المثبتات الأكثر شيوعًا ؛ التثبيت بالتبريد - يتم ضمان أفضل حماية للهياكل عن طريق التجميد الفوري للعينات في النيتروجين السائل (-196 درجة مئوية) ؛ التجفيد - تتعرض قطع صغيرة من الأنسجة للتجميد السريع ، مما يوقف عمليات التمثيل الغذائي. التجفاف - الإجراء القياسي لإزالة الماء هو الجفاف في الكحوليات ذات القوة المتزايدة (من 70 إلى 60٪). الحشوة - تجعل القماش متينًا ، ويمنعه من التكسير والتجعد أثناء التقطيع ، ويسمح بالحصول على قطع بسماكة قياسية. وسيط التضمين الأكثر شيوعًا هو البارافين. كما يتم استخدام السيلويدن والوسائط البلاستيكية والراتنجات. 33
يجهز الجفاف النسيج الثابت لاختراق وسائط التضمين. يجب إزالة الماء من الأنسجة الحية ، وكذلك الماء من خلائط التثبيت (معظم المثبتات عبارة عن محاليل مائية) تمامًا بعد التثبيت. الإجراء القياسي لإزالة الماء هو زيادة الجفاف في الكحول من 60 درجة إلى 100 درجة. 34
الحشو إجراء ضروري يسبق تحضير الأقسام. الحشو يجعل القماش متينًا ، ويمنع سحقه وتجعده أثناء التقطيع ، كما أنه يجعل من الممكن الحصول على أقسام رفيعة بسماكة قياسية. وسيط التضمين الأكثر شيوعًا هو البارافين. كما يتم استخدام السيلويدن والوسائط البلاستيكية والراتنجات. 35
مشراح دوار. 40 ن يتم تثبيت الكتل التي تحتوي على قطعة من العضو في حامل جسم متحرك. عندما يتم إنزالها ، تظل المقاطع التسلسلية على السكين ، ويتم إزالتها من السكين وتثبيتها على شريحة زجاجية لمزيد من المعالجة والفحص المجهري.
طرق تلطيخ الأنسجة: n النووية (الأساسية): n الهيماتوكسيلين - البقع n n n n nuclei blue؛ هيماتوكسيلين الحديد أزور الثاني (باللون الأرجواني) ؛ قرمزي (باللون الأحمر) ؛ الزعفران (باللون الأحمر) ؛ الميثيل الأزرق (إلى الأزرق) ؛ التولويدين (باللون الأزرق) ؛ الثيونين (باللون الأزرق). ن سيتوبلازميك- (حمض): ن يوزين - باللون الوردي ؛ ن الاريثروسين. ن برتقالي "G" ؛ ن حامض الفوشسين - إلى الأحمر ؛ ن حمض البكريك - أصفر ؛ ن الكونغو - أحمر - إلى أحمر 44
طرق خاصة لتلوين الأنسجة في السودان III - تلطيخ البرتقال للدهون والدهون. ن حمض الأسميك - تلوين الدهون والدهون باللون الأسود ؛ ن أورسين - تلوين بني للألياف المرنة ؛ نترات الفضة - تشريب العناصر العصبية بلون بني غامق. 45
تراكيب الخلايا: n OXYPHILIA القدرة على صبغ اللون الوردي مع الأصباغ الحمضية n Basophilian القدرة على تلطيخ اللون الأزرق مع الأصباغ الأساسية n العدلات - n القدرة على صبغ الأرجواني مع الأصباغ الحمضية والأساسية. 47
1
الخلية n هي نظام حي أولي يتكون من السيتوبلازم والنواة والغشاء وهي الأساس لتطور وهيكل وحياة الكائنات الحية الحيوانية والنباتية.
و glycocalyx عبارة عن مركب غشائي يتكون من السكريات المرتبطة بالبروتين والسكريات المرتبطة بالدهون. الوظائف n الاستقبال (الهرمونات ، السيتوكينات ، الوسطاء والمستضدات) n التفاعلات بين الخلايا (التهيج والتعرف) n الهضم الجداري (microvilli من خلايا الحدود المعوية)
وظائف الغشاء الخلوي: - - النقل النشط والسلبي للمواد في كلا الاتجاهين ؛ - وظائف المستقبلات. الاتصال بالخلايا المجاورة.
رئيسي كائنات البحث هي مستحضرات نسيجية ، وطريقة البحث الرئيسية هي الفحص المجهري.
يجب أن يكون التحضير النسيجي شفافًا (رفيعًا) ومتباينًا بدرجة كافية. وهي مصنوعة من الهياكل الحية والميتة (الثابتة). يمكن أن يكون التحضير عبارة عن تعليق للخلايا ، ومسحة ، وبصمة ، وفيلم ، وتحضير كلي ، وقسم رفيع.
تتضمن عملية تحضير المستحضرات النسيجية للدراسات الميكروسكوبية الخطوات الرئيسية التالية: 1) أخذ المادة وتثبيتها. 2) ضغط المواد ؛ 3) إعداد الأقسام. 4) تلطيخ أو أقسام متناقضة ؛ 5) خاتمة الاقسام.
بالنسبة للتلطيخ ، يتم استخدام أصباغ نسيجية خاصة بقيم مختلفة من الأس الهيدروجيني: حمضية ومحايدة وقاعدية. الهياكل الملطخة من قبلهم تسمى أوكسفيلية ، محبة للعدلات (غير متجانس) و قاعدية ، على التوالي.
ما هي الأساليب التي يستخدمها علم الأنسجة؟ هم كثيرون ومتنوعون:
المجهر.
المجهر الضوئي. المجاهر الحديثة عالية الدقة. يتم تعريف الدقة على أنها أصغر مسافة (د) بين نقطتين متجاورتين يمكن رؤيتهما بشكل منفصل. تعتمد هذه المسافة على الطول الموجي للضوء (λ) ويتم التعبير عنها بالصيغة: d = 1/2 λ.
الطول الموجي الأدنى للجزء المرئي من الطيف هو 0.4 ميكرومتر. لذلك ، فإن قوة التحليل لمجهر الضوء هي 0.2 ميكرومتر ، ويصل التكبير الكلي إلى 2500 مرة.
الفحص المجهري فوق البنفسجي . يبلغ الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية 0.2 ميكرومتر ، وبالتالي ، فإن دقة المجهر فوق البنفسجي هي 0.1 ميكرومتر ، ولكن نظرًا لأن الأشعة فوق البنفسجية غير مرئية ، هناك حاجة إلى شاشة مضيئة لمراقبة الكائن قيد الدراسة.
الفحص المجهري الفلوريسنت (الإنارة). إن إشعاع الموجة القصيرة (غير المرئي) ، الذي يمتصه عدد من المواد ، يثير إلكتروناتها ، التي تبعث ضوءًا بطول موجي أطول ، لتصبح الجزء المرئي من الطيف. وبالتالي ، يتم تحقيق زيادة في دقة المجهر.
على النقيض من المرحلة المجهري يسمح لك بإصدار كائنات غير ملونة.
الفحص المجهري الاستقطاب تستخدم لدراسة معمارية التراكيب النسيجية ، مثل ألياف الكولاجين.
المجهر الإلكتروني يجعل من الممكن دراسة الأشياء المكبرة عشرات الآلاف من المرات.
التصوير الدقيق والميكروفيلموجرافي . تتيح هذه الأساليب دراسة الأشياء الثابتة في الصور والأشياء المجهرية الحية المتحركة.
طرق البحث النوعي والكمي.
هيستو –والكيمياء الخلوية ، بما في ذلك الكمي ، يسمح بإجراء تحليل نوعي للأشياء قيد الدراسة على مستويات الأنسجة والخلوية وتحت الخلوية.
قياس الضوء الخلوي يجعل من الممكن دراسة المحتوى الكمي لبعض المواد البيولوجية في الخلايا والأنسجة على أساس امتصاص الضوء لطول موجي معين بواسطة الصبغة المرتبطة بها.
الطرد المركزي التفاضلي يسمح لك بفصل محتويات الخلايا التي تختلف عن بعضها البعض في كتلتها.
التصوير الشعاعي يعتمد على إدراج ملصق مشع (على سبيل المثال ، اليود المشع ، H³-thymidine ، إلخ) في عملية التمثيل الغذائي.
قياس الشكل يسمح لك بقياس مساحات وأحجام الخلايا ونواتها وعضياتها باستخدام العدسة - وميكرومتر الجسم والشبكات الخاصة.
تطبيق للحاسوب للمعالجة التلقائية للمواد الرقمية.
طريقة زراعة الأنسجةهو الحفاظ على حيوية وانقسام الخلايا والأنسجة خارج الجسم. لهذا الغرض ، يتم استخدام حاويات خاصة ذات وسط غذائي ، حيث يتم إنشاء جميع الظروف اللازمة للنشاط الحيوي للخلايا. باستخدام هذه الطريقة ، من الممكن دراسة التمايز والتطور الوظيفي للخلايا ، وأنماط تحولها الخبيث وتطور عملية الورم ، والتفاعل بين الخلايا ، وتلف الخلايا والأنسجة بالفيروسات والكائنات الحية الدقيقة ، وتأثير الأدوية على التمثيل الغذائي العمليات في الخلايا والأنسجة ، إلخ.
تلطيخ داخلي (حيوي) تستخدم لدراسة ظاهرة البلعمة ونشاط البلاعم ، وقدرة الترشيح للأنابيب الكلوية ، إلخ.
طريقة زراعة الأنسجة. تستخدم هذه الطريقة لدراسة سلوك الخلايا وحالتها الوظيفية عندما يتم زرعها في كائن حي آخر. على سبيل المثال ، تُستخدم هذه الطريقة لإبقاء الحيوانات معرضة لجرعات مميتة من الإشعاع.
المعالجة الدقيقة.تم استخدام هذه الطريقة في البيولوجيا الجزيئية والهندسة الوراثية وأيضًا في الاستنساخ ، عندما تتم إزالة نواة من بيضة بها مجموعة صبغية أحادية الصبغيات باستخدام معالج دقيق ونواة خلية جسدية بها مجموعة ثنائية الصبغيات من الكروموسومات.
موجود العديد من طرق البحث، من بينها ما يلي: مراقبة الأجنة الحية باستخدام تسجيل الفيلم والفيديو (تستخدم بشكل رئيسي في التجربة). لهذا الغرض ، يتم استخدام جهاز تصوير دقيق خاص متصل بغرفة حرارية يتطور فيها الجنين. عند دراسة تطور جنين دجاجة ، على سبيل المثال ، تصنع نافذة في القشرة ، تغلق بلوحة شفافة. مكنت هذه الطريقة من تتبع وصقل ديناميكيات التغييرات في شكل وحجم الأجنة في عملية التطور.
طريقة الشريحة الثابتةالأجنة باستخدام المجهر الضوئي والإلكتروني ، والتاريخ الإذاعي ، وكيمياء الأنسجة والمناعة. تتيح هذه الأساليب تحليل الأنسجة والتغيرات داخل الخلايا في ديناميات تطور أجزاء من الجنين. بمساعدة طرق الكيمياء النسيجية والمناعة ، تتم دراسة العمليات الكيميائية الحيوية التي تحدث في الخلايا الجنينية - تخليق الحمض النووي ، والحمض النووي الريبي ، والبروتينات ، وبروتينات مستقبلات محددة ، وما إلى ذلك باستخدام هذه الأساليب ، تم الحصول على معلومات مهمة حول تمايز الخلايا والأنسجة في التطور الأجنة والأجنة.
طريقة الوسم، الذي اقترحه في عام 1925 و. فوغت (1888-1941) ، يجعل من الممكن دراسة حركات الخلايا في الجنين النامي. للقيام بذلك ، يتم استخدام علامات غير سامة للأجنة (على سبيل المثال ، الأحمر المحايد ، جزيئات الفحم) ، وكذلك الأجسام المضادة لبعض البروتينات. عند استخدام الأجسام المضادة ، يتم استخدام قدرتها على الاندماج مع صبغة الفلورسنت والبروتينات الجرثومية. بمساعدة الفحص المجهري الفلوري ، يتم تتبع توزيع الصبغة ودراسة ديناميكيات تخليق البروتين في الأنسجة النامية للجنين.
طرق الجراحة المجهريةتم تطويرها في بداية القرن العشرين من قبل ممثلي مدرسة G. Spemann (1869-1941). وقد تضمنت: إزالة قشور بيض الحيوانات ، وزرع أجزاء من جنين إلى آخر ، وما إلى ذلك. تُستخدم هذه الأساليب أيضًا لدراسة عواقب تدمير أجزاء من الجنين أو فرده (على سبيل المثال ، باستخدام شعاع الليزر) الخلايا. يتم استخدام الزرع كنوع من الجراحة الدقيقة لتحديد مسارات هجرة الخلايا ومصادر نمو الأنسجة. في الوقت نفسه ، يتم زرع موقع للجنين ، على سبيل المثال ، السمان ، في نفس الموقع لجنين الدجاج بدلاً من الموقع البعيد. نوى خلية السمان لها بنية مميزة وبالتالي يمكن تمييزها عن نوى خلايا جنين الدجاج.
استكشاف- استئصال مساحة صغيرة من الجنين وزراعتها في بيئة صناعية. باستخدام هذه الطريقة ، من الممكن الحصول على معلومات حول مصادر نمو الأنسجة من منطقة معينة من الجنين وتحديد أنماط التطور النسيجي الوراثي.
زرع نووي- طريقة لاستنساخ الأجنة. على سبيل المثال ، أدى زرع نوى من خلايا الظهارة المعوية لضفدع الضفدع المخالب إلى بيضة ضفدع ، تم تعطيل نواتها بواسطة الأشعة فوق البنفسجية ، إلى ظهور أفراد جدد (تجارب جيردون). أرست هذه التجارب الأساس لاستنساخ الفقاريات العليا وساهمت في ظهور (عام 1997) الأغنام الشهيرة دوللي. أظهرت التجارب الجنينية المماثلة بشكل مقنع أن نوى الخلايا الجسدية تحتوي على مجموعة كاملة من المعلومات الجينية لتطوير كائن حي جديد.
آخر إنجاز علم الأجنة التجريبيكان تطوير طريقة التخصيب في المختبر. يعتبر زرع الأجنة التي تم الحمل بها في المختبر في الرحم أساس علاج العقم. في عام 1973 ، أزال L. Shettles (الولايات المتحدة الأمريكية) بويضة قبل التبويض من مبيض امرأة تعاني من العقم وقام بتخصيبها بالحيوانات المنوية لزوجها. كانت هذه بداية تقنية زراعة الأجنة البشرية من أجل علاج العقم. ومع ذلك ، فقط في عام 1978 في المملكة المتحدة ، ونتيجة لزرع جنين بشري في رحم امرأة مصابة بالعقم في مرحلة 8 قاذفات ، بعد 2.5 يومًا من الزراعة ، كان أول طفل "أنبوب اختبار" في العالم يزن ظهر 2700 جم.