Μέθοδοι ιστολογικής έρευνας χρησιμοποιούνται για τη μελέτη της δομής και της λειτουργίας κυττάρων και ιστών ανθρώπων, ζώων και φυτών σε φυσιολογικές, παθολογικές και πειραματικές συνθήκες. Η βάση των Γ. μ. και. είναι - ένα σύνολο μεθοδολογικών τεχνικών που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή παρασκευασμάτων κυττάρων και ιστών για τη μικροσκοπική τους εξέταση. Η μικροσκοπική μελέτη κυττάρων και ιστών μπορεί να πραγματοποιηθεί με δύο βασικούς τρόπους, ανάλογα με την κατάσταση του υπό μελέτη αντικειμένου: τη μελέτη των ζωντανών κυττάρων και ιστών, τη μελέτη των μη ζωντανών κυττάρων και ιστών που διατηρούν τη δομή τους λόγω ειδικής στερέωσης τεχνικές. Η μελέτη των ζωντανών αντικειμένων - ζωτικής σημασίας (υπερζωτικά) - καθιστά δυνατή την παρατήρηση των φυσιολογικών διεργασιών στα κύτταρα και τους ιστούς, την ενδοζωτική δομή τους. Εκτελείται σε κύτταρα ελεύθερα αιωρούμενα σε υγρό μέσο (κύτταρα αίματος, επιθηλιακά κύτταρα απόξεσης κ.λπ.), καθώς και σε καλλιέργειες κυττάρων και ιστών που αναπτύσσονται σε ειδικά θρεπτικά μέσα. Το αντικείμενο της ενδοζωτικής παρατήρησης μπορεί να είναι λεπτές, διαφανείς μεμβράνες ιστού (, μεμβράνη κολύμβησης). Σε πειραματικές μελέτες, χρησιμοποιείται η μέθοδος των βιολογικών παραθύρων (εμφύτευση διαφανών θαλάμων) και η μελέτη εμφυτευμάτων ιστού σε φυσικό διαφανές περιβάλλον, για παράδειγμα, στον πρόσθιο θάλαμο του οφθαλμού των ζώων. Ανάλογα με τη συγκεκριμένη εργασία, χρησιμοποιούνται διάφορες ειδικές μέθοδοι μικροσκοπίας σε ζωτικής σημασίας μελέτες: σκοτεινό πεδίο, αντίθεση φάσης, φθορισμός, πόλωση, υπεριώδες. Οι ζωτικές ιστολογικές μέθοδοι χρησιμοποιούνται κυρίως για βιολογική και βιοϊατρική έρευνα. Η ευρεία χρήση τους περιορίζεται από μεγάλες τεχνικές δυσκολίες που σχετίζονται με τις ιδιότητες των επιζώντων ιστών. Στην ιατρική έρευνα, ειδικά στην πρακτική των εργαστηρίων ανατομικής παθολογίας, χρησιμοποιούνται μέθοδοι μελέτης σταθερών αντικειμένων. Ο σκοπός της στερέωσης είναι η διατήρηση της ενδοζωτικής δομής των κυττάρων και των ιστών με την ταχεία έκθεσή τους σε χημικούς παράγοντες που εμποδίζουν την ανάπτυξη μεταθανάτιων αλλαγών. Η επιλογή της μεθόδου στερέωσης εξαρτάται από τους στόχους της μελέτης και τα χαρακτηριστικά του υλικού που πρόκειται να στερεωθεί. Έτσι, μίγματα στερέωσης που περιέχουν άλατα βαρέων μετάλλων (για παράδειγμα, εξάχνωση) χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση λεπτών κυτταρικών δομών.Το καλύτερο σταθεροποιητικό για κυτταρολογικούς σκοπούς είναι το τετροξείδιο του οσμίου, το οποίο χρησιμοποιείται συχνά στην ηλεκτρονική μικροσκοπία. Ένα καθολικό σταθεροποιητικό είναι η φορμαλδεΰδη, που χρησιμοποιείται με τη μορφή διαλύματος φορμαλίνης 10%. Για να είναι ομοιόμορφα και πλήρη, τα κομμάτια του ιστού πρέπει να είναι μικρά και ο όγκος του υγρού στερέωσης πρέπει να είναι πολλές φορές μεγαλύτερος από τον όγκο του υλικού που πρόκειται να στερεωθεί. Μετά τη στερέωση, τα κομμάτια συνήθως πλένονται με νερό ή οινόπνευμα. Τα συστατικά του στερεού ιστού (π.χ. εναποθέσεις ασβεστίου) αφαιρούνται χρησιμοποιώντας τεχνικές απασβεστοποίησης. Ο γρηγορότερος και ευκολότερος τρόπος για να προετοιμάσετε ένα τμήμα ιστού, που χρησιμοποιείται συνήθως σε ταχεία διαγνωστική, είναι ένα κομμάτι και η λήψη τομών ιστού σε ένα μικροτόμο κατάψυξης. Ωστόσο, είναι δύσκολο να αποκτηθούν επαρκώς λεπτές τομές, καθώς και τμήματα από μικρά αντικείμενα και ιστούς σε αποσύνθεση. Επομένως, κομμάτια ιστού, κατά κανόνα, χύνονται σε μέσα σφράγισης - ή σελοϊδίνη. Το σταθεροποιημένο αφυδατώνεται σε αλκοόλες αυξανόμενης περιεκτικότητας, περνιέται μέσω ενός ενδιάμεσου διαλύτη (ξυλόλιο ή για παραφίνη, αλκοόλ-αιθέρας για σελοειδή) και εμποτίζεται με παραφίνη ή σελοϊδίνη. στην παραφίνη σας επιτρέπει να αποκτήσετε λεπτότερα τμήματα (από 5-8 έως 1-2 μικρόν) από την σελοϊδίνη. Οι τομές για μικροσκοπική εξέταση παρασκευάζονται χρησιμοποιώντας αντικειμενοφόρο ή περιστροφικό μικροτόμο. Εξαιρετικά λεπτά τμήματα (πάχος από 90-100 έως 5-15 nm) που είναι απαραίτητες για ηλεκτρονικές μικροσκοπικές μελέτες προετοιμάζονται σε υπερτόμο. Τα Ultratomes χρησιμοποιούνται επίσης σε μικροσκοπία φωτός για τη λήψη ημι-λεπτών τομών. Οι προετοιμασμένες τομές βάφονται για να τονιστούν ξεκάθαρα οι δομές των κυττάρων και των ιστών που αντιλαμβάνονται διαφορετικά τις βαφές. Οι κύριες χρωστικές - χρωστικές βάσεις και τα άλατά τους (, μπλε τολουιδίνης, γαλάζιο, καφέ βίσμαρκ) - λεκιάζουν τις λεγόμενες βασεόφιλες δομές (πυρήνες κυττάρων, συνδετικός ιστός). Όξινες βαφές - χρωστικά οξέα και τα άλατά τους (πικρικό οξύ, ερυθροσίνη) - χρωματίζουν οξόφιλες ή οξυφιλικές δομές (κυτταρόπλασμα κυττάρων, κολλαγόνο, ελαστικές ίνες). Η χρώση πρέπει να διακρίνεται με εμποτισμό - μια ειδική μέθοδος που βασίζεται σε ορισμένες περιοχές κυττάρων και ιστών για την αποκατάσταση βαρέων μετάλλων (για παράδειγμα, ασήμι, χρυσό, όσμιο) από τα άλατά τους και έτσι αποκτούν έντονο χρώμα. Η προετοιμασία ενός ιστολογικού σκευάσματος ολοκληρώνεται με την τοποθέτησή του σε μέσα που διασφαλίζουν τη διατήρηση των δομών του αντικειμένου, το χρώμα και τη διαφάνειά του. Τις περισσότερες φορές, για τους σκοπούς αυτούς χρησιμοποιούνται οργανικές ρητίνες, για παράδειγμα.
1. Μικρή ιατρική εγκυκλοπαίδεια. - Μ.: Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια. 1991-96 2. Πρώτες βοήθειες. - Μ.: Μεγάλη Ρωσική Εγκυκλοπαίδεια. 1994 3. Εγκυκλοπαιδικό λεξικό ιατρικών όρων. - Μ.: Σοβιετική Εγκυκλοπαίδεια. - 1982-1984.
Δείτε τι είναι οι "Μέθοδοι Ιστολογικής Έρευνας" σε άλλα λεξικά:
Μεθοδικές προσεγγίσεις και μέθοδοι έρευνας στην ανθρώπινη ανατομία- Μερικές φορές ακούει κανείς ότι δεν έχει μείνει τίποτα στην ανατομία για μελέτη, έρευνα, υποτίθεται ότι όλα τα θέματα έχουν εξαντληθεί, ό,τι μπορούσε να μελετηθεί έχει ήδη μελετηθεί, όλα τα θέματα έχουν λυθεί. Λες και όλα όσα αφορούν τη δομή του ανθρώπινου σώματος, ... ... Γλωσσάρι όρων και εννοιών για την ανθρώπινη ανατομία
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΕΡΕΥΝΑ- ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΕΡΕΥΝΑ. βλέπε ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΜΕΛΕΤΕΣ. Η σημαντικότερη προϋπόθεση για την απόκτηση αξιόπιστων ερευνητικών αποτελεσμάτων είναι η σωστή επιλογή των αντικειμένων ανάλυσης, η έγκαιρη επιλογή τους και η διατύπωση του ερευνητικού προβλήματος. Κανόνες δειγματοληψίας… Fish Diseases: A Handbook
I Medicine Η Ιατρική είναι ένα σύστημα επιστημονικής γνώσης και πρακτικής που στοχεύει στην ενίσχυση και τη διατήρηση της υγείας, την παράταση της ζωής των ανθρώπων και την πρόληψη και θεραπεία ανθρώπινων ασθενειών. Για να ολοκληρώσει αυτά τα καθήκοντα, ο Μ. μελετά τη δομή και ... ... Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
Τρόποι μελέτης διαφόρων αντικειμένων χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο. Στη βιολογία και την ιατρική, αυτές οι μέθοδοι καθιστούν δυνατή τη μελέτη της δομής μικροσκοπικών αντικειμένων των οποίων οι διαστάσεις βρίσκονται πέρα από την ανάλυση του ανθρώπινου ματιού. Η βάση του Μ.μ.ι. συνθέτει…… Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
- (ιστολογικό κυτταρικό κύτταρο + ελληνικό δόγμα logos) βασίζεται στη μελέτη με τη χρήση μικροσκοπίου των δομικών χαρακτηριστικών των κυττάρων, της κυτταρικής σύνθεσης των οργάνων των ιστών, των σωματικών υγρών ανθρώπων και ζώων σε φυσιολογικές και παθολογικές διεργασίες. Γ. και............ Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
Η Ιστολογία (ελληνική διδασκαλία ιστός ιστός + logos) είναι μια βιοϊατρική επιστήμη που μελετά την εξέλιξη των ιστών, την ανάπτυξή τους στο σώμα (ιστογένεση), τη δομή, τις λειτουργίες και την αλληλεπίδραση σε πολυκύτταρα ζώα και ανθρώπους. Το κύριο αντικείμενο μελέτης του Γ. ... ... Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
I Vulva (vulva; pudendum femininum) εξωτερικά γυναικεία γεννητικά όργανα (σύμφωνα με τη Διεθνή Ανατομική Ονοματολογία γυναικεία γεννητική περιοχή). Ανατομία και φυσιολογία. Ο αιδοίος (Εικ. 1) βρίσκεται έξω από τα ηβικά οστά της λεκάνης και συνδέεται με αυτά ... ... Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
Μελετώντας τις αλλαγές που προκαλούνται στον οργανισμό από διάφορες ασθένειες, στοχεύει, με τις εγγενείς ερευνητικές μεθόδους του, τόσο να προσδιορίσει αυτές τις διαδικασίες της νόσου όσο και τη σημασία τους σε σχέση με την κλινική εικόνα της νόσου και του θανάτου ... ... Εγκυκλοπαιδικό Λεξικό F.A. Brockhaus και I.A. Έφρον
I Βιοψία (ελληνικά bios life + opsis όραση, οπτική αντίληψη) ενδοβιολογική λήψη ιστών, οργάνων ή αιωρημάτων κυττάρων για μικροσκοπική εξέταση για διαγνωστικούς σκοπούς, καθώς και για μελέτη της δυναμικής της παθολογικής διαδικασίας και επιρροής ... ... Ιατρική Εγκυκλοπαίδεια
Η επιστήμη που μελετά τους ιστούς των ζώων. Ένας ιστός είναι μια ομάδα κυττάρων που είναι παρόμοια σε σχήμα, μέγεθος και λειτουργία και στα μεταβολικά τους προϊόντα. Σε όλα τα φυτά και τα ζώα, με εξαίρεση τα πιο πρωτόγονα, το σώμα αποτελείται από ιστούς, ... ... Εγκυκλοπαίδεια Collier
- (από το ελληνικό ἱστός και το ελληνικό λόγος γνώση, λέξη, επιστήμη) κλάδος της βιολογίας που μελετά τη δομή των ιστών των ζωντανών οργανισμών. Αυτό γίνεται συνήθως με ανατομή του ιστού σε λεπτές στρώσεις και με χρήση μικροτόμου. Σε αντίθεση με την ανατομία, ... ... Wikipedia
Βιβλία
- Πολλαπλό Μυέλωμα και Ασθένειες Πλασματοκυττάρων, Ramasami Kartik, Lonial Sagar. Το βιβλίο παρουσιάζει τις κύριες κλινικές πτυχές του πολλαπλού μυελώματος και άλλων παθήσεων των πλασματοκυττάρων. Περιγράφονται εργαστηριακές μελέτες, παθογένεια, διάγνωση και θεραπεία. Στο δεύτερο…
Τα αντικείμενα μελέτης μπορεί να είναι σταθερά (νεκρά) ή ζωντανά κύτταρα και ιστοί.
Για τη μελέτη της μικροδομής των πρώτων υλών και των κτηνοτροφικών προϊόντων, κατά κανόνα χρησιμοποιούνται σταθερά κύτταρα και ιστοί. Τα σκευάσματα είναι προσωρινά, προορίζονται για μία μόνο μελέτη και μόνιμα, τα οποία μπορούν να αποθηκευτούν και να εξεταστούν επανειλημμένα. Επιπλέον, χρησιμοποιούνται ολικά ή ολόκληρα παρασκευάσματα.
Προσωρινά φάρμακαμπορεί να μαγειρευτεί σχετικά γρήγορα. Για αυτό, το υπό μελέτη υλικό στερεώνεται και λαμβάνονται τομές σε ψυκτικό μικροτόμο· ελλείψει αυτού, μπορεί να κατασκευαστεί ένα λεπτό τμήμα ιστού ή οργάνου με νυστέρι ή λεπίδα. Το προκύπτον τμήμα χρωματίζεται, τοποθετείται σε γυάλινη πλάκα και στη συνέχεια εφαρμόζεται μια σταγόνα γλυκερίνης και καλύπτεται με καλυπτρίδα. Για την ανίχνευση αμύλου, χρησιμοποιείται ένα διάλυμα ιωδίου σε ιωδιούχο κάλιο: 0,5 g ιωδιούχου καλίου διαλύονται σε μικρή ποσότητα νερού, προστίθεται 1 g κρυσταλλικού ιωδίου και προστίθεται νερό σε 100 cm 3. Μερικές σταγόνες αντιδραστηρίου εφαρμόζονται σε ένα λεπτό κομμάτι λουκάνικου, τυριού και άλλου υλικού που βρίσκεται σε μια γυάλινη πλάκα, το άμυλο γίνεται μπλε-ιώδες.
Συνολικές ή Ολόκληρες Παρασκευέςεξετάστηκε χωρίς να ληφθεί τμήμα ιστού ή οργάνου. Για παράδειγμα, ένα φιλμ υποδόριου ιστού ή ένα θρυμματισμένο παρασκεύασμα μιας ρίζας φυτού μετά τη στερέωση, το πλύσιμο και τη χρώση περικλείεται μεταξύ μιας πλάκας και μιας καλυπτρίδας. Για τον εντοπισμό μεμονωμένων δομικών στοιχείων, τα σταθερά και χρωματισμένα κομμάτια υποδόριου ιστού ή λείου μυϊκού ιστού αφαιρούνται με μια βελόνα σε μια γυάλινη πλάκα - τέτοια παρασκευάσματα ονομάζονται μαδημένα. Σε ορισμένες περιπτώσεις, για παράδειγμα, κατά την εξέταση του φιλμ του αμφιβληστροειδούς του βολβού του ματιού ή του δέρματος ενός γυρίνου, μετά τη στερέωση και το πλύσιμο, δεν πραγματοποιείται χρωματισμός, καθώς τα κύτταρα περιέχουν οργανικά εγκλείσματα (χρωστική ουσία) που έχουν φυσικό χρώμα.
Τρόπος παρασκευής ιστολογικού σκευάσματος.Η κύρια μέθοδος για τη μελέτη των σταθερών κυττάρων και ιστών είναι η ιστολογική, δηλ. μελέτη ενός χρωματισμένου τμήματος ιστού που περικλείεται σε ειδικό μέσο. Για τη λήψη τμημάτων, χρησιμοποιείται η έκχυση του υλικού δοκιμής σε παραφίνη ή σελοϊδίνη, γεγονός που καθιστά δυνατή τη λήψη λεπτών τμημάτων (5-7 μικρά ή 10-30 μικρά, αντίστοιχα), για γρήγορη προετοιμασία τμημάτων (40-60 μικρά), κατάψυξη χρησιμοποιείται τεχνική.
Τα κύρια στάδια στην προετοιμασία ενός ιστολογικού δείγματος είναι: δειγματοληψία, στερέωση, πλύση, αφυδάτωση, ενσωμάτωση σε παραφίνη ή σελιδίνη, χρώση, τοποθέτηση κάτω από καλυπτρίδα.
Επιλογή δείγματοςγίνεται λαμβάνοντας υπόψη τον σκοπό της μελέτης και τη δομή του υλικού. Το μέγεθος του δείγματος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 2,5-3,0 cm κατά μέσο όρο.Δείγματα ήπατος και σπλήνας λαμβάνονται με κάψουλα. Κομμάτια του κόλπου αποκόπτονται από την καρδιά, αφού οι μεμβράνες είναι πιο λεπτές από τις κοιλίες και σε ένα παρασκεύασμα μπορεί κανείς να δει την τοπογραφική σχέση του επικαρδίου, του μυοκαρδίου και του ενδοκαρδίου. Από τα νεφρά, τους λεμφαδένες, τα επινεφρίδια, τα τμήματα οργάνων αποκόπτονται που πηγαίνουν βαθιά στην επιφάνεια κάθετα προς την επιφάνεια, έτσι ώστε ο φλοιός και ο μυελός να αποκαλύπτονται στο παρασκεύασμα. Εάν είναι απαραίτητο να προετοιμαστούν παρασκευάσματα αλλαγμένων οργάνων, κομμάτια του υλικού δοκιμής κόβονται στο όριο με την πληγείσα περιοχή, έτσι ώστε η ζώνη μετάβασης της βλάβης να συμπεριληφθεί στο δείγμα. Τα δείγματα από τους σκελετικούς μύες πρέπει να κόβονται έτσι ώστε οι μυϊκές ίνες να βρίσκονται σε διαμήκη και εγκάρσια τμήματα. Δείγματα δειγμάτων κιμά, cottage cheese και άλλα δείγματα που θρυμματίζονται τοποθετούνται πρώτα σε ένα κομμάτι γάζας και δένονται με μια κλωστή. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι κατά το άνοιγμα της θωρακικής κοιλότητας, οι πνεύμονες καταρρέουν λόγω ελαστικότητας, χάνοντας σημαντικά τον αέρα, επομένως, ένας γυάλινος ή ελαστικός σωλήνας εισάγεται στην τραχεία των εξαγόμενων αναπνευστικών οργάνων, μέσω των οποίων εγχέεται μέτρια αέρα . Εφαρμόζεται μεταξωτός σύνδεσμος στην τραχεία κάτω από τον εισαγόμενο σωλήνα και δένεται ένα φορτίο για πλήρη βύθιση. Για τη στερέωση των εντέρων, ένα τμήμα του οργάνου που προορίζεται για στερέωση επικαλύπτεται προκαταρκτικά με απολινώσεις και στις δύο πλευρές. Τα δείγματα παρέχονται με χοντρές χάρτινες ετικέτες που υποδεικνύουν τον αριθμό και την ημερομηνία δειγματοληψίας.
στερέωση,εκείνοι. Η διατήρηση της φυσικής (διάρκειας ζωής) αρχιτεκτονικής πραγματοποιείται προκειμένου να μεταφερθεί το ζωντανό πρωτόπλασμα των δομών σε αμετάβλητη κατάσταση. Η δράση των σταθεροποιητικών εκδηλώνεται στο γεγονός ότι ως αποτέλεσμα βιοφυσικών διεργασιών, εμφανίζεται μη αναστρέψιμη πήξη πρωτεϊνών σε ιστούς και όργανα. Το δείγμα ιστού που λαμβάνεται από το όργανο βυθίζεται στο σταθεροποιητικό το συντομότερο δυνατό. η αναλογία του όγκου του υλικού και του υγρού στερέωσης πρέπει να είναι τουλάχιστον 1:9 (Εικ. 3).
Η στερέωση οδηγεί σε κάποια συμπίεση και μείωση του όγκου του δείγματος. Τις περισσότερες φορές, 10-12% φορμαλίνη, αιθυλική αλκοόλη, ακετόνη χρησιμοποιούνται για στερέωση. Για να παρασκευαστεί η ενδεικνυόμενη συγκέντρωση του υγρού στερέωσης, 40% φορμαλίνη αραιώνεται με νερό βρύσης. Η αιθυλική αλκοόλη (100% απόλυτη, ή 96%) χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου είναι απαραίτητο να εντοπιστούν ουσίες που διαλύονται σε υδατικά σταθεροποιητικά (για παράδειγμα, γλυκογόνο) σε τομές. Στην ακετόνη, το υπό μελέτη υλικό (για παράδειγμα, ο εγκέφαλος) σταθεροποιείται για λίγες μόνο ώρες. Όταν το υπό μελέτη όργανο, όπως ο οστικός ιστός, περιέχει ασβέστη, πραγματοποιείται απασβέστωση ή ασβεστοποίηση. Για να γίνει αυτό, ένα μικρό κομμάτι οστού χαμηλώνεται (είναι καλύτερα να το κρεμάσετε σε μια κλωστή) σε ένα υδατικό διάλυμα νιτρικού οξέος 5-8%, το οποίο αλλάζει 2-3 φορές την ημέρα. Το αποτέλεσμα της απασβέστωσης κρίνεται με την τοποθέτηση μιας λεπτής βελόνας στο οστό: αν δεν υπάρχει αντίσταση, η απασβέστωση ολοκληρώνεται. Μετά από ένα τέτοιο υπέρ-
έξαψηπραγματοποιείται για την αφαίρεση περίσσειας ποσότητας σταθεροποιητικού, για παράδειγμα, μετά τη στερέωση με φορμαλίνη, το πλύσιμο πραγματοποιείται με τρεχούμενο νερό βρύσης.
Αφυδάτωσηπραγματοποιείται για τη συμπύκνωση του υλικού σε αιθυλική αλκοόλη αυξανόμενης συγκέντρωσης: 50-70-100. Για την παρασκευή αλκοόλης 50% και 70%, οινόπνευμα 96% αραιώνεται με απεσταγμένο νερό. Για την παρασκευή 100% αλκοόλης, είναι απαραίτητο να θερμανθεί ο θειικός χαλκός μέχρι να αφυδατωθεί πλήρως και να προστεθεί 96% αιθυλική αλκοόλη στην αφυδατωμένη λευκή σκόνη. Σε κάθε συγκέντρωση αλκοόλης, το υλικό διατηρείται για 1-24 ώρες, ανάλογα με το μέγεθος των κομματιών, τη δομή του οργάνου. σε αλκοόλη 70%, το υλικό μπορεί να διατηρηθεί για αρκετές ημέρες.
γέμισμαπραγματοποιείται σε τέτοιο μέσο ώστε το δείγμα δοκιμής να γίνεται στερεό, γεγονός που καθιστά δυνατή τη λήψη λεπτών τμημάτων. Για να το κάνετε αυτό, χρησιμοποιήστε παραφίνη (εμποτισμός για 1-4 ώρες), σελοϊδίνη (εμποτισμός για τρεις εβδομάδες). Όταν αποκαλύπτονται λίπη και για τη μελέτη χαλαρών ιστών και οργάνων, χρησιμοποιείται η έκχυση σε ζελατίνη.
φέτεςλαμβάνουν σε έλκηθρο ή περιστροφικούς μικροτόμους. Τα λεπτότερα τμήματα (5-7 μικρά) μπορούν να κατασκευαστούν από υλικό ενσωματωμένο σε παραφίνη. Τομές πάχους 15-20 μικρών παρασκευάζονται από το υλικό που είναι γεμάτο με σελοϊδίνη. Για τη μελέτη της μικροδομής των πρώτων υλών και των προϊόντων ζωικής προέλευσης, κατά κανόνα, χρησιμοποιείται μια τεχνική κατάψυξης. Αυτό επιταχύνει την προετοιμασία του σκευάσματος, αφού εξαλείφονται τα μεγάλα στάδια αφυδάτωσης και έκχυσης. Μετά τη στερέωση και το πλύσιμο, τα κομμάτια του αντικειμένου τοποθετούνται σε υγρή βαθμίδα ψυκτικού μικροτόμου και λαμβάνονται τομές πάχους 40-60 μm. Τα τμήματα μεταφέρονται με μια βούρτσα στο νερό, όπου ισιώνουν, αποκτώντας την εμφάνιση των πιο λεπτών γκριζωπών κομματιών.
Βαφή τομήςπραγματοποιείται για την αύξηση της αντίθεσης διαφόρων δομών σε παρασκευάσματα που προορίζονται για εξέταση σε μικροσκόπιο φωτός. Στη διαδικασία της χρώσης, συμβαίνουν πολύπλοκες χημικές και φυσικές διεργασίες, επομένως, κατά την επιλογή μιας μεθόδου, λαμβάνεται υπόψη η εκλεκτική συγγένεια των δομών των κυττάρων για ορισμένες χρωστικές με διαφορετικές φυσικοχημικές ιδιότητες.
Υπάρχουν βαφές βασικές (βασικές), όξινες και ειδικές. Οι δομές που βάφονται με βασικές βαφές ονομάζονται βασεόφιλος,όξινες βαφές - οξυφιλικό, οξεόφιλο, ηωσινόφιλο.
Από τις βασικές (βασικές) βαφές χρησιμοποιείται αιματοξυλίνη, η οποία χρωματίζει τη χρωματίνη του πυρήνα και άλλες δομές που περιέχουν πρωτεΐνη σε μπλε ή μοβ. καρμίνη, χρωματίζοντας τον πυρήνα σε ανοιχτό κόκκινο χρώμα, σαφρανίνη - σκούρο κόκκινο χρώμα, θειονίνη - μπλε χρώμα.
Από τις όξινες βαφές χρησιμοποιείται η ηωσίνη (χρωματίζει το κυτταρόπλασμα ροζ), το πικρινικό οξύ (κίτρινο), το φούξιν (χρώμα τούβλου), το λουλακί καρμίνη (μπλε).
Κατά τη μελέτη της μικροδομής των πρώτων υλών και των κτηνοτροφικών προϊόντων, χρησιμοποιείται συχνότερα συνδυασμένη χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Για να γίνει αυτό, τμήματα από νερό μεταφέρονται για 1-3 λεπτά σε διάλυμα αιματοξυλίνης. Πλένεται σε νερό για 20-30 λεπτά, τοποθετείται σε διάλυμα ηωσίνης για 3-5 λεπτά και πλένεται με νερό για 3-5 λεπτά. Το υπόλοιπο νερό αφαιρείται με διηθητικό χαρτί, εφαρμόζεται μια σταγόνα αιθανόλης 96% για 1-2 λεπτά και αφυδατώνεται σε διάλυμα καρβολικού οξέος 25% σε ξυλόλιο ή τολουόλιο. Στη συνέχεια, 1-2 σταγόνες βάλσαμου εφαρμόζονται στην τομή και καλύπτονται με καλυπτρίδα.
Από τις βαφές που χρωματίζουν τα λιπαρά εγκλείσματα, χρησιμοποιείται συχνά το Sudan 111. Για την παρασκευή ενός διαλύματος βαφής σε 95 cm 3 αιθυλικής αλκοόλης 85%, προστίθενται 5 cm 3 ακετόνης και χύνεται σκόνη Sudan III μέχρι να ληφθεί ένα κορεσμένο διάλυμα (το η βαφή πρέπει να περιέχεται σε περίσσεια). Το μίγμα θερμαίνεται στους 50% C και διηθείται. Οι τομές που λαμβάνονται σε μικροτόμο κατάψυξης τοποθετούνται σε αιθανόλη 50% για 1-2 λεπτά και στη συνέχεια στο Σουδάν III για 25 λεπτά. Τα τμήματα ξεπλένονται σε αλκοόλη 50%, πλένονται με απεσταγμένο νερό και ενσωματώνονται σε γλυκερίνη-ζελατίνη.
Οι σταγόνες ουδέτερου λίπους γίνονται πορτοκαλί λόγω της διάλυσης του Sudan III στα λίπη. Τα εγκλείσματα λίπους μπορούν επίσης να ανιχνευθούν με ωσμικό οξύ, ενώ οι λιπαρές δομές βάφονται μαύρες.
Συμπέρασμα κάτω από το εξώφυλλοπραγματοποιούνται σε περιβάλλοντα που δεν επιτρέπουν τη διέλευση του αέρα και είναι σε θέση να διατηρήσουν το κόψιμο για μεγάλο χρονικό διάστημα. Τα λεκιασμένα τμήματα αφυδατώνονται σε αλκοόλες αυξανόμενης περιεκτικότητας και τοποθετούνται κάτω από μια καλυπτρίδα σε έλατο, καναδικό βάλσαμο ή γλυκερόλη-ζελατίνη (το παρασκεύασμα δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με αλκοόλες και ξυλόλιο).
Προετοιμασία δειγμάτων για ηλεκτρονική μικροσκοπία.Για τη μελέτη βιολογικών αντικειμένων, χρησιμοποιούνται δύο τύποι ηλεκτρονικών μικροσκοπίων: μετάδοση (μετάδοση) και σάρωση (ράστερ).
Η αρχή της επεξεργασίας ενός αντικειμένου για εξέταση σε ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης βασίζεται στις ίδιες αρχές όπως και για τα οπτικά μικροσκόπια: δειγματοληψία, στερέωση, πλύση, αφυδάτωση, έκχυση, προετοιμασία εξαιρετικά λεπτών τμημάτων, αντίθεση.
Επιλογή δείγματοςεκτελείται λαμβάνοντας υπόψη το σκοπό της μελέτης και τη δομή του υλικού, σύμφωνα με τους ίδιους κανόνες όπως και για τη μικροσκοπία φωτός. Ο όγκος των τεμαχίων του μελετημένου υλικού δεν πρέπει να υπερβαίνει το 1 mm 3 . Ο κύριος σκοπός της στερέωσης είναι να κρατήσει τον ιστό όσο το δυνατόν πιο κοντά στη ζωή.
ΣτερέωσηΠραγματοποιείται για την καλύτερη διατήρηση των δομών, επομένως, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν αντιδραστήρια με ορισμένο pH και ισοτονικότητα, οι τιμές των οποίων καθορίζονται από τον τύπο του ιστού που στερεώνεται. Η διαδικασία στερέωσης πραγματοποιείται σε δύο στάδια: προκαθορισμός και μεταστερέωση. Για την προκαθήλωση χρησιμοποιείται διάλυμα 2,5-3% διαλύματος γλουταραλδεΰδης (pH 7,2-7,4), η διάρκεια της στερέωσης είναι 2-4 ώρες. Η μεταστερέωση πραγματοποιείται σε διάλυμα 2% (pH 7,2-7,4 ) - 1- 2 ώρες Για να διατηρηθεί η ενδοζωτική δομή, συνιστάται η χρήση σταθεροποιητικού χαμηλής θερμοκρασίας (0-4 °C) και η παρασκευή στερεωτικών σε διαλύματα φωσφορικού ρυθμιστικού, κακοδυλικού, οξικού βερονάλης.
έξαψηπραγματοποιείται με 30% κρύο οινόπνευμα 5-7 φορές, το αντικείμενο διατηρείται σε κάθε δόση αλκοόλης για 30 λεπτά, δηλ. πλυθεί από το σταθεροποιητικό σε μια τέτοια κατάσταση όταν παύσει η οξειδωτική δράση του σταθεροποιητικού.
Αφυδάτωσηεκτελέστε με αιθυλικές αλκοόλες αυξανόμενης ισχύος: 30, 50, 70, 96, 100% για 30 λεπτά. Για ορισμένες μεθόδους έκχυσης, συνιστάται η προσθήκη ακετόνης και οξειδίου του προπυλενίου για αφυδάτωση.
γέμισμαπου πραγματοποιείται σε εποξειδικές ρητίνες (αραλδίτη, επόν κ.λπ.). Ο πολυμερισμός των ρητινών σε κάψουλες πραγματοποιείται σε θερμοστάτη στους 60 °C μέχρι τη σκλήρυνση, κατά κανόνα, εντός 1-2 ημερών.
Υπερλεπτές τομέςλαμβάνονται με χρήση γυάλινων μαχαιριών σε υπερμικρότομο· γι 'αυτό, τα εποξειδικά μπλοκ ακονίζονται με τη μορφή τετραεδρικής κόλουρης πυραμίδας. Σειριακές γκριζωπές τομές τοποθετούνται σε λουτρό με 10% αιθανόλη. Τα προκύπτοντα τμήματα τοποθετούνται σε πλέγματα χαλκού ή παλλαδίου, στην επιφάνεια των οποίων εφαρμόζεται προκαταρκτικά μια μεμβράνη formvar. Για να αποκαλυφθούν οι απαραίτητες δομές, τα τμήματα στα πλέγματα υποβάλλονται σε επεξεργασία με διαλύματα κιτρικού μολύβδου και οξικού ουρανυλίου.
Για ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσηςτο δείγμα δοκιμής σταθεροποιείται, αφυδατώνεται, ανάλογα με το σκοπό της μελέτης, χρησιμοποιώντας τα παραπάνω σταθεροποιητικά. Μετά την αφυδάτωση, το δείγμα κολλάται σε ένα αντικείμενο υποδοχής, τοποθετείται σε μονάδα ψεκασμού και επικαλύπτεται με ένα πολύ λεπτό στρώμα χρυσού ή πλατίνας. Σε αντίθεση με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης, το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης μπορεί να χρησιμοποιήσει διαβρωτικά παρασκευάσματα: το αντικείμενο μελέτης χύνεται με ορισμένες σκληρυντικές ουσίες και στη συνέχεια εξετάζονται εκμαγεία και επιφάνειες. Μελετούν επίσης αντίγραφα που λαμβάνονται με κατάψυξη - θρυμματισμό. Στην περίπτωση αυτή, εξετάζεται μια εντύπωση της διάσπασης της επιφάνειας του αντικειμένου. Για να αυξηθεί η αντίθεση, τα αντίγραφα πρέπει να σκιάζονται με ψεκασμό μεταλλικών σωματιδίων (χρυσό, πλατίνα) ή άνθρακα.
ερωτήσεις δοκιμής
- 1. Ποιες μέθοδοι χρησιμοποιούνται στη μελέτη κυτταρικών δομών, ιστών και οργάνων;
- 2. Ποιοι είναι οι βασικοί κανόνες που πρέπει να ακολουθούνται κατά τη λήψη δειγμάτων για την παρασκευή ιστολογικών σκευασμάτων;
- 3. Ποια είναι τα χαρακτηριστικά της παρασκευής σκευασμάτων από οστικό ιστό;
- 4. Πώς στερεώνεται το υλικό δοκιμής;
- 5. Τι χρησιμοποιείται για την αφυδάτωση των σκευασμάτων;
- 6. Ποια μέσα χρησιμοποιούνται για την έκχυση του υλικού δοκιμής;
- 7. Ποια βαφή χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του λιπώδους ιστού;
- 8. Ποια είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος τομής και γιατί;
- 9. Να αναφέρετε τα κύρια στάδια προετοιμασίας των δειγμάτων για μετάδοση και ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης.
Ιστολογία - («γκιστός» στα ελληνικά - ιστός, λογής - διδασκαλία) Πρόκειται για την επιστήμη της δομής, της ανάπτυξης και της ζωτικής δραστηριότητας των ιστών πολυκύτταρων οργανισμών και ανθρώπων. Τα αντικείμενα που αποτελούν αντικείμενο αυτής της επιστήμης είναι απρόσιτα με γυμνό μάτι. Ως εκ τούτου, η ιστορία της ιστολογίας συνδέεται στενά με την ιστορία της δημιουργίας τέτοιων οργάνων που μας επιτρέπουν να μελετήσουμε τα μικρότερα αντικείμενα με γυμνό μάτι. 2
Το μάθημα της ιστολογίας χωρίζεται συμβατικά στις ακόλουθες ενότητες: n 1. Κυτταρολογία είναι η επιστήμη του κυττάρου. n 2. Η εμβρυολογία είναι η επιστήμη της ανάπτυξης, από την αρχή έως τον πλήρη σχηματισμό ενός οργανισμού. n 3. Γενική ιστολογία - η επιστήμη των γενικών προτύπων που είναι εγγενείς στους ιστούς. n 4. Ιδιωτική ιστολογία - μελετά τη δομή, την ανάπτυξη οργάνων και συστημάτων.
ΚΥΤΤΟΛΟΓΙΑ - (ελληνικά κύτος "κύτταρο" και λόγος - "μελέτη", "επιστήμη") n κλάδος της βιολογίας που μελετά τα ζωντανά κύτταρα, τα οργανίδια τους, τη δομή, τη λειτουργία τους, τις διαδικασίες αναπαραγωγής των κυττάρων, τη γήρανση και τον θάνατο. τέσσερις
ΕΜΒΡΥΟΛΟΓΙΑ n (από άλλα -ελληνικά ἔμβρυον - έμβρυο, έμβρυο + -λογία από λόγος - διδασκαλία) είναι επιστήμη που μελετά την ανάπτυξη του εμβρύου. 5
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας 1590. Ο Jansen εφηύρε το μικροσκόπιο, στο οποίο η μεγέθυνση παρείχε τη σύνδεση δύο φακών. 1665. Ο Ρόμπερτ Χουκ χρησιμοποίησε για πρώτη φορά τον όρο κύτταρο. 1650-1700 χρόνια. Ο Anthony van Leeuwenhoek περιέγραψε για πρώτη φορά βακτήρια και άλλους μικροοργανισμούς. 1700-1800 χρόνια. Πολλές νέες περιγραφές και σχέδια διαφόρων ιστών, κυρίως φυτικών, έχουν δημοσιευτεί. Το 1827 ο Karl Baer ανακάλυψε το αυγό στα θηλαστικά. 1831 -1833 χρόνια. Ο Robert Brown περιέγραψε τον πυρήνα στα φυτικά κύτταρα. 1838 -1839 χρόνια. Ο βοτανολόγος Matthias Schleiden και ο ζωολόγος Theodor Schwann συνδύασαν τις ιδέες διαφορετικών επιστημόνων και διατύπωσαν την κυτταρική θεωρία, η οποία υπέθεσε ότι η βασική μονάδα δομής και λειτουργίας στους ζωντανούς οργανισμούς είναι το κύτταρο. 1855 Ο Rudolf Virchow έδειξε ότι όλα τα κύτταρα σχηματίζονται ως αποτέλεσμα κυτταρικών διαιρέσεων.
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας 1665. Εξετάζοντας ένα τμήμα φελλού κάτω από ένα μικροσκόπιο, ένας Άγγλος επιστήμονας, φυσικός Robert Hooke ανακάλυψε ότι αποτελείται από κύτταρα που χωρίζονται από χωρίσματα. Αυτά τα κύτταρα τα ονόμασε "κύτταρα"
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας Τον 17ο αιώνα, ο Leeuwenhoek σχεδίασε ένα μικροσκόπιο και άνοιξε την πόρτα στον μικρόκοσμο για τους ανθρώπους. Μια ποικιλία από βλεφαρίδες, rotifers και άλλα μικροσκοπικά ζωντανά πλάσματα έλαμψαν μπροστά στα μάτια των έκπληκτων ερευνητών. Αποδείχθηκε ότι υπάρχουν παντού - αυτοί οι μικρότεροι οργανισμοί: στο νερό, την κοπριά, στον αέρα και τη σκόνη, στη γη και τις υδρορροές, σε σάπια απόβλητα ζωικής και φυτικής προέλευσης.
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας 1831-1833. Ο Robert Brown περιέγραψε τον πυρήνα στα φυτικά κύτταρα. Το 1838, ο Γερμανός βοτανολόγος M. Schleiden επέστησε την προσοχή στον πυρήνα και θεώρησε ότι ήταν ο δημιουργός του κυττάρου. Σύμφωνα με τον Schleiden, ένας πυρήνας συμπυκνώνεται από μια κοκκώδη ουσία, γύρω από την οποία σχηματίζεται ένας πυρήνας, και γύρω από τον πυρήνα - ένα κύτταρο, και ο πυρήνας μπορεί να εξαφανιστεί κατά τη διαδικασία σχηματισμού κυττάρων.
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας Ο Γερμανός ζωολόγος T. Schwann έδειξε ότι και οι ζωικοί ιστοί αποτελούνται από κύτταρα. Δημιούργησε μια θεωρία που δηλώνει ότι τα κύτταρα που περιέχουν πυρήνες αντιπροσωπεύουν τη δομική και λειτουργική βάση όλων των ζωντανών όντων. Η κυτταρική θεωρία της δομής διατυπώθηκε και δημοσιεύτηκε από τον T. Schwann το 1839. Η ουσία της μπορεί να εκφραστεί στις ακόλουθες διατάξεις: 1. Το κύτταρο είναι η στοιχειώδης δομική μονάδα της δομής όλων των ζωντανών όντων. 2. Τα κύτταρα των φυτών και των ζώων είναι ανεξάρτητα, ομόλογα μεταξύ τους ως προς την προέλευση και τη δομή. Κάθε κύτταρο λειτουργεί ανεξάρτητα από τα άλλα, αλλά μαζί με όλα. 3. Όλα τα κύτταρα προέρχονται από άδομη μεσοκυττάρια ουσία. (Λάθος!) 4. Η ζωτική δραστηριότητα του κυττάρου καθορίζεται από το κέλυφος. (Λάθος!)
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας Το 1855, ο Γερμανός γιατρός R. Virchow έκανε μια γενίκευση: ένα κύτταρο μπορεί να προκύψει μόνο από ένα προηγούμενο κύτταρο. Αυτό οδήγησε στη συνειδητοποίηση του γεγονότος ότι η ανάπτυξη και η ανάπτυξη των οργανισμών συνδέονται με την κυτταρική διαίρεση και την περαιτέρω διαφοροποίησή τους, οδηγώντας στο σχηματισμό ιστών και οργάνων.
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας από τον Karl Baer Το 1827, ο Karl Baer ανακάλυψε το ωάριο στα θηλαστικά, απέδειξε ότι η ανάπτυξη των θηλαστικών ξεκινά με ένα γονιμοποιημένο ωάριο. Αυτό σημαίνει ότι η ανάπτυξη οποιουδήποτε οργανισμού ξεκινά με ένα γονιμοποιημένο ωάριο, το κύτταρο είναι η μονάδα ανάπτυξης.
Η ιστορία της δημιουργίας της κυτταρικής θεωρίας 1865 Δημοσιεύονται οι νόμοι της κληρονομικότητας (G. Mendel). 1868 Ανακαλύφθηκαν νουκλεϊκά οξέα (F. Miescher) 1873 Ανακαλύφθηκαν χρωμοσώματα (F. Schneider) 1874 Ανακαλύφθηκε μίτωση σε φυτικά κύτταρα (I. D. Chistyakov) 1878 Ανακαλύφθηκε μιτωτική διαίρεση ζωικών κυττάρων (W. Fleming, P. I. Peremezh) Fleming - η συμπεριφορά των χρωμοσωμάτων κατά τη διαίρεση. 1882 Ανακαλύφθηκε η μείωση σε ζωικά κύτταρα (W. Fleming) 1883 Αποδείχθηκε ότι ο αριθμός των χρωμοσωμάτων στα γεννητικά κύτταρα είναι δύο φορές μικρότερος από ό,τι στα σωματικά κύτταρα (E. Van Beneden) 1887 Η μείωση ανακαλύφθηκε σε φυτικά κύτταρα (E. Strasburger ) 1898 Ο Golgi ανακάλυψε τη συσκευή πλέγματος του κυττάρου, τη συσκευή Golgi. 1914 Διατυπώνεται η χρωμοσωμική θεωρία της κληρονομικότητας (T. Morgan). 1924 Δημοσιεύεται η φυσική-επιστημονική θεωρία για την προέλευση της ζωής στη Γη (A. I. Oparin). 1953 Διατυπώθηκαν ιδέες για τη δομή του DNA και δημιουργήθηκε το μοντέλο του (D. Watson και F. Crick). 1961 Καθορίζονται η φύση και οι ιδιότητες του γενετικού κώδικα (F. Crick, L. Barnet, S. Benner).
Οι κύριες διατάξεις της σύγχρονης κυτταρικής θεωρίας 1. Ένα κύτταρο είναι ένα στοιχειώδες ζωντανό σύστημα, μια μονάδα δομής, ζωτικής δραστηριότητας, αναπαραγωγής και ατομικής ανάπτυξης των οργανισμών. 2. Τα κύτταρα όλων των ζωντανών οργανισμών είναι ομόλογα, ομοιόμορφα σε δομή και προέλευση. 3. Σχηματισμός κυττάρων. Νέα κύτταρα προκύπτουν μόνο με τη διαίρεση των προϋπαρχόντων κυττάρων. 4. Κύτταρο και οργανισμός. Ένα κύτταρο μπορεί να είναι ένας ανεξάρτητος οργανισμός (προκαρυώτες και μονοκύτταροι ευκαρυώτες). Όλοι οι πολυκύτταροι οργανισμοί αποτελούνται από κύτταρα. 5. Λειτουργίες κυττάρων. Στα κύτταρα πραγματοποιείται ο μεταβολισμός, η ευερεθιστότητα και η διεγερσιμότητα, η κίνηση, η αναπαραγωγή και η διαφοροποίηση. 6. Κυτταρική εξέλιξη. Η κυτταρική οργάνωση προέκυψε στην αυγή της ζωής και προχώρησε σε μεγάλο δρόμο εξελικτικής ανάπτυξης από τις ελεύθερες πυρηνικές μορφές (προκαρυώτες) στις πυρηνικές μορφές (ευκαρυώτες).
ΜΕΘΟΔΟΙ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΗΣΗΣ ΙΣΤΟΛΟΓΙΚΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ 1. Ελαφρύ μικροσκόπιο. 2. Μικροσκόπιο υπεριώδους. 3. Μικροσκόπιο φθορισμού (φωταύγειας). 4. Μικροσκοπία αντίθεσης φάσης. 5. Μικροσκοπία σκοτεινού πεδίου. 6. Μικροσκόπιο παρεμβολής 7. Μικροσκόπιο πόλωσης. 8. Ηλεκτρονική μικροσκοπία. 17
Μικροσκόπιο n Αυτό το οπτικό όργανο σάς επιτρέπει να παρατηρείτε μικρά αντικείμενα. Η μεγέθυνση της εικόνας επιτυγχάνεται με σύστημα αντικειμενικών φακών και προσοφθάλμιου φακού. Ο καθρέφτης, ο συμπυκνωτής και το διάφραγμα κατευθύνουν τη ροή φωτός και ρυθμίζουν τον φωτισμό του αντικειμένου. Το μηχανικό μέρος του μικροσκοπίου περιλαμβάνει: ένα τρίποδο, ένα τραπέζι αντικειμένων, μακρο- και μικρομετρικές βίδες, ένα στήριγμα σωλήνα. δεκαοχτώ
Ειδικές μέθοδοι μικροσκοπίας: - μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης - (για τη μελέτη ζωντανών μη χρωματισμένων αντικειμένων) - η μικροσκοπία σας επιτρέπει να μελετάτε ζωντανά και μη χρωματισμένα αντικείμενα. Όταν το φως διέρχεται από έγχρωμα αντικείμενα, το πλάτος του φωτεινού κύματος αλλάζει και όταν το φως περνά μέσα από άχρωμα αντικείμενα, αλλάζει η φάση του φωτεινού κύματος, το οποίο χρησιμοποιείται για τη λήψη εικόνας υψηλής αντίθεσης σε μικροσκοπία αντίθεσης φάσης και παρεμβολής. - μικροσκόπιο σκοτεινού πεδίου (για τη μελέτη ζωντανών μη χρωματισμένων αντικειμένων). Χρησιμοποιείται ειδικός συμπυκνωτής που αναδεικνύει τις αντίθετες δομές του άβαφου υλικού. Η μικροσκοπία σκοτεινού πεδίου καθιστά δυνατή την παρατήρηση ζωντανών αντικειμένων. Το παρατηρούμενο αντικείμενο εμφανίζεται ως φωτισμένο σε ένα σκοτεινό πεδίο. Σε αυτή την περίπτωση, οι ακτίνες από το φωτιστικό πέφτουν στο αντικείμενο από το πλάι και μόνο διάσπαρτες ακτίνες εισέρχονται στους φακούς του μικροσκοπίου. 19
Ειδικές μέθοδοι μικροσκοπίας Φωτεινές mic-p (για τη μελέτη ζωντανών μη χρωματισμένων αντικειμένων) Η μικροσκοπία χρησιμοποιείται για την παρατήρηση φθοριζόντων (φωταύγειας) αντικειμένων. Σε ένα μικροσκόπιο φθορισμού, το φως από μια ισχυρή πηγή περνά μέσα από δύο φίλτρα. Ένα φίλτρο εμποδίζει το φως μπροστά από το δείγμα και επιτρέπει στο φως του μήκους κύματος που διεγείρει το δείγμα να φθορίζει. Το άλλο φίλτρο επιτρέπει στο φως του μήκους κύματος που εκπέμπεται από το φθορίζον αντικείμενο να περάσει μέσα. Έτσι, τα φθορίζοντα αντικείμενα απορροφούν φως ενός μήκους κύματος και εκπέμπουν φως σε μια άλλη περιοχή του φάσματος. -ικανότητα υπεριώδους m-pa) mic-p (αυξάνει την ανάλυση -πόλωση mic-p (για ερευνητικά αντικείμενα με τακτική διάταξη μορίων - σκελετός, μυς, ίνες κολλαγόνου κ.λπ.) μικροσκοπία - σχηματισμός εικόνας άχρωμων ανισότροπων δομών ( όπως ως ίνες κολλαγόνου και μυοϊνίδια).20
Ειδικές μέθοδοι μικροσκοπίας - μικροσκοπία παρεμβολής (για τον προσδιορισμό του ξηρού υπολείμματος στα κύτταρα, τον προσδιορισμό του πάχους των αντικειμένων) - η μικροσκοπία συνδυάζει τις αρχές της μικροσκοπίας αντίθεσης φάσης και πόλωσης και χρησιμοποιείται για τη λήψη εικόνας αντίθεσης μη χρωματισμένων αντικειμένων. Τα ειδικά οπτικά παρεμβολών (Nomarsky optics) έχουν βρει εφαρμογή σε μικροσκόπια με διαφορική αντίθεση παρεμβολών. Γ. Ηλεκτρονική μικροσκοπία: -μετάδοση (μελέτη αντικειμένων μέσω μετάδοσης) -σάρωση (μελέτη επιφάνειας αντικειμένων) Θεωρητικά, η ανάλυση ενός EM μετάδοσης είναι 0,002 nm. Η πραγματική ανάλυση των σύγχρονων μικροσκοπίων πλησιάζει τα 0,1 nm. Για βιολογικά αντικείμενα, η ανάλυση ΗΜ στην πράξη είναι 2 nm. 21
Ειδικές τεχνικές μικροσκοπίας Ένα ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης αποτελείται από μια στήλη μέσω της οποίας τα ηλεκτρόνια που εκπέμπονται από ένα νήμα καθόδου περνούν στο κενό. Μια δέσμη ηλεκτρονίων εστιασμένη από μαγνήτες δακτυλίου περνά μέσα από το προετοιμασμένο δείγμα. Ο χαρακτήρας της σκέδασης ηλεκτρονίων εξαρτάται από την πυκνότητα του δείγματος. Τα ηλεκτρόνια που διέρχονται από το δείγμα εστιάζονται, παρατηρούνται σε φθορίζουσα οθόνη και καταγράφονται με τη χρήση φωτογραφικής πλάκας. Χρησιμοποιείται ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης για τη λήψη τρισδιάστατης εικόνας της επιφάνειας του υπό μελέτη αντικειμένου. Η μέθοδος θρυμματισμού (κατάψυξη-διάσπαση) χρησιμοποιείται για τη μελέτη της εσωτερικής δομής των κυτταρικών μεμβρανών. Τα κύτταρα καταψύχονται σε θερμοκρασία υγρού αζώτου παρουσία κρυοπροστατευτικού και χρησιμοποιούνται για την κατασκευή τσιπς. Τα επίπεδα διάσπασης διέρχονται από το υδρόφοβο μέσο της λιπιδικής διπλοστιβάδας. Η εκτεθειμένη εσωτερική επιφάνεια των μεμβρανών είναι σκιασμένη με πλατίνα, τα αντίγραφα που προκύπτουν μελετώνται σε ένα EM σάρωσης. 22
Ειδικές (μη μικροσκοπικές) μέθοδοι: 1. Κυτταροχημεία ή ιστοχημεία - η ουσία είναι η χρήση αυστηρά ειδικών χημικών αντιδράσεων με ένα ελαφρύ τελικό προϊόν σε κύτταρα και ιστούς για τον προσδιορισμό της ποσότητας διαφόρων ουσιών (πρωτεΐνες, ένζυμα, λίπη, υδατάνθρακες, και τα λοιπά.). Μπορεί να εφαρμοστεί σε επίπεδο φωτός ή ηλεκτρονικού μικροσκοπίου. 2. Κυτοφωτομετρία - η μέθοδος χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με το 1 και καθιστά δυνατό τον ποσοτικό προσδιορισμό πρωτεϊνών, ενζύμων κ.λπ. που προσδιορίζονται με την κυτταροϊστοχημική μέθοδο 3. Αυτοραδιογραφία - ουσίες που περιέχουν ραδιενεργά ισότοπα χημικών στοιχείων εισάγονται στο σώμα. Αυτές οι ουσίες περιλαμβάνονται στις μεταβολικές διεργασίες στα κύτταρα. Ο εντοπισμός, η περαιτέρω κίνηση αυτών των ουσιών στα όργανα προσδιορίζονται σε ιστολογικά παρασκευάσματα με ακτινοβολία, η οποία συλλαμβάνεται από ένα φωτογραφικό γαλάκτωμα που εφαρμόζεται στο παρασκεύασμα. 4. Ανάλυση περίθλασης ακτίνων Χ - σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την ποσότητα των χημικών στοιχείων στα κύτταρα, να μελετήσετε τη μοριακή δομή των βιολογικών μικροαντικειμένων. 24 5. Μορφομετρία - μέτρηση μεγέθους βιολ. δομές σε κυτταρικό και υποκυτταρικό επίπεδο.
Ειδικές (μη μικροσκοπικές) μέθοδοι 6. Μικροχειρουργική - διεξαγωγή πολύ λεπτών επεμβάσεων με μικροχειριστή κάτω από μικροσκόπιο (μεταμόσχευση πυρήνα, εισαγωγή διαφόρων ουσιών στα κύτταρα, μέτρηση βιοδυναμικών κ.λπ.) 6. Μέθοδος καλλιέργειας κυττάρων και ιστών - σε θρεπτικά μέσα ή σε θαλάμους διάχυσης, εμφυτευμένα σε διάφορους ιστούς του σώματος. 7. Υπερφυγοκέντρηση - κλασματοποίηση κυττάρων ή υποκυτταρικών δομών με φυγοκέντρηση σε διαλύματα διαφόρων πυκνοτήτων. 8. Πειραματική μέθοδος. 9. Μέθοδος μεταμόσχευσης ιστών και οργάνων. 25
Η στερέωση διατηρεί τη δομή των κυττάρων, των ιστών και των οργάνων, αποτρέπει τη βακτηριακή μόλυνση και την ενζυματική πέψη τους και σταθεροποιεί τα μακρομόρια μέσω της χημικής διασύνδεσής τους. 32
Στερεωτική υγρή φορμαλίνη, αλκοόλες, γλουταραλδεΰδη - Τα πιο κοινά σταθεροποιητικά. Κρυοκαθήλωση - Η καλύτερη διατήρηση των δομών εξασφαλίζεται με στιγμιαία κατάψυξη των δειγμάτων σε υγρό άζωτο (-196 ° C). Λυοφιλοποίηση - μικρά κομμάτια ιστού υποβάλλονται σε ταχεία κατάψυξη, η οποία σταματά τις μεταβολικές διεργασίες. Αφυδάτωση - η τυπική διαδικασία για την απομάκρυνση του νερού είναι η αφυδάτωση σε αλκοόλες αυξανόμενης ισχύος (από 70 έως 60%). Γέμισμα - κάνει το ύφασμα ανθεκτικό, αποτρέπει τη σύνθλιψη και το ζάρωμα κατά την κοπή, καθιστά δυνατή την απόκτηση κοψίματος τυπικού πάχους. Το πιο κοινό μέσο ενσωμάτωσης είναι η παραφίνη. Χρησιμοποιούνται επίσης Celloidin, πλαστικά μέσα και ρητίνες. 33
Η αφυδάτωση προετοιμάζει τον σταθερό ιστό για διείσδυση στα μέσα ενσωμάτωσης. Το νερό από ζωντανό ιστό, καθώς και νερό από μείγματα στερέωσης (τα περισσότερα σταθεροποιητικά είναι υδατικά διαλύματα) πρέπει να αφαιρεθούν πλήρως μετά τη στερέωση. Η τυπική διαδικασία για την απομάκρυνση του νερού είναι η αφυδάτωση σε αλκοόλες που αυξάνεται από 60° έως 100° περιεκτικότητας. 34
Το γέμισμα είναι μια απαραίτητη διαδικασία που προηγείται της προετοιμασίας των τμημάτων. Το γέμισμα κάνει το ύφασμα ανθεκτικό, αποτρέπει τη σύνθλιψή του και το ζάρωμα κατά την κοπή και καθιστά δυνατή τη λήψη λεπτών τμημάτων κανονικού πάχους. Το πιο κοινό μέσο ενσωμάτωσης είναι η παραφίνη. Χρησιμοποιούνται επίσης Celloidin, πλαστικά μέσα και ρητίνες. 35
Περιστροφικός μικροτόμος. 40 n Οι μπλοκ που περιέχουν ένα κομμάτι οργάνου στερεώνονται σε μια θήκη κινητών αντικειμένων. Όταν κατέβει, παραμένουν σειριακά τμήματα στο μαχαίρι, αφαιρούνται από το μαχαίρι και τοποθετούνται σε γυάλινη πλάκα για περαιτέρω επεξεργασία και μικροσκόπηση.
Μέθοδοι χρώσης με ιστοτομή: n Πυρηνική (βασική): n αιματοξυλίνη - κηλίδες n n n πυρήνες μπλε. αιματοξυλίνη σιδήρου; azur II (σε μωβ)? καρμίνη (με κόκκινο)? σαφρανίνη (με κόκκινο)? μπλε του μεθυλίου (προς μπλε); τολουιδίνη (σε μπλε) θειονίνη (με μπλε χρώμα). n Κυτοπλασμικό- (οξύ): n ηωσίνη - σε ροζ χρώμα. n ερυθροσίνη; n πορτοκαλί "G" ; n ξινό φούξιν - σε κόκκινο? n πικρινικό οξύ - κίτρινο. n Κονγκό - κόκκινο - έως κόκκινο 44
ΕΙΔΙΚΕΣ Μέθοδοι χρώσης ιστοτομών n Σουδάν III – πορτοκαλί χρώση λιπιδίων και λιπών. n ωσμικό οξύ - χρωματισμός λιπιδίων και λιπών σε μαύρο χρώμα. n orcein - καφέ χρωματισμός ελαστικών ινών. n νιτρικό ασήμι - εμποτισμός νευρικών στοιχείων σε σκούρο καφέ χρώμα. 45
Κυτταρικές δομές: n ΟΞΥΦΙΛΙΑ στην ικανότητα χρώσης ροζ με όξινες χρωστικές n Βασοφιλική την ικανότητα να χρωματίζεις μπλε με βασικές βαφές n Ουδετεροφιλία - n την ικανότητα να χρωματίζεις μωβ με όξινες και βασικές βαφές. 47
1
Το κύτταρο n είναι ένα στοιχειώδες ζωντανό σύστημα που αποτελείται από κυτταρόπλασμα, πυρήνα, μεμβράνη και αποτελεί τη βάση για την ανάπτυξη, τη δομή και τη ζωή των ζωικών και φυτικών οργανισμών.
Ο γλυκοκάλυκας είναι ένα σύμπλοκο επιμεμβράνης που αποτελείται από σακχαρίτες συνδεδεμένους με πρωτεΐνες και σακχαρίτες που συνδέονται με λιπίδια. Λειτουργίες n Λήψη (ορμόνες, κυτοκίνες, μεσολαβητές και αντιγόνα) n Διακυτταρικές αλληλεπιδράσεις (ευερεθιστότητα και αναγνώριση) n Βρεγματική πέψη (μικρολάχνες εντερικών οριακών κυττάρων)
Λειτουργίες του κυτταρολέμματος: - οριοθέτηση; - ενεργητική και παθητική μεταφορά ουσιών και προς τις δύο κατευθύνσεις. - λειτουργίες υποδοχέα. επαφή με γειτονικά κύτταρα.
Κύριος Ερευνητικά αντικείμενα είναι ιστολογικά σκευάσματα, και η κύρια μέθοδος έρευνας είναι η μικροσκοπία.
Το ιστολογικό παρασκεύασμα πρέπει να είναι επαρκώς διαφανές (λεπτό) και σκιαγραφικό. Είναι κατασκευασμένο τόσο από ζωντανές όσο και από νεκρές (σταθερές) κατασκευές. Το παρασκεύασμα μπορεί να είναι ένα εναιώρημα κυττάρων, ένα επίχρισμα, ένα αποτύπωμα, ένα φιλμ, ένα ολικό παρασκεύασμα και μια λεπτή τομή.
Η διαδικασία παρασκευής ιστολογικών παρασκευασμάτων για μικροσκοπικές μελέτες περιλαμβάνει τα ακόλουθα κύρια βήματα: 1) λήψη του υλικού και στερέωσή του. 2) συμπίεση υλικού. 3) προετοιμασία τμημάτων. 4) χρώση ή αντίθεση τμημάτων. 5) συμπέρασμα ενοτήτων.
Για τη χρώση χρησιμοποιούνται ειδικές ιστολογικές βαφές με διαφορετικές τιμές pH: όξινο, ουδέτερο και βασικό. Οι δομές που χρωματίζονται από αυτά ονομάζονται οξυφιλικές, ουδετερόφιλες (ετερόφιλες) και βασεόφιλες, αντίστοιχα.
Ποιες μεθόδους χρησιμοποιεί η ιστολογική επιστήμη; Είναι πολλά και ποικίλα:
Μικροσκοπία.
Μικροσκόπιο φωτός. Τα σύγχρονα μικροσκόπια έχουν υψηλή ανάλυση. Η ανάλυση ορίζεται ως η μικρότερη απόσταση (d) μεταξύ δύο γειτονικών σημείων που μπορούν να φανούν χωριστά. Η απόσταση αυτή εξαρτάται από το μήκος κύματος του φωτός (λ) και εκφράζεται με τον τύπο: d = 1/2 λ.
Το ελάχιστο μήκος κύματος του ορατού τμήματος του φάσματος είναι 0,4 μm. Επομένως, η ισχύς ανάλυσης του μικροσκοπίου φωτός είναι 0,2 μm και η συνολική μεγέθυνση φτάνει τις 2500 φορές.
υπεριώδες μικροσκόπιο . Το μήκος κύματος του υπεριώδους φωτός είναι 0,2 μm, επομένως, η ανάλυση του υπεριώδους μικροσκοπίου είναι 0,1 μm, αλλά επειδή η υπεριώδης ακτινοβολία είναι αόρατη, χρειάζεται μια φωταυγή οθόνη για την παρατήρηση του υπό μελέτη αντικείμενο.
Μικροσκόπιο φθορισμού (φωταύγειας). Η ακτινοβολία βραχέων κυμάτων (αόρατη), που απορροφάται από μια σειρά από ουσίες, διεγείρει τα ηλεκτρόνια τους, τα οποία εκπέμπουν φως με μεγαλύτερο μήκος κύματος, καθιστώντας το ορατό μέρος του φάσματος. Έτσι, επιτυγχάνεται αύξηση της ανάλυσης του μικροσκοπίου.
Μικροσκοπία αντίθεσης φάσης σας επιτρέπει να εκπέμπετε άχρωμα αντικείμενα.
Πολωτικό μικροσκόπιο χρησιμοποιείται για τη μελέτη της αρχιτεκτονικής των ιστολογικών δομών, όπως οι ίνες κολλαγόνου.
ηλεκτρονική μικροσκοπία καθιστά δυνατή τη μελέτη αντικειμένων που μεγεθύνονται δεκάδες χιλιάδες φορές.
Μικροφωτογραφία και μικροφιλμογραφία . Αυτές οι μέθοδοι καθιστούν δυνατή τη μελέτη σταθερών αντικειμένων σε φωτογραφίες και ζωντανών μικροσκοπικών αντικειμένων σε κίνηση.
Μέθοδοι ποιοτικής και ποσοτικής έρευνας.
Histo –και κυτταροχημεία , συμπεριλαμβανομένης της ποσοτικής, επιτρέπει την ποιοτική ανάλυση των υπό μελέτη αντικειμένων σε ιστικό, κυτταρικό και υποκυτταρικό επίπεδο.
Κυτοφασματοφωτομετρία Καθιστά δυνατή τη μελέτη της ποσοτικής περιεκτικότητας ορισμένων βιολογικών ουσιών σε κύτταρα και ιστούς με βάση την απορρόφηση φωτός συγκεκριμένου μήκους κύματος από τη χρωστική που σχετίζεται με αυτές.
Διαφορική φυγοκέντρηση σας επιτρέπει να διαχωρίσετε τα περιεχόμενα των κελιών που διαφέρουν μεταξύ τους ως προς τη μάζα τους.
Ακτινογραφία Βασίζεται στη συμπερίληψη μιας ραδιενεργής ετικέτας (για παράδειγμα, ραδιενεργό ιώδιο, Η3-θυμιδίνη, κ.λπ.) στη μεταβολική διαδικασία.
Μορφομετρία σας επιτρέπει να μετράτε τις περιοχές και τους όγκους των κυττάρων, τους πυρήνες και τα οργανίδια τους χρησιμοποιώντας προσοφθάλμιο - και μικρομέτρα αντικειμένων και ειδικά πλέγματα.
Εφαρμογή υπολογιστή για αυτόματη επεξεργασία ψηφιακού υλικού.
Μέθοδος ιστοκαλλιέργειαςείναι η διατήρηση της βιωσιμότητας και η διαίρεση των κυττάρων και των ιστών έξω από το σώμα. Για αυτό, χρησιμοποιούνται ειδικά δοχεία με θρεπτικό μέσο, στα οποία δημιουργούνται όλες οι απαραίτητες συνθήκες για τη ζωτική δραστηριότητα των κυττάρων. Χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο, είναι δυνατό να μελετηθεί η διαφοροποίηση και η λειτουργική ανάπτυξη των κυττάρων, τα πρότυπα του κακοήθους μετασχηματισμού τους και η ανάπτυξη μιας διαδικασίας όγκου, η διακυτταρική αλληλεπίδραση, η βλάβη σε κύτταρα και ιστούς από ιούς και μικροοργανισμούς, η επίδραση των φαρμάκων στο μεταβολισμό διεργασίες σε κύτταρα και ιστούς κ.λπ.
Ενδοβιτική (ζωτική) χρώση χρησιμοποιείται για τη μελέτη των φαινομένων της φαγοκυττάρωσης και της δραστηριότητας των μακροφάγων, της ικανότητας διήθησης των νεφρικών σωληναρίων κ.λπ.
Μέθοδος μεταμόσχευσης ιστού. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για τη μελέτη της συμπεριφοράς των κυττάρων και της μορφολειτουργικής τους κατάστασης όταν μεταμοσχεύονται σε άλλο οργανισμό. Για παράδειγμα, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για να κρατά ζώα εκτεθειμένα σε θανατηφόρες δόσεις ακτινοβολίας.
Μικροχειρισμός.Αυτή η μέθοδος έχει χρησιμοποιηθεί στη μοριακή βιολογία, τη γενετική μηχανική και επίσης στην κλωνοποίηση, όταν ένας πυρήνας αφαιρείται από ένα ωάριο με ένα απλοειδές σύνολο χρωμοσωμάτων χρησιμοποιώντας έναν μικροχειριστή και ένας πυρήνας σωματικών κυττάρων με ένα διπλοειδές σύνολο χρωμοσωμάτων μεταμοσχεύεται σε αυτό.
Υπάρχει πολλές ερευνητικές μεθόδους, μεταξύ των οποίων ξεχωρίζουν τα εξής: παρατήρηση ζωντανών εμβρύων με χρήση φιλμ και εγγραφή βίντεο (που χρησιμοποιείται κυρίως στο πείραμα). Για αυτό, χρησιμοποιείται μια ειδική μικροφωτογραφική συσκευή, η οποία συνδέεται με έναν θερμικό θάλαμο στον οποίο αναπτύσσεται το έμβρυο. Όταν μελετάτε την ανάπτυξη ενός εμβρύου κοτόπουλου, για παράδειγμα, φτιάχνετε ένα παράθυρο στο κέλυφος, το οποίο κλείνει με μια διαφανή πλάκα. Αυτή η μέθοδος κατέστησε δυνατή την ανίχνευση και τη βελτίωση της δυναμικής των αλλαγών στο σχήμα και το μέγεθος των εμβρύων κατά τη διαδικασία ανάπτυξης.
Μέθοδος Fixed Sliceέμβρυα χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φωτός και ηλεκτρονικής, ιστοραδιοαυτογραφία, ιστο- και ανοσοκυτταροχημεία. Αυτές οι μέθοδοι καθιστούν δυνατή την ανάλυση ιστικών και ενδοκυτταρικών αλλαγών στη δυναμική της ανάπτυξης τμημάτων του εμβρύου. Με τη βοήθεια ιστο- και ανοσοκυτταροχημικών μεθόδων, μελετώνται βιοχημικές διεργασίες που συμβαίνουν σε εμβρυϊκά κύτταρα - η σύνθεση DNA, RNA, πρωτεϊνών, πρωτεϊνών ειδικών υποδοχέων κ.λπ. Χρησιμοποιώντας αυτές τις μεθόδους, λήφθηκαν σημαντικές πληροφορίες για τη διαφοροποίηση κυττάρων και ιστών στην ανάπτυξη εμβρύων και εμβρύων.
Μέθοδος σήμανσης, που προτάθηκε το 1925 από τον W. Vogt (1888-1941), καθιστά δυνατή τη μελέτη των κινήσεων των κυττάρων σε ένα αναπτυσσόμενο έμβρυο. Για να γίνει αυτό, χρησιμοποιούνται δείκτες που είναι μη τοξικοί για τα έμβρυα (για παράδειγμα, ουδέτερο κόκκινο, σωματίδια άνθρακα), καθώς και αντισώματα σε ορισμένες πρωτεΐνες. Όταν χρησιμοποιούνται αντισώματα, χρησιμοποιείται η ικανότητά τους να συνδυάζονται με φθορίζουσα χρωστική και βλαστικές πρωτεΐνες. Με τη βοήθεια μικροσκοπίου φθορισμού, ανιχνεύεται η κατανομή της χρωστικής και μελετάται η δυναμική της πρωτεϊνοσύνθεσης στους αναπτυσσόμενους ιστούς του εμβρύου.
Μέθοδοι μικροχειρουργικήςαναπτύχθηκαν στις αρχές του 20ου αιώνα από εκπροσώπους της σχολής του G. Spemann (1869-1941). Περιλάμβαναν: αφαίρεση του κελύφους των αυγών ζώων, μεταμόσχευση τμημάτων ενός εμβρύου σε άλλο, κ.λπ. Αυτές οι μέθοδοι χρησιμοποιούνται επίσης για τη μελέτη των συνεπειών της καταστροφής (για παράδειγμα, χρησιμοποιώντας δέσμη λέιζερ) τμημάτων του εμβρύου ή του ατόμου του. κύτταρα. Η μεταμόσχευση ως ένα είδος μικροχειρουργικής χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό των οδών μετανάστευσης των κυττάρων και των πηγών ανάπτυξης των ιστών. Ταυτόχρονα, μια θέση του εμβρύου, για παράδειγμα, ένα ορτύκι, μεταμοσχεύεται στην ίδια θέση του εμβρύου κοτόπουλου στη θέση της απομακρυσμένης θέσης. Οι πυρήνες των κυττάρων ορτυκιού έχουν χαρακτηριστική δομή και επομένως διακρίνονται από τους πυρήνες των κυττάρων του εμβρύου κοτόπουλου.
επεξήγηση- εκτομή μικρής έκτασης του εμβρύου και καλλιέργειά του σε τεχνητό περιβάλλον. Χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο, είναι δυνατό να ληφθούν πληροφορίες σχετικά με τις πηγές ανάπτυξης ιστού από μια δεδομένη περιοχή του εμβρύου και να εντοπιστούν ιστογενετικά πρότυπα ανάπτυξης.
Πυρηνική μεταμόσχευση- μέθοδος για την κλωνοποίηση εμβρύων. Για παράδειγμα, η μεταμόσχευση πυρήνων από τα κύτταρα του εντερικού επιθηλίου του γυρίνου βατράχου με νύχια σε ένα αυγό βατράχου, ο πυρήνας του οποίου απενεργοποιήθηκε από μια υπεριώδη ακτίνα, οδήγησε στην εμφάνιση νέων ατόμων (πειράματα Gerdon). Αυτά τα πειράματα έθεσαν τα θεμέλια για την κλωνοποίηση ανώτερων σπονδυλωτών και συνέβαλαν στην εμφάνιση (το 1997) του διάσημου προβάτου Dolly. Παρόμοια εμβρυολογικά πειράματα έχουν δείξει πειστικά ότι οι πυρήνες των σωματικών κυττάρων περιέχουν ένα πλήρες σύνολο γενετικών πληροφοριών για την ανάπτυξη ενός νέου οργανισμού.
Το τελευταίο επίτευγμα πειραματική εμβρυολογίαήταν η ανάπτυξη της μεθόδου της εξωσωματικής γονιμοποίησης. Η μεταμόσχευση εμβρύων που έχουν συλληφθεί in vitro στη μήτρα είναι η βάση της θεραπείας της υπογονιμότητας. Το 1973, ο L. Shettles (ΗΠΑ) αφαίρεσε ένα προωορρηκτικό ωάριο από την ωοθήκη μιας υπογόνιμης γυναίκας και το γονιμοποίησε με τα σπερματοζωάρια του συζύγου της. Αυτή ήταν η αρχή της τεχνικής της μεταμόσχευσης ανθρώπινων εμβρύων για την αντιμετώπιση της υπογονιμότητας. Ωστόσο, μόνο το 1978 στο Ηνωμένο Βασίλειο, ως αποτέλεσμα μιας επιτυχημένης μεταμόσχευσης στη μήτρα μιας υπογόνιμης γυναίκας ανθρώπινου εμβρύου στο στάδιο των 8 βλαστομερών, μετά από 2,5 ημέρες καλλιέργειας, το πρώτο παιδί «δοκιμαστικό σωλήνα» στον κόσμο ζύγιζε Εμφανίστηκαν 2700 γρ.