Phương pháp nghiên cứu mô học được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc và chức năng của tế bào và mô của người, động vật và thực vật trong điều kiện bình thường, bệnh lý và thí nghiệm. Cơ sở của G. m. Và. là - một tập hợp các kỹ thuật phương pháp được sử dụng trong sản xuất các chế phẩm của tế bào và mô để kiểm tra bằng kính hiển vi của chúng. Việc nghiên cứu tế bào và mô bằng kính hiển vi có thể được thực hiện theo hai cách chính, tùy thuộc vào trạng thái của đối tượng nghiên cứu: nghiên cứu các tế bào và mô sống, nghiên cứu các tế bào và mô không sống vẫn giữ được cấu trúc của chúng do sự cố định đặc biệt. kỹ thuật. Việc nghiên cứu các vật thể sống - quan trọng (siêu sống) - giúp chúng ta có thể quan sát các quá trình sinh lý trong tế bào và mô, cấu trúc bên trong của chúng. Nó được thực hiện trên các tế bào lơ lửng tự do trong môi trường lỏng (tế bào máu, tế bào biểu mô của mảnh vụn, v.v.), cũng như trên tế bào và mô được nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng đặc biệt. Đối tượng quan sát trong quỹ đạo có thể là các màng mô mỏng, trong suốt (màng bơi). Trong các nghiên cứu thực nghiệm, phương pháp cửa sổ sinh học (cấy các khoang trong suốt) và nghiên cứu cấy ghép mô trong môi trường trong suốt tự nhiên, ví dụ, trong khoang trước mắt của động vật, được sử dụng. Tùy thuộc vào nhiệm vụ được thực hiện, các phương pháp hiển vi đặc biệt khác nhau được sử dụng trong các nghiên cứu quan trọng: trường tối, tương phản pha, huỳnh quang, phân cực, tia cực tím. Phương pháp mô học quan trọng chủ yếu được sử dụng cho nghiên cứu sinh học và y sinh học. Việc sử dụng rộng rãi chúng bị hạn chế bởi những khó khăn kỹ thuật lớn liên quan đến các đặc tính của các mô còn sống. Trong nghiên cứu y học, đặc biệt là trong thực hành của các phòng thí nghiệm giải phẫu bệnh học, các phương pháp nghiên cứu các đối tượng cố định được sử dụng. Mục đích của việc cố định là để bảo tồn cấu trúc bên trong của tế bào và mô bằng cách nhanh chóng cho chúng tiếp xúc với các tác nhân hóa học ngăn cản sự phát triển của những thay đổi sau khi chết. Việc lựa chọn phương pháp cố định phụ thuộc vào mục tiêu nghiên cứu và đặc tính của vật liệu cần cố định. Do đó, hỗn hợp cố định có chứa muối của kim loại nặng (ví dụ, chất thăng hoa) được sử dụng để xác định cấu trúc tế bào mỏng. Chất cố định tốt nhất cho mục đích tế bào học là osmi tetroxide, thường được sử dụng trong kính hiển vi điện tử. Một chất cố định phổ biến là formaldehyde, được sử dụng dưới dạng dung dịch formalin 10%. Để đồng nhất và hoàn chỉnh, các mảnh mô phải nhỏ, và thể tích của chất lỏng cố định phải lớn hơn nhiều lần so với thể tích của vật liệu cần cố định. Sau khi cố định, các mảnh thường được rửa trong nước hoặc cồn. Các thành phần mô rắn (ví dụ, cặn canxi) được loại bỏ bằng kỹ thuật vôi hóa. Cách nhanh nhất và dễ nhất để chuẩn bị một phần mô, thường được sử dụng trong chẩn đoán nhanh, là một mảnh và lấy các phần mô trên một microtome đông lạnh. Tuy nhiên, rất khó để có được các mặt cắt đủ mỏng, cũng như các mặt cắt từ các vật thể nhỏ và các mô đang phân hủy. Do đó, theo quy luật, các mảnh mô được đổ vào môi trường niêm phong - hoặc celloidin. Chất cố định được khử nước trong rượu có độ mạnh tăng dần, đi qua dung môi trung gian (xylen hoặc parafin, cồn-ete đối với celloidin) và được ngâm tẩm với parafin hoặc celloidin. trong parafin cho phép bạn có được các phần mỏng hơn (từ 5-8 đến 1-2 micrômet) hơn celloidin. Các phần để kiểm tra bằng kính hiển vi được chuẩn bị bằng cách sử dụng một phiến kính hoặc microtome quay. Phần siêu mỏng (độ dày từ 90-100 đến 5-15 nm) cần thiết cho các nghiên cứu bằng kính hiển vi điện tử được chuẩn bị trên một siêu mỏng. Ultratomes cũng được sử dụng trong kính hiển vi ánh sáng để thu được các mặt cắt bán mỏng. Các phần đã chuẩn bị được nhuộm để làm nổi bật rõ ràng cấu trúc của tế bào và mô cảm nhận thuốc nhuộm một cách khác nhau. Thuốc nhuộm chính - tạo màu cho bazơ và muối của chúng (, xanh toluidine, xanh lam, nâu bismarck) - nhuộm màu cái gọi là cấu trúc ưa bazơ (nhân tế bào, mô liên kết). Thuốc nhuộm có tính axit - axit tạo màu và muối của chúng (axit picric, erythrosin) - nhuộm các cấu trúc ưa axit, hoặc oxyphilic (tế bào chất, collagen, sợi đàn hồi). Sự nhuộm màu cần được phân biệt bằng cách ngâm tẩm - một phương pháp đặc biệt dựa trên các khu vực nhất định của tế bào và mô để khôi phục các kim loại nặng (ví dụ, bạc, vàng, osmium) khỏi muối của chúng và do đó có được màu sắc đậm. Quá trình chuẩn bị mô học được hoàn thành bằng cách đặt nó trong môi trường đảm bảo giữ được cấu trúc, màu sắc và độ trong suốt của vật thể. Ví dụ, thông thường nhất, nhựa hữu cơ được sử dụng cho những mục đích này.
1. Từ điển bách khoa y học nhỏ. - M.: Bách khoa toàn thư y học. 1991-96 2. Sơ cứu. - M.: Từ điển Bách khoa toàn thư của Nga. 1994 3. Từ điển bách khoa về thuật ngữ y học. - M.: Bách khoa toàn thư Liên Xô. - 1982-1984.
Xem "Phương pháp nghiên cứu mô học" trong các từ điển khác là gì:
Phương pháp tiếp cận phương pháp và phương pháp nghiên cứu trong giải phẫu người- Đôi khi người ta nghe nói rằng không còn gì trong giải phẫu để học tập, nghiên cứu, cho rằng tất cả các chủ đề đã hết, mọi thứ có thể nghiên cứu đã được nghiên cứu rồi, mọi vấn đề đã được giải quyết. Như thể mọi thứ liên quan đến cấu trúc của cơ thể con người, ... ... Bảng chú giải thuật ngữ và khái niệm về giải phẫu người
NGHIÊN CỨU LAO ĐỘNG- NGHIÊN CỨU LAO ĐỘNG. xem NGHIÊN CỨU LAO ĐỘNG. Điều kiện quan trọng nhất để có được kết quả nghiên cứu đáng tin cậy là lựa chọn đúng đối tượng phân tích, lựa chọn kịp thời đối tượng và xây dựng vấn đề nghiên cứu. Quy tắc lấy mẫu… Bệnh cá: Sổ tay
I Y học Y học là hệ thống tri thức và thực hành khoa học nhằm tăng cường và duy trì sức khỏe, kéo dài tuổi thọ cho con người, phòng và chữa bệnh cho con người. Để thực hiện những nhiệm vụ này, M. nghiên cứu cấu trúc và ... Bách khoa toàn thư y học
Các cách nghiên cứu các đối tượng khác nhau bằng kính hiển vi. Trong sinh học và y học, các phương pháp này có thể nghiên cứu cấu trúc của các vật thể cực nhỏ có kích thước nằm ngoài khả năng phân giải của mắt người. Cơ sở của M.m.i. tạo nên …… Bách khoa toàn thư y học
- (Tế bào cytus mô học + Học thuyết biểu tượng Hy Lạp) dựa trên nghiên cứu sử dụng kính hiển vi về các đặc điểm cấu trúc của tế bào, thành phần tế bào của các cơ quan mô, dịch cơ thể của người và động vật trong các quá trình bình thường và bệnh lý. C. và. ... ... Bách khoa toàn thư y học
I Mô học (tiếng Hy Lạp là mô học mô + biểu tượng giảng dạy) là một ngành khoa học y sinh nghiên cứu sự tiến hóa của các mô, sự phát triển của chúng trong cơ thể (histogenesis), cấu trúc, chức năng và sự tương tác ở động vật đa bào và con người. Đối tượng nghiên cứu chính của G. ... ... Bách khoa toàn thư y học
I Âm hộ (âm hộ; pudendum Femalenum) cơ quan sinh dục ngoài của phụ nữ (theo Danh mục giải phẫu quốc tế vùng sinh dục nữ). Giải phẩu học và sinh lý học. Âm hộ (Hình 1) nằm bên ngoài xương mu của khung chậu và gắn liền với chúng ... ... Bách khoa toàn thư y học
Nghiên cứu những thay đổi gây ra trong cơ thể bởi các quá trình bệnh tật khác nhau, bằng các phương pháp nghiên cứu vốn có của nó, nhằm xác định các quá trình bệnh tật này và ý nghĩa của chúng liên quan đến hình ảnh lâm sàng của bệnh tật và tử vong ... ... Từ điển bách khoa F.A. Brockhaus và I.A. Efron
Tôi sinh thiết (cuộc sống sinh học Hy Lạp + thị giác opsis, nhận thức trực quan) lấy mô, cơ quan hoặc huyền phù tế bào để kiểm tra bằng kính hiển vi cho mục đích chẩn đoán, cũng như để nghiên cứu động lực của quá trình bệnh lý và ảnh hưởng ... ... Bách khoa toàn thư y học
Khoa học nghiên cứu các mô của động vật. Mô là một nhóm các tế bào giống nhau về hình dạng, kích thước và chức năng cũng như các sản phẩm trao đổi chất của chúng. Ở tất cả các loài thực vật và động vật, ngoại trừ loài nguyên thủy nhất, cơ thể bao gồm các mô, ... Từ điển bách khoa Collier
- (từ tiếng Hy Lạp mô và tiếng Hy Lạp λόγος kiến thức, từ ngữ, khoa học) một nhánh của sinh học nghiên cứu cấu trúc của các mô của cơ thể sống. Điều này thường được thực hiện bằng cách tách mô thành các lớp mỏng và sử dụng microtome. Không giống như giải phẫu, ... ... Wikipedia
Sách
- Đa u tủy và bệnh tế bào huyết tương, Ramasami Kartik, Lonial Sagar. Cuốn sách trình bày các khía cạnh lâm sàng chính của bệnh đa u tủy và các bệnh tế bào huyết tương khác. Các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm, sinh bệnh học, chẩn đoán và điều trị được mô tả. Trong lần thứ hai…
Đối tượng nghiên cứu có thể là các tế bào, mô sống cố định (chết) hoặc sống.
Để nghiên cứu cấu trúc vi mô của nguyên liệu thô và sản phẩm chăn nuôi, theo quy luật, các tế bào và mô cố định được sử dụng. Các chế phẩm là tạm thời, dành cho một nghiên cứu duy nhất và vĩnh viễn, có thể được lưu trữ và kiểm tra nhiều lần. Ngoài ra, toàn bộ hoặc toàn bộ chế phẩm được sử dụng.
Thuốc tạm thời có thể được nấu chín tương đối nhanh chóng; đối với điều này, vật liệu đang nghiên cứu được cố định và các phần thu được trên một microtome đông lạnh; nếu không có nó, một phần mô hoặc cơ quan mỏng có thể được tạo ra bằng dao mổ hoặc lưỡi dao. Phần thu được được nhuộm màu, đặt trên một lam kính, sau đó nhỏ một giọt glycerin và phủ một tấm bìa. Để phát hiện tinh bột, người ta dùng dung dịch iot trong kali iotua: Hòa tan 0,5 g kali iotua trong một lượng nhỏ nước, 1 g iot kết tinh rồi thêm nước vào 100 cm 3. Nhỏ vài giọt thuốc thử lên miếng xúc xích, pho mát và các vật liệu khác nằm trên lam kính, tinh bột chuyển sang màu xanh tím.
Chế phẩm Toàn bộ hoặc Toàn bộđược kiểm tra mà không thu được một phần của mô hoặc cơ quan. Ví dụ, một màng mô dưới da hoặc một chế phẩm đã được nghiền nát của rễ cây sau khi cố định, rửa và nhuộm được bao bọc giữa một phiến kính và một tấm bìa. Để xác định các yếu tố cấu trúc riêng lẻ, các mảnh cố định và nhuộm màu của mô dưới da hoặc mô cơ trơn được nhổ bằng kim trên lam kính - các chế phẩm như vậy được gọi là nhổ. Trong một số trường hợp, ví dụ, khi kiểm tra phim võng mạc của nhãn cầu hoặc da của một con nòng nọc, sau khi cố định và rửa sạch, việc nhuộm màu sẽ không được thực hiện, vì các tế bào chứa tạp chất hữu cơ (sắc tố) có màu tự nhiên.
Phương pháp chuẩn bị một chế phẩm mô học. Phương pháp chính để nghiên cứu các tế bào và mô cố định là mô học, tức là nghiên cứu phần mô nhuộm được bao bọc trong một môi trường đặc biệt. Để thu được các mặt cắt, người ta sử dụng đổ vật liệu thử vào parafin hoặc celloidin để có thể thu được các mặt cắt mỏng (tương ứng là 5-7 micron hoặc 10-30 micron), để chuẩn bị nhanh các mặt cắt (40-60 micron), làm đông lạnh. kỹ thuật được sử dụng.
Các công đoạn chính trong quá trình chuẩn bị mẫu bệnh phẩm là: lấy mẫu, cố định, rửa, khử nước, nhúng vào parafin hoặc celloidin, nhuộm, đặt dưới một tấm bìa.
Chọn mẫuđược thực hiện có tính đến mục đích của nghiên cứu và cấu trúc của vật liệu. Kích thước mẫu trung bình không quá 2,5-3,0 cm, mẫu gan và lá lách được lấy bằng viên nang. Các mảnh của tâm nhĩ được cắt ra khỏi tim, vì các màng mỏng hơn trong tâm thất và trên một lần chuẩn bị, người ta có thể thấy mối quan hệ địa hình của tâm tim, cơ tim và nội tâm mạc. Từ thận, các hạch bạch huyết, tuyến thượng thận, các phần của cơ quan được cắt ra đi sâu vào bề mặt vuông góc với bề mặt để vỏ và tủy lộ ra trên chế phẩm. Nếu cần thiết phải chuẩn bị các chế phẩm của các cơ quan bị thay đổi, các mảnh của vật liệu thử nghiệm được cắt ra ở ranh giới với vùng bị ảnh hưởng để vùng chuyển tiếp của tổn thương được đưa vào mẫu. Các mẫu từ cơ xương nên được cắt sao cho các sợi cơ ở mặt cắt dọc và mặt cắt ngang. Trước tiên, các mẫu thịt băm, pho mát và các mẫu vụn khác được cho vào một miếng gạc và buộc lại bằng một sợi chỉ. Cần lưu ý rằng khi mở khoang ngực, phổi xẹp xuống do đàn hồi, mất độ thoáng khí đáng kể, do đó, người ta đưa một ống thủy tinh hoặc cao su vào khí quản của các cơ quan hô hấp được rút ra, qua đó không khí được đưa vào vừa phải. . Một ống nối bằng lụa được áp dụng cho khí quản bên dưới ống được đưa vào, và một tải được buộc để ngâm hoàn toàn. Để cố định ruột, một phần của cơ quan dự định để cố định được băng sơ bộ bằng các miếng ghép ở cả hai bên. Các mẫu được cung cấp với nhãn giấy dày ghi rõ số lượng và ngày lấy mẫu.
cố định, những thứ kia. bảo tồn các kiến trúc tự nhiên (suốt đời) được thực hiện nhằm chuyển các cấu trúc nguyên sinh chất sang trạng thái không thay đổi. Tác dụng của chất cố định được thể hiện ở chỗ là kết quả của các quá trình lý sinh, sự đông tụ không thể đảo ngược của protein xảy ra trong các mô và cơ quan. Mẫu mô lấy từ cơ quan được ngâm vào chất định hình càng sớm càng tốt; Tỷ lệ giữa thể tích của vật liệu và chất lỏng cố định ít nhất phải là 1: 9 (Hình 3).
Sự cố định dẫn đến một số đầm nén và giảm thể tích của mẫu. Thông thường, 10-12% formalin, rượu etylic, axeton được sử dụng để cố định. Để chuẩn bị nồng độ chỉ định của chất lỏng cố định, 40% formalin được pha loãng với nước máy. Rượu etylic (100% tuyệt đối hoặc 96%) được sử dụng trong trường hợp cần xác định các chất hòa tan trong chất cố định nước (ví dụ, glycogen) trong các phần. Trong axeton, vật liệu đang được nghiên cứu (ví dụ, não) chỉ cố định trong vài giờ. Khi cơ quan được nghiên cứu, chẳng hạn như mô xương, có chứa vôi, quá trình vôi hóa hoặc vôi hóa được thực hiện. Để làm điều này, một mảnh xương nhỏ được hạ xuống (tốt hơn là treo nó trên một sợi chỉ) trong dung dịch nước 5-8% của axit nitric, được thay 2-3 lần một ngày. Kết quả của quá trình vôi hóa được đánh giá bằng cách đâm một cây kim mỏng vào xương: nếu không có lực cản, quá trình vôi hóa đã hoàn thành. Sau một sự ủng hộ như vậy
đỏ bừng mặtđược thực hiện để loại bỏ một lượng dư thừa của chất cố định, ví dụ, sau khi cố định bằng formalin, tiến hành rửa bằng nước máy.
Mất nước tiến hành nén chặt nguyên liệu trong cồn etylic có nồng độ tăng dần: 50-70-100. Để điều chế cồn 50% và 70%, người ta pha loãng cồn 96% với nước cất. Để điều chế rượu 100%, cần phải nung đồng sunfat cho đến khi mất nước hoàn toàn rồi thêm rượu etylic 96% vào được bột trắng mất nước. Ở mỗi nồng độ cồn, nguyên liệu được giữ từ 1-24 giờ, tùy thuộc vào kích thước của các mảnh, cấu trúc của cơ quan; trong cồn 70%, vật liệu có thể được giữ trong vài ngày.
lấp đầyđược thực hiện trong môi trường sao cho mẫu thử trở nên rắn chắc, có thể thu được các mặt cắt mỏng. Để làm điều này, sử dụng parafin (ngâm tẩm trong 1-4 giờ), celloidin (ngâm tẩm trong ba tuần). Khi tiết lộ chất béo và để nghiên cứu các mô và cơ quan lỏng lẻo, đổ vào gelatin được sử dụng.
lát nhận trên xe trượt hoặc microtomes quay. Các phần mỏng nhất (5-7 micron) có thể được làm từ vật liệu nhúng trong parafin. Các phần dày 15-20 micron được chuẩn bị từ vật liệu chứa đầy celloidin. Để nghiên cứu cấu trúc vi mô của nguyên liệu thô và sản phẩm có nguồn gốc động vật, theo quy luật, kỹ thuật đông lạnh được sử dụng. Điều này làm tăng tốc độ chuẩn bị của quá trình chuẩn bị, vì các giai đoạn mất nước và đổ kéo dài được loại bỏ. Sau khi cố định và rửa, các mảnh của vật thể được đặt trên một giai đoạn ướt của một microtome đông lạnh và các phần này thu được có độ dày từ 40-60 μm. Các phần được chuyển bằng bàn chải vào nước, nơi chúng thẳng ra, thu được vẻ ngoài của các mảnh nhỏ màu xám nhạt nhất.
Nhuộm phầnđược thực hiện để tăng độ tương phản của các cấu trúc khác nhau trong các chế phẩm dùng để kiểm tra trong kính hiển vi ánh sáng. Trong quá trình nhuộm, các quá trình hóa lý phức tạp xảy ra, do đó khi lựa chọn phương pháp phải tính đến ái lực chọn lọc của cấu trúc tế bào đối với một số loại thuốc nhuộm có tính chất lý hóa khác nhau.
Có thuốc nhuộm bazơ (bazơ), có tính axit và đặc biệt. Các cấu trúc được nhuộm bằng thuốc nhuộm cơ bản được gọi là ưa bazơ, thuốc nhuộm axit - oxyphilic, ưa axit, bạch cầu ái toan.
Trong số các thuốc nhuộm cơ bản (bazơ), hematoxylin được sử dụng để nhuộm chất nhiễm sắc của nhân và các cấu trúc khác có chứa protein thành màu xanh lam hoặc tím; carmine, tạo màu cho lõi bằng màu đỏ nhạt, safranin - sơn đỏ sẫm, thionin - sơn xanh.
Trong số các thuốc nhuộm có tính axit, eosin được sử dụng (nhuộm màu hồng tế bào chất), axit picric (màu vàng), fuchsin (màu gạch), carmine màu chàm (màu xanh lam).
Khi nghiên cứu cấu trúc vi mô của nguyên liệu và sản phẩm chăn nuôi, phương pháp nhuộm kết hợp với hematoxylin và eosin thường được sử dụng nhiều nhất. Để làm điều này, các phần từ nước được chuyển trong 1-3 phút sang dung dịch hematoxylin; Rửa trong nước 20-30 phút, đặt trong dung dịch eosin 3-5 phút và rửa bằng nước 3-5 phút. Phần nước còn lại được loại bỏ bằng giấy lọc, nhỏ một giọt ethanol 96% trong 1-2 phút, và khử nước trong dung dịch axit carbolic 25% trong xylen hoặc toluen. Sau đó, nhỏ 1-2 giọt dầu dưỡng lên vết cắt và dùng kẹp che lại.
Trong số các loại thuốc nhuộm tạo màu có lẫn chất béo, Sudan 111 thường được sử dụng. Để chuẩn bị dung dịch thuốc nhuộm trong 95 cm 3 cồn etylic 85%, người ta thêm 5 cm 3 axeton và đổ bột Sudan III cho đến khi thu được dung dịch bão hòa ( thuốc nhuộm phải được chứa quá mức). Đun nóng hỗn hợp đến 50% C và lọc. Các phần thu được trên microtome đông lạnh được đặt trong etanol 50% trong 1-2 phút, và sau đó trong Sudan III trong 25 phút. Các phần được tráng trong cồn 50%, rửa bằng nước cất và nhúng vào glycerol-gelatin.
Các giọt chất béo trung tính chuyển sang màu da cam do sự hòa tan của Sudan III trong chất béo. Các tạp chất béo cũng có thể được phát hiện bằng axit osmic, trong khi các cấu trúc chất béo có màu đen.
Kết luận dưới bìađược thực hiện trong môi trường không cho không khí đi qua và có khả năng giữ vết cắt được lâu. Các phần nhuộm màu được khử nước trong rượu có độ mạnh tăng dần và được đặt dưới một tấm che bằng linh sam, balsam Canada hoặc glycerol-gelatin (chế phẩm không được tiếp xúc với rượu và xylen).
Chuẩn bị mẫu vật cho kính hiển vi điện tử.Để nghiên cứu các đối tượng sinh học, người ta sử dụng hai loại kính hiển vi điện tử: truyền qua (truyền) và quét (raster).
Nguyên tắc xử lý một đối tượng để kiểm tra trong kính hiển vi điện tử truyền qua dựa trên các nguyên tắc tương tự như đối với kính hiển vi quang học: lấy mẫu, cố định, rửa, khử nước, đổ, chuẩn bị các mặt cắt siêu mỏng, cản quang.
Chọn mẫuđược thực hiện có tính đến mục đích của nghiên cứu và cấu trúc của vật liệu, tuân thủ các quy tắc tương tự như đối với kính hiển vi ánh sáng. Thể tích các mảnh của vật liệu được nghiên cứu không được vượt quá 1 mm 3. Mục đích chính của việc cố định là giữ cho mô càng gần với sự sống càng tốt.
Sự cố định Nó được thực hiện để bảo quản tốt hơn các cấu trúc, do đó, cần phải sử dụng các thuốc thử có độ pH nhất định và độ đẳng trương, các giá trị của chúng được xác định bởi loại mô được cố định. Quá trình cố định được thực hiện trong hai giai đoạn: tiền tố và hậu tố. Đối với tiền tố, dung dịch glutaraldehyde 2,5-3% (pH 7,2-7,4) được sử dụng, thời gian cố định là 2-4 giờ. 2 giờ Để bảo tồn cấu trúc trong ổ bụng, nên sử dụng chất cố định ở nhiệt độ thấp (0-4 ° C) và chuẩn bị chất cố định trên dung dịch đệm phosphat, cacodylate, veronal-acetate.
đỏ bừng mặtđược thực hiện với cồn lạnh 30% 5-7 lần, đối tượng được giữ trong mỗi phần cồn trong 30 phút, tức là. được rửa từ trạng thái cố định đến trạng thái như vậy khi hoạt động oxy hóa của chất định hình chấm dứt.
Mất nước tiến hành với rượu etylic theo độ tăng dần: 30, 50, 70, 96, 100% trong 30 phút. Đối với một số phương pháp rót, nên bổ sung axeton và propylen oxit để khử nước.
lấp đầyđược thực hiện trong nhựa epoxy (araldite, epon, v.v.). Quá trình trùng hợp nhựa trong viên nang được thực hiện trong máy điều nhiệt ở 60 ° C cho đến khi cứng lại, như một quy luật, trong vòng 1-2 ngày.
Phần siêu mỏngđược thu được bằng cách sử dụng dao thủy tinh trên một máy siêu nhỏ; đối với điều này, các khối epoxy được mài theo hình dạng của một kim tự tháp tứ diện cắt cụt. Các phần màu xám nối tiếp được đặt trong bể với 10% etanol. Các phần kết quả được gắn trên lưới đồng hoặc lưới palađi, trên bề mặt có phủ sơ bộ một màng formvar. Để tiết lộ các cấu trúc cần thiết, các phần trên mắt lưới được xử lý bằng dung dịch chì citrat và uranyl axetat.
Vì quét kính hiển vi điện tử mẫu thử được cố định, khử nước, tùy theo mục đích nghiên cứu mà sử dụng các chất cố định trên. Sau khi khử nước, mẫu được dán vào một vật giữ, đặt trong một bộ phận phún xạ và được phủ một lớp vàng hoặc bạch kim rất mỏng. Không giống như kính hiển vi điện tử truyền qua, kính hiển vi điện tử quét có thể sử dụng các chế phẩm ăn mòn: đối tượng nghiên cứu được đổ một số chất làm cứng, sau đó phôi và bề mặt được kiểm tra. Họ cũng nghiên cứu các bản sao thu được bằng cách đông lạnh - làm lạnh. Trong trường hợp này, một ấn tượng về sự phân cắt bề mặt của vật thể được kiểm tra. Để tăng độ tương phản, các bản sao phải được làm bóng bằng cách phun các hạt kim loại (vàng, bạch kim) hoặc than.
câu hỏi kiểm tra
- 1. Những phương pháp nào được sử dụng trong nghiên cứu cấu trúc tế bào, mô và cơ quan?
- 2. Những quy tắc cơ bản cần tuân theo khi lấy mẫu để làm chế phẩm mô học?
- 3. Nêu đặc điểm của quá trình bào chế các chế phẩm từ mô xương?
- 4. Vật liệu thử nghiệm được cố định như thế nào?
- 5. Những gì được sử dụng để khử nước của các chế phẩm?
- 6. Phương tiện nào được sử dụng để đổ vật liệu thử nghiệm?
- 7. Thuốc nhuộm nào dùng để phát hiện mô mỡ?
- 8. Phương pháp phân đoạn thường được sử dụng nhất và tại sao?
- 9. Kể tên các công đoạn chính của việc chuẩn bị tiêu bản cho kính hiển vi điện tử truyền và quét.
Mô học - ("gistos" trong tiếng Hy Lạp - mô, logis - dạy học) Đây là khoa học về cấu trúc, sự phát triển và hoạt động quan trọng của các mô của sinh vật đa bào và con người. Các đối tượng là đối tượng của khoa học này không thể tiếp cận được bằng mắt thường. Do đó, lịch sử mô học gắn liền với lịch sử tạo ra các công cụ cho phép chúng ta nghiên cứu những vật thể nhỏ nhất bằng mắt thường. 2
Quá trình mô học được quy ước chia thành các phần sau: n 1. Tế bào học là khoa học về tế bào. n 2. Phôi học là khoa học về sự phát triển, từ khi sơ khai đến khi hình thành hoàn chỉnh một sinh vật. n 3. Mô học đại cương - khoa học về các mô hình chung vốn có trong các mô. n 4. Mô học tư nhân - nghiên cứu cấu trúc, sự phát triển của các cơ quan và hệ thống.
CYTOLOGY - (tiếng Hy Lạp κύτος "tế bào" và λόγος - "nghiên cứu", "khoa học") n Một nhánh sinh học nghiên cứu các tế bào sống, các bào quan của chúng, cấu trúc, chức năng của chúng, các quá trình sinh sản, lão hóa và chết của tế bào. bốn
EMBRYOLOGY n (từ khác -Greek ἔμβρυον - phôi thai, phôi thai + -λογία từ λόγος - dạy học) là một ngành khoa học nghiên cứu sự phát triển của phôi thai. 5
Lịch sử ra đời học thuyết tế bào 1590. Jansen đã phát minh ra kính hiển vi, trong đó độ phóng đại được cung cấp bởi sự kết nối của hai thấu kính. 1665. Robert Hooke lần đầu tiên sử dụng thuật ngữ ô. 1650-1700 năm. Anthony van Leeuwenhoek lần đầu tiên mô tả vi khuẩn và các vi sinh vật khác. 1700 -1800 năm. Nhiều mô tả và hình vẽ mới về các mô khác nhau, chủ yếu là rau, đã được xuất bản. Năm 1827, Karl Baer phát hiện ra trứng ở động vật có vú. 1831 -1833 năm. Robert Brown đã mô tả nhân trong tế bào thực vật. 1838 -1839 năm. Nhà thực vật học Matthias Schleiden và nhà động vật học Theodor Schwann đã kết hợp ý tưởng của các nhà khoa học khác nhau và xây dựng lý thuyết tế bào, trong đó công nhận rằng đơn vị cơ bản của cấu trúc và chức năng trong cơ thể sống là tế bào. 1855 Rudolf Virchow đã chỉ ra rằng tất cả các tế bào được hình thành là kết quả của quá trình phân chia tế bào.
Lịch sử hình thành học thuyết tế bào 1665. Kiểm tra một phần nút chai dưới kính hiển vi, một nhà khoa học người Anh, nhà vật lý Robert Hooke đã phát hiện ra rằng nó bao gồm các tế bào được ngăn cách bởi các vách ngăn. Những tế bào này được ông gọi là "tế bào"
Lịch sử hình thành thuyết tế bào Vào thế kỷ 17, Leeuwenhoek đã thiết kế một chiếc kính hiển vi và mở ra cánh cửa về thế giới thu nhỏ cho con người. Các nhà nghiên cứu ngạc nhiên trước mắt các nhà nghiên cứu. Hóa ra chúng ở khắp mọi nơi - những sinh vật nhỏ nhất này: trong nước, phân, không khí và bụi, trong đất và các rãnh nước, trong chất thải thối rữa có nguồn gốc động thực vật.
Lịch sử ra đời học thuyết tế bào 1831-1833. Robert Brown đã mô tả nhân trong tế bào thực vật. Năm 1838, nhà thực vật học người Đức M. Schleiden đã chú ý đến hạt nhân và coi nó là nguồn gốc của tế bào. Theo Schleiden, một nucleolus ngưng tụ từ một chất dạng hạt, xung quanh đó một hạt nhân được hình thành, và xung quanh hạt nhân - một tế bào, và hạt nhân có thể biến mất trong quá trình hình thành tế bào.
Lịch sử hình thành thuyết tế bào Nhà động vật học người Đức T. Schwann đã chỉ ra rằng các mô động vật cũng bao gồm các tế bào. Ông đã tạo ra một lý thuyết nói rằng các tế bào chứa nhân đại diện cho cơ sở cấu trúc và chức năng của tất cả các sinh vật sống. Lý thuyết về cấu trúc tế bào được T. Schwann xây dựng và công bố năm 1839. Bản chất của nó có thể được thể hiện qua các quy định sau: 1. Tế bào là đơn vị cấu trúc cơ bản trong cấu trúc của mọi sinh vật; 2. Tế bào thực vật và động vật độc lập, tương đồng với nhau về nguồn gốc và cấu tạo. Mỗi tế bào hoạt động độc lập với các tế bào khác, nhưng cùng với tất cả. 3. Tất cả các tế bào đều phát sinh từ chất gian bào không cấu trúc. (Sai lầm!) 4. Hoạt động sống của tế bào do vỏ quyết định. (Lỗi!)
Lịch sử hình thành học thuyết tế bào Năm 1855, thầy thuốc người Đức R. Virchow đã đưa ra một khái quát: tế bào chỉ có thể phát sinh từ tế bào trước đó. Điều này dẫn đến nhận thức rằng sự sinh trưởng và phát triển của sinh vật gắn liền với sự phân chia tế bào và sự phân hóa sâu hơn của chúng, dẫn đến sự hình thành các mô và cơ quan.
Lịch sử hình thành học thuyết tế bào của Karl Baer Trở lại năm 1827, Karl Baer phát hiện ra trứng ở động vật có vú, chứng minh rằng sự phát triển của động vật có vú bắt đầu bằng trứng được thụ tinh. Điều này có nghĩa là sự phát triển của bất kỳ sinh vật nào đều bắt đầu từ một quả trứng được thụ tinh, tế bào là đơn vị phát triển.
Lịch sử hình thành học thuyết tế bào 1865 Các quy luật di truyền được công bố (G. Mendel). 1868 Axit nucleic được phát hiện (F. Miescher) 1873 Nhiễm sắc thể được phát hiện (F. Schneider) 1874 Nguyên phân được phát hiện ở tế bào thực vật (I. D. Chistyakov) 1878 Sự phân chia nguyên phân của tế bào động vật được phát hiện (W. Fleming, P. I. Peremezhko) 1879 Fleming - hành vi của nhiễm sắc thể trong quá trình phân chia. 1882 Meiosis được phát hiện ở tế bào động vật (W. Fleming) 1883 Người ta chỉ ra rằng số lượng nhiễm sắc thể trong tế bào mầm ít hơn hai lần so với tế bào xôma (E. Van Beneden) 1887 Meiosis được phát hiện ở tế bào thực vật (E. Strasburger) 1898 Golgi phát hiện ra bộ máy lưới của tế bào, bộ máy Golgi. 1914 Lý thuyết di truyền nhiễm sắc thể được hình thành (T. Morgan). 1924 Lý thuyết khoa học-tự nhiên về nguồn gốc của sự sống trên Trái đất được công bố (A. I. Oparin). 1953 Ý tưởng về cấu trúc của DNA được hình thành và mô hình của nó được tạo ra (D. Watson và F. Crick). 1961 Bản chất và đặc tính của mã di truyền được xác định (F. Crick, L. Barnet, S. Benner).
Những quy định chính của thuyết tế bào hiện đại 1. Tế bào là một hệ thống sống cơ bản, một đơn vị cấu tạo, hoạt động sống, sinh sản và phát triển cá thể của sinh vật. 2. Tế bào của mọi sinh vật đều tương đồng, đồng nhất về cấu tạo và nguồn gốc. 3. Sự hình thành tế bào. Các tế bào mới chỉ phát sinh bằng cách phân chia các tế bào đã có từ trước. 4. Tế bào và sinh vật. Một tế bào có thể là một sinh vật độc lập (sinh vật nhân sơ và sinh vật nhân thực đơn bào). Tất cả các sinh vật đa bào đều được tạo thành từ các tế bào. 5. Chức năng của ô. Trong tế bào diễn ra quá trình trao đổi chất, kích thích và dễ bị kích thích, vận động, sinh sản và biệt hóa. 6. Tiến hóa tế bào. Tổ chức tế bào hình thành vào buổi bình minh của sự sống và trải qua một chặng đường dài phát triển tiến hóa từ dạng không có nhân (sinh vật nhân sơ) sang dạng có nhân (sinh vật nhân chuẩn).
CÁC PHƯƠNG PHÁP KÍNH HIỂN VI CÁC CỤ THỂ LỊCH SỬ 1. Kính hiển vi ánh sáng. 2. Kính hiển vi tử ngoại. 3. Kính hiển vi huỳnh quang (phát quang). 4. Kính hiển vi cản quang pha. 5. Kính hiển vi trường tối. 6. Kính hiển vi giao thoa 7. Kính hiển vi phân cực. 8. Kính hiển vi điện tử. 17
Kính hiển vi n Dụng cụ quang học này cho phép bạn quan sát các vật thể nhỏ. Hệ thống vật kính và thị kính đạt được độ phóng đại ảnh. Gương, tụ điện và màng chắn hướng dòng ánh sáng và điều chỉnh độ chiếu sáng của vật thể. Phần cơ học của kính hiển vi bao gồm: giá ba chân, bàn vật, vít macro và micromet, giá đỡ ống. mười tám
Các phương pháp đặc biệt của kính hiển vi: - kính hiển vi tương phản pha - (để nghiên cứu các vật thể sống không nhuộm màu) - kính hiển vi cho phép bạn nghiên cứu các vật thể sống và không nhuộm màu. Khi ánh sáng truyền qua các vật có màu, biên độ của sóng ánh sáng thay đổi, và khi ánh sáng truyền qua các vật không có màu, pha của sóng ánh sáng thay đổi, được sử dụng để thu được hình ảnh có độ tương phản cao trong kính hiển vi tương phản pha và giao thoa. - kính hiển vi trường tối (để nghiên cứu các vật thể sống không được nhuộm màu). Một bình ngưng đặc biệt được sử dụng để làm nổi bật các cấu trúc tương phản của vật liệu không sơn. Kính hiển vi trường tối giúp bạn có thể quan sát các vật thể sống. Đối tượng quan sát xuất hiện như được chiếu sáng trong một trường tối. Trong trường hợp này, các tia từ đèn chiếu sáng chiếu vào vật thể từ bên cạnh, và chỉ các tia phân tán đi vào thấu kính của kính hiển vi. 19
Các phương pháp đặc biệt của kính hiển vi Mic-p phát quang (để nghiên cứu các vật thể sống không bị nhuộm màu) Kính hiển vi được sử dụng để quan sát các vật thể huỳnh quang (phát quang). Trong kính hiển vi huỳnh quang, ánh sáng từ một nguồn mạnh đi qua hai bộ lọc. Một bộ lọc chặn ánh sáng phía trước mẫu và cho phép ánh sáng có bước sóng kích thích mẫu phát huỳnh quang. Bộ lọc còn lại cho phép ánh sáng có bước sóng do vật huỳnh quang phát ra đi qua. Do đó, các vật thể huỳnh quang hấp thụ ánh sáng có bước sóng và phát ra ánh sáng ở vùng khác của quang phổ. -Khả năng tia cực tím m-pa) mic-p (làm tăng độ phân giải-phân cực mic-p (đối với các đối tượng nghiên cứu có sự sắp xếp có trật tự của các phân tử - khung xương, cơ, sợi collagen, v.v.) như sợi collagen và myofibrils) .20
Các phương pháp đặc biệt của kính hiển vi - kính hiển vi giao thoa (để xác định cặn khô trong tế bào, xác định độ dày của vật thể) - kính hiển vi kết hợp các nguyên tắc của kính hiển vi tương phản pha và phân cực và được sử dụng để thu được hình ảnh tương phản của các vật thể không bị nhuộm màu. Quang học giao thoa đặc biệt (quang học Nomarsky) đã được ứng dụng trong kính hiển vi có độ tương phản giao thoa vi sai. C. Kính hiển vi điện tử: -truyền (nghiên cứu các đối tượng qua đường truyền) -quét (nghiên cứu bề mặt của các đối tượng) Về mặt lý thuyết, độ phân giải của EM truyền qua là 0,002 nm. Độ phân giải thực của kính hiển vi hiện đại là 0,1 nm. Đối với các đối tượng sinh học, độ phân giải EM trong thực tế là 2 nm. 21
Các Kỹ Thuật Kính Hiển Vi Đặc Biệt Kính hiển vi điện tử truyền qua bao gồm một cột mà qua đó các điện tử phát ra từ dây tóc catốt đi qua trong chân không. Một chùm điện tử hội tụ bởi nam châm vòng đi qua mẫu đã chuẩn bị. Đặc tính của sự tán xạ điện tử phụ thuộc vào mật độ của mẫu. Các điện tử đi qua mẫu được hội tụ, được quan sát trên màn hình huỳnh quang và được ghi lại bằng một tấm ảnh. Kính hiển vi điện tử quét được sử dụng để thu được hình ảnh ba chiều của bề mặt vật thể đang nghiên cứu. Phương pháp sứt mẻ (đông lạnh-phân cắt) được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc bên trong của màng tế bào. Các tế bào được đông lạnh ở nhiệt độ nitơ lỏng với sự hiện diện của chất bảo vệ lạnh và được sử dụng để làm khoai tây chiên. Các mặt phẳng phân cắt đi qua phần giữa kỵ nước của lớp kép lipid. Bề mặt bên trong của màng được tô bóng bằng bạch kim, các bản sao thu được được nghiên cứu trong EM quét. 22
Các phương pháp đặc biệt (không hiển vi): 1. Hóa tế bào hoặc mô - bản chất là việc sử dụng các phản ứng hóa học cụ thể nghiêm ngặt với sản phẩm cuối cùng nhẹ trong tế bào và mô để xác định số lượng các chất khác nhau (protein, enzym, chất béo, carbohydrate, vân vân.). Có thể được áp dụng ở cấp độ của một ánh sáng hoặc kính hiển vi điện tử. 2. Cytophotometry - phương pháp được sử dụng kết hợp với 1 và có thể định lượng protein, enzym, ... được xác định bằng phương pháp cytohistochemical 3. Autoradiography - các chất có chứa đồng vị phóng xạ của các nguyên tố hóa học được đưa vào cơ thể. Những chất này có trong quá trình trao đổi chất trong tế bào. Vị trí, sự di chuyển tiếp theo của các chất này trong các cơ quan được xác định trên chế phẩm mô học bằng bức xạ, được chụp bởi một nhũ tương ảnh được áp dụng cho chế phẩm. 4. Phân tích nhiễu xạ tia X - cho phép bạn xác định lượng nguyên tố hóa học trong tế bào, nghiên cứu cấu trúc phân tử của các vi vật thể sinh học. 24 5. Morphometry - đo kích thước của biol. cấu trúc ở cấp độ tế bào và dưới tế bào.
Các phương pháp đặc biệt (không có kính hiển vi) 6. Vi phẫu - thực hiện các thao tác rất tinh vi với máy vi âm dưới kính hiển vi (cấy nhân, đưa các chất khác nhau vào tế bào, đo lường sinh học, v.v.) 6. Phương pháp nuôi cấy tế bào và mô - trong môi trường dinh dưỡng hoặc trong các khoang khuếch tán, được cấy vào các mô cơ thể khác nhau. 7. Siêu ly tâm - phân đoạn tế bào hoặc cấu trúc dưới tế bào bằng cách ly tâm trong các dung dịch có mật độ khác nhau. 8. Phương pháp thực nghiệm. 9. Phương pháp ghép mô, bộ phận cơ thể. 25
Sự cố định bảo tồn cấu trúc của tế bào, mô và cơ quan, ngăn ngừa sự ô nhiễm của vi khuẩn và quá trình tiêu hóa bằng enzym, đồng thời ổn định các đại phân tử thông qua liên kết chéo hóa học của chúng. 32
Cố định formalin lỏng, rượu, glutaraldehyde - Các chất cố định phổ biến nhất; Đông cứng - Việc bảo quản tốt nhất các cấu trúc được đảm bảo bằng cách làm đông tức thời các mẫu trong nitơ lỏng (-196 ° C); Quá trình đông khô - các mảnh mô nhỏ bị đóng băng nhanh chóng, làm ngừng quá trình trao đổi chất. Khử nước - quy trình tiêu chuẩn để loại bỏ nước là khử nước trong rượu có độ mạnh tăng dần (từ 70 đến 60%). Làm đầy - làm cho vải bền, ngăn không cho vải bị nát và nhăn trong quá trình cắt, giúp bạn có được những đường cắt có độ dày tiêu chuẩn. Môi trường nhúng phổ biến nhất là parafin. Celloidin, môi trường nhựa và nhựa cũng được sử dụng. 33
Sự khử nước chuẩn bị cho các mô cố định để thấm vào môi trường nhúng. Nước từ mô sống, cũng như nước từ các hỗn hợp cố định (hầu hết các chất cố định là dung dịch nước) phải được loại bỏ hoàn toàn sau khi cố định. Quy trình tiêu chuẩn để loại bỏ nước là khử nước trong rượu tăng cường độ từ 60 ° đến 100 °. 34
Làm đầy là một thủ tục cần thiết trước khi chuẩn bị các phần. Việc lấp đầy giúp vải bền, tránh bị dập và nhăn trong quá trình cắt, đồng thời có thể thu được các phần mỏng có độ dày tiêu chuẩn. Môi trường nhúng phổ biến nhất là parafin. Celloidin, môi trường nhựa và nhựa cũng được sử dụng. 35
Microtome quay. 40 n Các khối chứa một bộ phận của đàn được cố định trong một giá đỡ vật thể di chuyển được. Khi nó được hạ xuống, các phần nối tiếp vẫn còn trên dao, chúng được lấy ra khỏi dao và được gắn trên một lam kính để xử lý thêm và hiển vi.
Phương pháp nhuộm phân loại: n Hạt nhân (cơ bản): n hematoxylin - nhuộm n n n n nhân xanh lam; sắt hematoxylin; azur II (màu tím); carmine (màu đỏ); safranin (màu đỏ); metyl xanh (sang xanh lam); toluidine (màu xanh lam); thionine (màu xanh lam). n Tế bào chất- (axit): n eosin - màu hồng; n erythrosin; n cam "G"; n chua fuchsin - sang màu đỏ; n axit picric - màu vàng; n Congo - đỏ - đến đỏ 44
Phương pháp ĐẶC BIỆT để nhuộm mô bệnh n Sudan III - nhuộm màu cam của lipid và chất béo; n axit osmic - tạo màu cho chất béo và chất béo có màu đen; n orcein - màu nâu của sợi đàn hồi; n bạc nitrat - chất tẩm các nguyên tố thần kinh có màu nâu sẫm. 45
Cấu trúc tế bào: n OXYPHILIAn khả năng nhuộm màu hồng với thuốc nhuộm có tính axit n Basophilian khả năng nhuộm màu xanh lam với thuốc nhuộm bazơ n Bạch cầu trung tính - n khả năng nhuộm màu tím với thuốc nhuộm axit và bazơ. 47
1
Tế bào n là một hệ thống sống sơ cấp bao gồm tế bào chất, nhân, màng và là cơ sở cho sự phát triển, cấu tạo và sự sống của sinh vật động thực vật.
Glycocalyx là một phức hợp màng bao gồm saccharide liên kết với protein và saccharide liên kết với lipid. Chức năng n Tiếp nhận (kích thích tố, cytokine, chất trung gian và kháng nguyên) n Tương tác giữa các tế bào (khó chịu và nhận biết)
Chức năng của cytolemma: - phân định; - sự vận chuyển chủ động và thụ động của các chất theo cả hai hướng; - các chức năng của cơ quan thụ cảm; liên hệ với các ô lân cận.
Chính Đối tượng nghiên cứu là các chế phẩm mô học, và phương pháp nghiên cứu chính là kính hiển vi.
Chế phẩm mô học phải đủ trong suốt (mỏng) và có độ tương phản. Nó được làm từ cả cấu trúc sống và chết (cố định). Việc chuẩn bị có thể là hỗn dịch tế bào, vết bôi, dấu ấn, màng, tổng chế phẩm và một phần mỏng.
Quá trình tạo chế phẩm mô học cho các nghiên cứu hiển vi bao gồm các bước chính sau đây: 1) lấy vật liệu và cố định nó; 2) đầm nén vật liệu; 3) chuẩn bị các phần; 4) các phần nhuộm màu, hoặc tương phản; 5) kết luận của các phần.
Để nhuộm, thuốc nhuộm mô học đặc biệt được sử dụng với các giá trị pH khác nhau: axit, trung tính và bazơ. Các cấu trúc được nhuộm bởi chúng được gọi là oxyphilic, bạch cầu trung tính (heterophilic) và bazơ, tương ứng.
Khoa học mô học sử dụng những phương pháp nào? Chúng khá nhiều và đa dạng:
Kính hiển vi.
Kính hiển vi ánh sáng. Kính hiển vi hiện đại có độ phân giải cao. Độ phân giải được định nghĩa là khoảng cách nhỏ nhất (d) giữa hai điểm liền kề có thể được nhìn thấy riêng biệt. Khoảng cách này phụ thuộc vào bước sóng ánh sáng (λ) và được biểu thị bằng công thức: d = 1/2 λ.
Bước sóng nhỏ nhất của phần nhìn thấy được của quang phổ là 0,4 µm. Do đó, khả năng phân giải của kính hiển vi ánh sáng là 0,2 µm, và tổng độ phóng đại đạt 2500 lần.
kính hiển vi tia cực tím . Bước sóng của ánh sáng tử ngoại là 0,2 µm, do đó, độ phân giải của kính hiển vi tử ngoại là 0,1 µm, nhưng vì bức xạ tử ngoại không nhìn thấy được nên cần phải có màn phát quang để quan sát vật đang nghiên cứu.
Kính hiển vi huỳnh quang (phát quang). Bức xạ sóng ngắn (không nhìn thấy), bị một số chất hấp thụ, kích thích các điện tử của chúng, phát ra ánh sáng có bước sóng dài hơn, trở thành phần nhìn thấy được của quang phổ. Do đó, độ phân giải của kính hiển vi được tăng lên.
Kính hiển vi tương phản pha cho phép bạn phát ra các đối tượng không có màu.
Kính hiển vi phân cực được sử dụng để nghiên cứu kiến trúc của cấu trúc mô học, chẳng hạn như sợi collagen.
kính hiển vi điện tử làm cho nó có thể nghiên cứu các đối tượng phóng đại hàng chục nghìn lần.
Microphotography và microfilmography . Những phương pháp này giúp bạn có thể nghiên cứu các vật thể cố định trong ảnh và các vật thể hiển vi sống đang chuyển động.
Phương pháp nghiên cứu định tính và định lượng.
Lịch sử –và hóa tế bào , bao gồm cả định lượng, cho phép phân tích định tính các đối tượng đang nghiên cứu ở cấp độ mô, tế bào và dưới tế bào.
Đo quang tế bào Nó có thể nghiên cứu hàm lượng định lượng của một số chất sinh học trong tế bào và mô dựa trên sự hấp thụ ánh sáng có bước sóng nhất định bởi thuốc nhuộm liên kết với chúng.
Ly tâm vi sai cho phép bạn tách nội dung của các ô khác nhau về khối lượng của chúng.
Chụp X quang Nó dựa trên việc bao gồm một nhãn phóng xạ (ví dụ, iốt phóng xạ, H³-thymidine, v.v.) trong quá trình trao đổi chất.
Hình thái học cho phép bạn đo diện tích và thể tích của tế bào, nhân và bào quan của chúng bằng cách sử dụng thị kính - và đối tượng-micromet và các lưới đặc biệt.
Ứng dụng máy tính để xử lý tự động vật liệu kỹ thuật số.
Phương pháp nuôi cấy mô là sự duy trì khả năng tồn tại và phân chia của các tế bào và mô bên ngoài cơ thể. Đối với điều này, các thùng chứa đặc biệt với môi trường dinh dưỡng được sử dụng, trong đó tất cả các điều kiện cần thiết cho hoạt động sống của tế bào được tạo ra. Sử dụng phương pháp này, có thể nghiên cứu sự biệt hóa và phát triển chức năng của tế bào, các dạng biến đổi ác tính của chúng và sự phát triển của quá trình khối u, tương tác giữa các tế bào, tổn thương tế bào và mô do virus và vi sinh vật, ảnh hưởng của thuốc đối với quá trình trao đổi chất. các quá trình trong tế bào và mô, v.v.
Nhuộm trong cơ thể (quan trọng) dùng để nghiên cứu các hiện tượng thực bào và hoạt động của đại thực bào, khả năng lọc của ống thận, v.v.
Phương pháp cấy ghép mô. Phương pháp này được sử dụng để nghiên cứu hành vi của tế bào và trạng thái chức năng của chúng khi chúng được cấy ghép vào một sinh vật khác. Ví dụ, phương pháp này được sử dụng để giữ cho động vật tiếp xúc với liều lượng bức xạ gây chết người.
Điều chế vi mô. Phương pháp này đã được sử dụng trong sinh học phân tử, kỹ thuật di truyền và cả trong nhân bản, khi một nhân được lấy ra từ trứng có bộ nhiễm sắc thể đơn bội bằng bộ vi mô và nhân tế bào xôma có bộ nhiễm sắc thể lưỡng bội được cấy vào đó.
Tồn tại nhiều phương pháp nghiên cứu, trong đó nổi bật là: quan sát phôi sống bằng phim và ghi hình (được sử dụng chủ yếu trong thí nghiệm). Đối với điều này, một thiết bị vi chụp ảnh đặc biệt được sử dụng, được kết nối với một buồng nhiệt, trong đó phôi phát triển. Ví dụ, khi nghiên cứu sự phát triển của phôi gà, bạn tạo một cửa sổ trong vỏ, được đóng bằng một tấm trong suốt. Phương pháp này có thể theo dõi và tinh chỉnh động lực của những thay đổi về hình dạng và kích thước của phôi trong quá trình phát triển.
Phương pháp lát cố định phôi bằng cách sử dụng ánh sáng và kính hiển vi điện tử, chụp cắt lớp mô, mô-men và hóa tế bào miễn dịch. Những phương pháp này có thể phân tích những thay đổi trong mô và nội bào về động lực phát triển của các bộ phận của phôi. Với sự trợ giúp của các phương pháp hóa mô và tế bào miễn dịch, các quá trình sinh hóa xảy ra trong tế bào phôi được nghiên cứu - tổng hợp DNA, RNA, protein, protein thụ thể cụ thể, v.v. Sử dụng các phương pháp này, thông tin quan trọng đã thu được về sự khác biệt của tế bào và mô trong quá trình phát triển của phôi và thai.
Phương pháp đánh dấu, được đề xuất vào năm 1925 bởi W. Vogt (1888-1941), làm cho nó có thể nghiên cứu chuyển động của tế bào trong một phôi đang phát triển. Để làm được điều này, người ta sử dụng các chất đánh dấu không độc đối với phôi (ví dụ, màu đỏ trung tính, các hạt than), cũng như các kháng thể đối với một số protein nhất định, được sử dụng. Khi sử dụng kháng thể, khả năng kết hợp của chúng với thuốc nhuộm huỳnh quang và protein mầm được sử dụng. Với sự trợ giúp của kính hiển vi huỳnh quang, sự phân bố của thuốc nhuộm được theo dõi và nghiên cứu động lực tổng hợp protein trong các mô đang phát triển của phôi.
Phương pháp vi phẫuđược phát triển vào đầu thế kỷ 20 bởi các đại diện của trường phái G. Spemann (1869-1941). Chúng bao gồm: loại bỏ vỏ trứng động vật, cấy ghép các bộ phận của phôi này sang phôi khác, v.v. Các phương pháp này cũng được sử dụng để nghiên cứu hậu quả của việc phá hủy (ví dụ, sử dụng tia laze) các bộ phận của phôi hoặc cá thể của nó. tế bào. Cấy ghép như một loại vi phẫu được sử dụng để xác định các con đường di chuyển của tế bào và các nguồn phát triển mô. Đồng thời, một vị trí của phôi, ví dụ, một con chim cút, được cấy vào cùng một vị trí của phôi gà thay cho vị trí ở xa. Nhân tế bào chim cút có cấu trúc đặc trưng và do đó có thể phân biệt được với nhân tế bào phôi gà.
sự giải thích- cắt bỏ một phần nhỏ phôi và nuôi cấy trong môi trường nhân tạo. Sử dụng phương pháp này, có thể thu được thông tin về các nguồn phát triển mô từ một khu vực nhất định của phôi và xác định các mô hình phát triển mô di truyền.
Cấy ghép hạt nhân- một phương pháp nhân bản phôi. Ví dụ, việc cấy ghép nhân từ tế bào biểu mô ruột của nòng nọc ếch có móng vuốt vào trứng ếch, nhân của nó bị bất hoạt bởi tia cực tím, dẫn đến sự xuất hiện của các cá thể mới (thí nghiệm của Gerdon). Những thí nghiệm này đã đặt nền móng cho việc nhân bản các động vật có xương sống bậc cao và góp phần vào sự xuất hiện (năm 1997) của loài cừu nổi tiếng Dolly. Các thí nghiệm phôi học tương tự đã chứng minh một cách thuyết phục rằng nhân của tế bào xôma chứa một bộ thông tin di truyền hoàn chỉnh cho sự phát triển của một sinh vật mới.
Thành tích mới nhất phôi học thực nghiệm là sự phát triển của phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm. Việc cấy phôi đã thụ thai trong ống nghiệm vào tử cung là cơ sở của điều trị vô sinh. Năm 1973, L. Shettles (Mỹ) đã lấy một quả trứng tiền rụng khỏi buồng trứng của một phụ nữ hiếm muộn và thụ tinh với tinh trùng của chồng. Đây là sự khởi đầu của kỹ thuật cấy phôi người để điều trị vô sinh. Tuy nhiên, chỉ vào năm 1978 tại Anh, do cấy ghép thành công phôi thai người vào tử cung của một phụ nữ vô sinh ở giai đoạn 8 phôi thai, sau 2,5 ngày nuôi cấy, đứa trẻ "trong ống nghiệm" đầu tiên trên thế giới đã có cân nặng. 2700 g xuất hiện.