ऊतक विज्ञान अनुसंधान की वस्तुएं। ऊतक विज्ञान, कोशिका विज्ञान और भ्रूणविज्ञान में प्रयुक्त अनुसंधान विधियां

ऊतकीय अनुसंधान के तरीके

सामान्य, पैथोलॉजिकल और प्रायोगिक स्थितियों में मनुष्यों, जानवरों और पौधों की कोशिकाओं और ऊतकों की संरचना और कार्य का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है। जी एम का आधार और। है - सूक्ष्म परीक्षण के लिए कोशिकाओं और ऊतकों की तैयारी के निर्माण में उपयोग की जाने वाली कार्यप्रणाली तकनीकों का एक सेट। अध्ययन के तहत वस्तु की स्थिति के आधार पर कोशिकाओं और ऊतकों का सूक्ष्म अध्ययन दो मुख्य तरीकों से किया जा सकता है: जीवित कोशिकाओं और ऊतकों का अध्ययन, गैर-जीवित कोशिकाओं और ऊतकों का अध्ययन जो विशेष निर्धारण के कारण अपनी संरचना को बनाए रखते हैं। तकनीक।

जीवित वस्तुओं का अध्ययन - महत्वपूर्ण (सुप्राविटल) - कोशिकाओं और ऊतकों में शारीरिक प्रक्रियाओं, उनकी अंतर्गर्भाशयी संरचना का निरीक्षण करना संभव बनाता है। यह एक तरल माध्यम (रक्त कोशिकाओं, स्क्रैपिंग की उपकला कोशिकाओं, आदि) में स्वतंत्र रूप से निलंबित कोशिकाओं पर किया जाता है, साथ ही विशेष पोषक मीडिया पर विकसित कोशिका और ऊतक संस्कृतियों पर भी किया जाता है। इंट्रावाइटल अवलोकन का उद्देश्य पतली, पारदर्शी ऊतक फिल्में (तैराकी झिल्ली) हो सकता है। प्रायोगिक अध्ययनों में, जैविक खिड़कियों की विधि (पारदर्शी कक्षों का आरोपण) और प्राकृतिक पारदर्शी वातावरण में ऊतक प्रत्यारोपण का अध्ययन, उदाहरण के लिए, जानवरों की आंख के पूर्वकाल कक्ष में उपयोग किया जाता है। हाथ में कार्य के आधार पर, महत्वपूर्ण अध्ययनों में विभिन्न विशेष माइक्रोस्कोपी विधियों का उपयोग किया जाता है: डार्क-फील्ड, चरण-विपरीत, प्रतिदीप्ति, ध्रुवीकरण, पराबैंगनी। महत्वपूर्ण हिस्टोलॉजिकल विधियों का उपयोग मुख्य रूप से जैविक और जैव चिकित्सा अनुसंधान के लिए किया जाता है। उनका व्यापक उपयोग जीवित ऊतकों के गुणों से जुड़ी महान तकनीकी कठिनाइयों से सीमित है। चिकित्सा अनुसंधान में, विशेष रूप से शारीरिक विकृति प्रयोगशालाओं के अभ्यास में, निश्चित वस्तुओं के अध्ययन के तरीकों का उपयोग किया जाता है।

निर्धारण का उद्देश्य कोशिकाओं और ऊतकों की इंट्रावाइटल संरचना को जल्दी से रासायनिक एजेंटों को उजागर करके संरक्षित करना है जो पोस्टमार्टम परिवर्तनों के विकास को रोकते हैं। निर्धारण विधि का चुनाव अध्ययन के उद्देश्यों और तय की जाने वाली सामग्री की विशेषताओं पर निर्भर करता है। इस प्रकार, भारी धातुओं के लवण युक्त फिक्सिंग मिश्रण (उदाहरण के लिए, उदात्त) का उपयोग पतली सेलुलर संरचनाओं की पहचान करने के लिए किया जाता है। साइटोलॉजिकल उद्देश्यों के लिए सबसे अच्छा लगाने वाला ऑस्मियम टेट्रोक्साइड है, जिसका उपयोग अक्सर इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में किया जाता है। एक सार्वभौमिक फिक्सेटिव फॉर्मलाडेहाइड है, जिसका उपयोग 10% फॉर्मेलिन समाधान के रूप में किया जाता है। एक समान और पूर्ण होने के लिए, ऊतक के टुकड़े छोटे होने चाहिए, और फिक्सिंग तरल की मात्रा तय की जाने वाली सामग्री की मात्रा से कई गुना अधिक होनी चाहिए। निर्धारण के बाद, टुकड़ों को आमतौर पर पानी या शराब में धोया जाता है। ठोस ऊतक घटकों (जैसे, कैल्शियम जमा) को डीकैल्सीफिकेशन तकनीकों का उपयोग करके हटा दिया जाता है।

ऊतक अनुभाग तैयार करने का सबसे तेज़ और आसान तरीका, आमतौर पर एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स में उपयोग किया जाता है, एक टुकड़ा है और एक फ्रीजिंग माइक्रोटोम पर ऊतक अनुभाग प्राप्त करना है। हालांकि, पर्याप्त रूप से पतले वर्गों के साथ-साथ छोटी वस्तुओं और क्षयकारी ऊतकों से वर्गों को प्राप्त करना मुश्किल है। इसलिए, ऊतक के टुकड़े, एक नियम के रूप में, सीलिंग मीडिया - या सेलोइडिन में डाले जाते हैं। फिक्स्ड बढ़ती ताकत के अल्कोहल में निर्जलित होता है, एक मध्यवर्ती विलायक (ज़ाइलीन या पैराफिन के लिए, सेलोइडिन के लिए अल्कोहल-ईथर) के माध्यम से पारित किया जाता है और पैराफिन या सेलोइडिन के साथ लगाया जाता है। पैराफिन में आपको पतले वर्ग (5-8 से 1-2 . तक) प्राप्त करने की अनुमति मिलती है माइक्रोन) सेलोइडिन की तुलना में। सूक्ष्म परीक्षण के लिए अनुभाग एक स्लाइड या रोटरी माइक्रोटोम का उपयोग करके तैयार किए जाते हैं। अल्ट्रा-थिन सेक्शन (90-100 से 5-15 . तक की मोटाई) एनएम) इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म अध्ययन के लिए आवश्यक एक अल्ट्राटोम पर तैयार किए जाते हैं। अर्ध-पतले वर्गों को प्राप्त करने के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोपी में अल्ट्राटॉम का भी उपयोग किया जाता है। तैयार वर्गों को कोशिकाओं और ऊतकों की संरचनाओं को स्पष्ट रूप से उजागर करने के लिए दाग दिया जाता है जो रंगों को अलग तरह से देखते हैं। मुख्य रंजक - रंग आधार और उनके लवण (, टोल्यूडीन नीला, नीला, बिस्मार्क भूरा) - तथाकथित बेसोफिलिक संरचनाओं (कोशिका नाभिक, संयोजी ऊतक) को दाग देते हैं। अम्लीय रंजक - रंग अम्ल और उनके लवण (पिक्रिक एसिड, एरिथ्रोसिन) - दाग एसिडोफिलिक, या ऑक्सीफिलिक, संरचनाएं (सेल साइटोप्लाज्म, कोलेजन, लोचदार फाइबर)। धुंधला को संसेचन द्वारा अलग किया जाना चाहिए - कोशिकाओं और ऊतकों के कुछ क्षेत्रों पर आधारित एक विशेष विधि जो उनके लवण से भारी धातुओं (उदाहरण के लिए, चांदी, सोना, ऑस्मियम) को बहाल करती है और इस तरह एक गहन रंग प्राप्त करती है।

एक हिस्टोलॉजिकल तैयारी की तैयारी इसे मीडिया में रखकर पूरी की जाती है जो वस्तु की संरचनाओं, उसके रंग और पारदर्शिता के संरक्षण को सुनिश्चित करती है। उदाहरण के लिए, अक्सर इन उद्देश्यों के लिए कार्बनिक रेजिन का उपयोग किया जाता है।

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देखें कि "हिस्टोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स" अन्य शब्दकोशों में क्या हैं:

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अध्ययन की वस्तुएं स्थिर (मृत) या जीवित कोशिकाएं और ऊतक हो सकती हैं।

कच्चे माल और पशुधन उत्पादों की सूक्ष्म संरचना का अध्ययन करने के लिए, एक नियम के रूप में, निश्चित कोशिकाओं और ऊतकों का उपयोग किया जाता है। तैयारी अस्थायी है, एक अध्ययन के लिए अभिप्रेत है, और स्थायी है, जिसे संग्रहीत किया जा सकता है और बार-बार जांच की जा सकती है। इसके अलावा, कुल या पूरी तैयारी का उपयोग किया जाता है।

अस्थायी दवाएंअपेक्षाकृत जल्दी पकाया जा सकता है; इसके लिए अध्ययन की जा रही सामग्री को स्थिर किया जाता है और एक फ्रीजिंग माइक्रोटोम पर खंड प्राप्त किए जाते हैं, इसकी अनुपस्थिति में, ऊतक या अंग का एक पतला खंड स्केलपेल या ब्लेड से बनाया जा सकता है। परिणामी खंड को दाग दिया जाता है, एक कांच की स्लाइड पर रखा जाता है, और फिर ग्लिसरीन की एक बूंद लगाई जाती है और एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है। स्टार्च का पता लगाने के लिए, पोटेशियम आयोडाइड में आयोडीन के घोल का उपयोग किया जाता है: 0.5 ग्राम पोटेशियम आयोडाइड को थोड़ी मात्रा में पानी में घोल दिया जाता है, 1 ग्राम क्रिस्टलीय आयोडीन मिलाया जाता है और पानी को 100 सेमी 3 में मिलाया जाता है। अभिकर्मक की कुछ बूंदों को सॉसेज, पनीर और कांच की स्लाइड पर स्थित अन्य सामग्री के पतले टुकड़े पर लगाया जाता है, स्टार्च नीला-बैंगनी हो जाता है।

कुल या पूरी तैयारीऊतक या अंग के एक भाग को प्राप्त किए बिना जांच की जाती है। उदाहरण के लिए, चमड़े के नीचे के ऊतक की एक फिल्म या निर्धारण, धोने और धुंधला होने के बाद पौधे की जड़ की कुचल तैयारी एक स्लाइड और एक कवरस्लिप के बीच संलग्न होती है। अलग-अलग संरचनात्मक तत्वों की पहचान करने के लिए, चमड़े के नीचे के ऊतक या चिकनी मांसपेशियों के ऊतकों के स्थिर और दाग वाले टुकड़ों को एक कांच की स्लाइड पर सुई से लगाया जाता है - ऐसी तैयारी को प्लक्ड कहा जाता है। कुछ मामलों में, उदाहरण के लिए, नेत्रगोलक या टैडपोल की त्वचा की रेटिना की फिल्म की जांच करते समय, निर्धारण और धोने के बाद, रंग नहीं किया जाता है, क्योंकि कोशिकाओं में कार्बनिक समावेशन (वर्णक) होते हैं जिनका प्राकृतिक रंग होता है।

हिस्टोलॉजिकल तैयारी तैयार करने की विधि।स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों के अध्ययन की मुख्य विधि हिस्टोलॉजिकल है, अर्थात। एक विशेष माध्यम में संलग्न एक सना हुआ ऊतक खंड का अध्ययन। वर्गों को प्राप्त करने के लिए, परीक्षण सामग्री को पैराफिन या सेलोइडिन में डालने का उपयोग किया जाता है, जिससे वर्गों (40-60 माइक्रोन) की त्वरित तैयारी के लिए, पतले वर्गों (क्रमशः 5-7 माइक्रोन या 10-30 माइक्रोन) प्राप्त करना संभव हो जाता है, ठंड तकनीक का प्रयोग किया जाता है।

हिस्टोलॉजिकल नमूने की तैयारी में मुख्य चरण हैं: नमूनाकरण, निर्धारण, धुलाई, निर्जलीकरण, पैराफिन या सेलोइडिन में एम्बेड करना, धुंधला करना, एक कवरस्लिप के नीचे रखना।

नमूने का चयनअध्ययन के उद्देश्य और सामग्री की संरचना को ध्यान में रखते हुए बनाया गया है। नमूने का आकार औसतन 2.5-3.0 सेमी से अधिक नहीं होना चाहिए। यकृत और प्लीहा के नमूने एक कैप्सूल के साथ लिए जाते हैं। एट्रियम के टुकड़े दिल से काट दिए जाते हैं, क्योंकि झिल्ली वेंट्रिकल्स की तुलना में पतली होती है और एक तैयारी पर एपिकार्डियम, मायोकार्डियम और एंडोकार्डियम के स्थलाकृतिक संबंध देख सकते हैं। गुर्दे, लिम्फ नोड्स, अधिवृक्क ग्रंथियों से, अंगों के वर्गों को काट दिया जाता है जो सतह के लंबवत सतह में गहराई तक जाते हैं ताकि तैयारी पर प्रांतस्था और मज्जा प्रकट हो जाएं। यदि परिवर्तित अंगों की तैयारी तैयार करना आवश्यक है, तो परीक्षण सामग्री के टुकड़े प्रभावित क्षेत्र के साथ सीमा पर काट दिए जाते हैं ताकि घाव के संक्रमण क्षेत्र को नमूने में शामिल किया जा सके। कंकाल की मांसपेशियों से नमूने काटा जाना चाहिए ताकि मांसपेशी फाइबर अनुदैर्ध्य और अनुप्रस्थ वर्गों में हों। कीमा बनाया हुआ मांस, पनीर और अन्य टुकड़े टुकड़े के नमूने के नमूने पहले धुंध के टुकड़े में रखे जाते हैं और धागे से बंधे होते हैं। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि छाती गुहा को खोलते समय, फेफड़े लोच के कारण ढह जाते हैं, काफी वायुहीनता खो देते हैं, इसलिए, निकाले गए श्वसन अंगों के श्वासनली में एक ग्लास या रबर ट्यूब डाली जाती है, जिसके माध्यम से हवा को मध्यम रूप से इंजेक्ट किया जाता है। . सम्मिलित ट्यूब के नीचे श्वासनली पर एक रेशम संयुक्ताक्षर लगाया जाता है, और पूर्ण विसर्जन के लिए एक भार बांधा जाता है। आंतों को ठीक करने के लिए, निर्धारण के लिए लक्षित अंग के एक हिस्से को पहले दोनों तरफ लिगचर से बांध दिया जाता है। नमूने मोटे कागज के लेबल के साथ प्रदान किए जाते हैं जो नमूने की संख्या और तारीख को दर्शाते हैं।

निर्धारण,वे। संरचनाओं के जीवित प्रोटोप्लाज्म को अपरिवर्तनीय अवस्था में स्थानांतरित करने के लिए प्राकृतिक (आजीवन) वास्तुशिल्प का संरक्षण किया जाता है। जुड़नार की कार्रवाई इस तथ्य में प्रकट होती है कि जैव-भौतिक प्रक्रियाओं के परिणामस्वरूप, ऊतकों और अंगों में प्रोटीन का अपरिवर्तनीय जमावट होता है। अंग से लिया गया ऊतक का नमूना जितनी जल्दी हो सके लगानेवाला में विसर्जित कर दिया जाता है; सामग्री की मात्रा और फिक्सिंग तरल का अनुपात कम से कम 1:9 (चित्र 3) होना चाहिए।

निर्धारण से कुछ संघनन होता है और नमूने के आयतन में कमी आती है। फिक्सेशन के लिए अक्सर 10-12% फॉर्मेलिन, एथिल अल्कोहल, एसीटोन का उपयोग किया जाता है। फिक्सिंग द्रव की संकेतित सांद्रता तैयार करने के लिए, 40% फॉर्मेलिन को नल के पानी से पतला किया जाता है। एथिल अल्कोहल (100% निरपेक्ष, या 96%) का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां ऐसे पदार्थों की पहचान करना आवश्यक होता है जो वर्गों में जलीय जुड़नार (उदाहरण के लिए, ग्लाइकोजन) में घुल जाते हैं। एसीटोन में, अध्ययन के तहत सामग्री (उदाहरण के लिए, मस्तिष्क) केवल कुछ घंटों के लिए तय की जाती है। जब अध्ययन के तहत अंग, जैसे हड्डी के ऊतकों में चूना होता है, तो डीकैल्सीफिकेशन या कैल्सीफिकेशन किया जाता है। ऐसा करने के लिए, नाइट्रिक एसिड के 5-8% जलीय घोल में हड्डी का एक छोटा टुकड़ा उतारा जाता है (इसे एक धागे पर लटका देना बेहतर होता है), जिसे दिन में 2-3 बार बदला जाता है। डीकैल्सीफिकेशन के परिणाम को हड्डी में एक पतली सुई लगाकर आंका जाता है: यदि कोई प्रतिरोध नहीं है, तो डीकैल्सीफिकेशन पूरा हो गया है। ऐसे समर्थक के बाद

फ्लशिंगअतिरिक्त मात्रा में लगाने वाले को हटाने के लिए किया जाता है, उदाहरण के लिए, फॉर्मेलिन के साथ निर्धारण के बाद, बहते नल के पानी से धुलाई की जाती है।

निर्जलीकरणबढ़ती एकाग्रता के एथिल अल्कोहल में सामग्री को कॉम्पैक्ट करने के लिए किया गया: 50-70-100। 50% और 70% अल्कोहल तैयार करने के लिए, 96% अल्कोहल को आसुत जल से पतला किया जाता है। 100% अल्कोहल तैयार करने के लिए, कॉपर सल्फेट को पूरी तरह से निर्जलित होने तक गर्म करना और निर्जलित सफेद पाउडर में 96% एथिल अल्कोहल मिलाना आवश्यक है। अल्कोहल की प्रत्येक सांद्रता में, सामग्री को 1-24 घंटे के लिए रखा जाता है, जो टुकड़ों के आकार, अंग की संरचना पर निर्भर करता है; 70% अल्कोहल में, सामग्री को कई दिनों तक रखा जा सकता है।

भरनाऐसे माध्यम में किया जाता है कि परीक्षण नमूना ठोस हो जाता है, जिससे पतले वर्गों को प्राप्त करना संभव हो जाता है। ऐसा करने के लिए, पैराफिन (1-4 घंटे के लिए संसेचन), सेलोइडिन (तीन सप्ताह के लिए संसेचन) का उपयोग करें। वसा प्रकट करते समय और ढीले ऊतकों और अंगों के अध्ययन के लिए जिलेटिन में डालने का उपयोग किया जाता है।

स्लाइसस्लेज या घूर्णी माइक्रोटोम्स पर प्राप्त करें। पैराफिन में एम्बेडेड सामग्री से सबसे पतले खंड (5-7 माइक्रोन) बनाए जा सकते हैं। सेलॉइडिन से भरी सामग्री से 15-20 माइक्रोन मोटी धाराएं तैयार की जाती हैं। कच्चे माल और पशु मूल के उत्पादों की सूक्ष्म संरचना का अध्ययन करने के लिए, एक नियम के रूप में, एक ठंड तकनीक का उपयोग किया जाता है। यह तैयारी की तैयारी को गति देता है, क्योंकि निर्जलीकरण और डालने के लंबे चरण समाप्त हो जाते हैं। निर्धारण और धुलाई के बाद, वस्तु के टुकड़ों को फ्रीजिंग माइक्रोटोम के गीले चरण पर रखा जाता है और अनुभागों को 40-60 माइक्रोन की मोटाई के साथ प्राप्त किया जाता है। वर्गों को एक ब्रश के साथ पानी में स्थानांतरित किया जाता है, जहां वे सबसे पतले भूरे रंग के टुकड़ों की उपस्थिति प्राप्त करते हुए सीधा हो जाते हैं।

धारा धुंधला हो जानाएक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी में परीक्षा के लिए तैयार की गई तैयारी में विभिन्न संरचनाओं के विपरीत को बढ़ाने के लिए किया जाता है। धुंधला होने की प्रक्रिया में, जटिल रासायनिक और भौतिक प्रक्रियाएं होती हैं, इसलिए, एक विधि चुनते समय, विभिन्न भौतिक रासायनिक गुणों वाले कुछ रंगों के लिए सेल संरचनाओं की चयनात्मक आत्मीयता को ध्यान में रखा जाता है।

डाई बेसिक (बेसल), एसिडिक और स्पेशल होते हैं। मूल रंगों से सना हुआ संरचनाएं कहलाती हैं बेसोफिलिक,अम्ल रंग - ऑक्सीफिलिक, एसिडोफिलिक, ईोसिनोफिलिक।

मूल (बेसल) रंगों में से, हेमटॉक्सिलिन का उपयोग किया जाता है, जो नाभिक के क्रोमैटिन और नीले या बैंगनी रंग में प्रोटीन युक्त अन्य संरचनाओं को दाग देता है; कारमाइन, कोर को हल्के लाल रंग में रंगना, सफ़्रानिन - गहरा लाल रंग, थियोनिन - नीला पेंट।

अम्लीय रंगों में से, ईओसिन का उपयोग किया जाता है (साइटोप्लाज्म गुलाबी दाग), पिक्रिक एसिड (पीला), फुकसिन (ईंट रंग), इंडिगो कारमाइन (नीला)।

कच्चे माल और पशुधन उत्पादों की सूक्ष्म संरचना का अध्ययन करते समय, हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन के साथ संयुक्त धुंधलापन का सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है। ऐसा करने के लिए, पानी से वर्गों को 1-3 मिनट के लिए हेमटॉक्सिलिन समाधान में स्थानांतरित किया जाता है; 20-30 मिनट के लिए पानी में धोया जाता है, 3-5 मिनट के लिए ईओसिन के घोल में रखा जाता है और 3-5 मिनट के लिए पानी से धोया जाता है। बचे हुए पानी को फिल्टर पेपर से हटा दिया जाता है, 96% इथेनॉल की एक बूंद 1-2 मिनट के लिए लगाई जाती है, और ज़ाइलीन या टोल्यूनि में 25% कार्बोलिक एसिड के घोल में निर्जलित किया जाता है। फिर बाम की 1-2 बूंदों को कट पर लगाया जाता है और कवरस्लिप से ढक दिया जाता है।

वसायुक्त समावेशन को रंगने वाले रंगों में, सूडान 111 का अक्सर उपयोग किया जाता है। 85% एथिल अल्कोहल के 95 सेमी 3 में डाई घोल तैयार करने के लिए, एसीटोन के 5 सेमी 3 जोड़े जाते हैं और एक संतृप्त घोल प्राप्त होने तक सूडान III पाउडर डाला जाता है (द डाई अधिक मात्रा में निहित होना चाहिए)। मिश्रण को 50% C तक गर्म किया जाता है और फ़िल्टर किया जाता है। फ्रीजिंग माइक्रोटोम पर प्राप्त वर्गों को 1-2 मिनट के लिए 50% इथेनॉल में और फिर सूडान III में 25 मिनट के लिए रखा जाता है। वर्गों को 50% अल्कोहल में धोया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है और ग्लिसरॉल-जिलेटिन में डाला जाता है।

वसा में सूडान III के विघटन के कारण तटस्थ वसा की बूंदें नारंगी हो जाती हैं। ऑस्मिक एसिड के साथ वसा समावेशन का भी पता लगाया जा सकता है, जबकि वसायुक्त संरचनाएं काले रंग की होती हैं।

कवरस्लिप के तहत निष्कर्षऐसे वातावरण में किया जाता है जो हवा को गुजरने नहीं देते हैं और लंबे समय तक कट रखने में सक्षम होते हैं। सना हुआ वर्गों को बढ़ती ताकत के अल्कोहल में निर्जलित किया जाता है और फ़िर, कैनेडियन बाल्सम या ग्लिसरॉल-जिलेटिन में एक कवरस्लिप के नीचे रखा जाता है (तैयारी अल्कोहल और xylene के संपर्क में नहीं आना चाहिए)।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए नमूने तैयार करना।जैविक वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए, दो प्रकार के इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी का उपयोग किया जाता है: संचरण (संचरण) और स्कैनिंग (रेखापुंज)।

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में परीक्षा के लिए किसी वस्तु को संसाधित करने का सिद्धांत ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के समान सिद्धांतों पर आधारित है: नमूनाकरण, निर्धारण, धुलाई, निर्जलीकरण, डालना, अल्ट्राथिन वर्गों की तैयारी, इसके विपरीत।

नमूने का चयनप्रकाश माइक्रोस्कोपी के समान नियमों के अनुपालन में अध्ययन के उद्देश्य और सामग्री की संरचना को ध्यान में रखते हुए किया जाता है। अध्ययन की गई सामग्री के टुकड़ों की मात्रा 1 मिमी 3 से अधिक नहीं होनी चाहिए। निर्धारण का मुख्य उद्देश्य ऊतक को यथासंभव जीवन के करीब रखना है।

फिक्सेशनयह संरचनाओं के बेहतर संरक्षण के लिए किया जाता है, इसलिए, एक निश्चित पीएच और आइसोटोनिटी के साथ अभिकर्मकों का उपयोग करना आवश्यक है, जिनमें से मान ऊतक के प्रकार को तय किए जाने से निर्धारित होते हैं। निर्धारण प्रक्रिया दो चरणों में की जाती है: उपसर्ग और पश्च निर्धारण। उपसर्ग के लिए, ग्लूटाराल्डिहाइड (पीएच 7.2-7.4) के 2.5-3% घोल का उपयोग किया जाता है, निर्धारण की अवधि 2-4 घंटे है। पोस्टफिक्सेशन 2% समाधान (पीएच 7.2-7.4) में किया जाता है - 1- 2 घंटे इंट्रावाइटल संरचना को संरक्षित करने के लिए, कम तापमान लगाने वाले (0-4 डिग्री सेल्सियस) का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, और फॉस्फेट-बफर, कैकोडायलेट, वेरोनल-एसीटेट समाधान पर फिक्सेटिव तैयार करते हैं।

फ्लशिंगइसे 30% ठंडे अल्कोहल के साथ 5-7 बार किया जाता है, वस्तु को अल्कोहल के प्रत्येक भाग में 30 मिनट के लिए रखा जाता है, अर्थात। लगानेवाला से ऐसी अवस्था में धोया जाता है जब लगानेवाला की ऑक्सीकरण क्रिया बंद हो जाती है।

निर्जलीकरणबढ़ती ताकत के एथिल अल्कोहल के साथ करें: 30 मिनट के लिए 30, 50, 70, 96, 100%। कुछ डालने के तरीकों के लिए, एसीटोन और प्रोपलीन ऑक्साइड को जोड़ने की सिफारिश की जाती है।

भरनाएपॉक्सी रेजिन (अरल्डाइट, एपोन, आदि) में किया जाता है। कैप्सूल में रेजिन का पॉलिमराइजेशन थर्मोस्टेट में 60 डिग्री सेल्सियस पर सख्त होने तक, एक नियम के रूप में, 1-2 दिनों के भीतर किया जाता है।

अल्ट्राथिन खंडएक अल्ट्रामाइक्रोटोम पर कांच के चाकू का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है, इसके लिए एपॉक्सी ब्लॉकों को टेट्राहेड्रल ट्रंकेटेड पिरामिड के रूप में तेज किया जाता है। सीरियल धूसर वर्गों को 10% इथेनॉल के साथ स्नान में रखा जाता है। परिणामी वर्गों को तांबे या पैलेडियम की जाली पर लगाया जाता है, जिसकी सतह पर एक फॉर्मवार फिल्म पहले से लगाई जाती है। आवश्यक संरचनाओं को प्रकट करने के लिए, मेश पर वर्गों को लेड साइट्रेट और यूरेनिल एसीटेट के समाधान के साथ इलाज किया जाता है।

के लिये स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपीपरीक्षण के नमूने को निर्धारित, निर्जलित, अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर, उपरोक्त फिक्सेटिव का उपयोग करके किया जाता है। निर्जलीकरण के बाद, नमूना को एक धारक वस्तु से चिपका दिया जाता है, एक स्पटरिंग इकाई में रखा जाता है और सोने या प्लैटिनम की बहुत पतली परत के साथ लेपित किया जाता है। ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के विपरीत, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी संक्षारक तैयारी का उपयोग कर सकता है: अध्ययन की वस्तु को कुछ सख्त पदार्थों के साथ डाला जाता है, और फिर कास्ट और सतहों की जांच की जाती है। वे फ्रीजिंग-चिपिंग द्वारा प्राप्त प्रतिकृतियों का भी अध्ययन करते हैं। इस मामले में, वस्तु की सतह के दरार की छाप की जांच की जाती है। कंट्रास्ट बढ़ाने के लिए, प्रतिकृतियों को धातु के कणों (सोना, प्लेटिनम) या कोयले का छिड़काव करके छायांकित किया जाना चाहिए।

परीक्षण प्रश्न

• 1. कोशिका संरचनाओं, ऊतकों और अंगों के अध्ययन में किन विधियों का उपयोग किया जाता है?
• 2. ऊतकीय तैयारी की तैयारी के लिए नमूने लेते समय किन बुनियादी नियमों का पालन करना चाहिए?
• 3. अस्थि ऊतक से तैयार करने की क्या विशेषताएं हैं?
• 4. परीक्षण सामग्री कैसे तय की जाती है?
• 5. तैयारियों के निर्जलीकरण के लिए क्या प्रयोग किया जाता है?
• 6. परीक्षण सामग्री डालने के लिए किस माध्यम का उपयोग किया जाता है?
• 7. वसा ऊतक का पता लगाने के लिए किस डाई का उपयोग किया जाता है?
• 8. सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली सेक्शनिंग विधि क्या है और क्यों?
• 9. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के संचरण और स्कैनिंग के लिए नमूने तैयार करने के मुख्य चरणों का नाम बताइए।

ऊतक विज्ञान - (ग्रीक में "गिस्टोस" - ऊतक, लोगिस - शिक्षण) यह बहुकोशिकीय जीवों और मनुष्यों के ऊतकों की संरचना, विकास और महत्वपूर्ण गतिविधि का विज्ञान है। इस विज्ञान का विषय वस्तुएँ नग्न आंखों के लिए दुर्गम हैं। इसलिए, ऊतक विज्ञान का इतिहास ऐसे उपकरणों के निर्माण के इतिहास के साथ निकटता से जुड़ा हुआ है जो हमें सबसे छोटी वस्तुओं का नग्न आंखों से अध्ययन करने की अनुमति देता है। 2

ऊतक विज्ञान के पाठ्यक्रम को पारंपरिक रूप से निम्नलिखित वर्गों में विभाजित किया गया है: n 1. कोशिका विज्ञान कोशिका का विज्ञान है। n 2. भ्रूणविज्ञान, विकास का विज्ञान है, शुरुआत से लेकर जीव के पूर्ण गठन तक। n 3. सामान्य ऊतक विज्ञान - ऊतकों में निहित सामान्य पैटर्न का विज्ञान। n 4. निजी ऊतक विज्ञान - अंगों और प्रणालियों की संरचना, विकास का अध्ययन करता है।

कोशिका विज्ञान - (ग्रीक "कोशिका" और λόγος - "अध्ययन", "विज्ञान") जीव विज्ञान की एक शाखा जो जीवित कोशिकाओं, उनके जीवों, उनकी संरचना, कार्यप्रणाली, कोशिका प्रजनन की प्रक्रियाओं, उम्र बढ़ने और मृत्यु का अध्ययन करती है। चार

EMBRYOLOGY n (अन्य -ग्रीक ἔμβρυον से - भ्रूण, भ्रूण + -λογία से - शिक्षण) एक विज्ञान है जो भ्रूण के विकास का अध्ययन करता है। 5

कोशिका सिद्धांत 1590 के निर्माण का इतिहास। जेनसन ने सूक्ष्मदर्शी का आविष्कार किया, जिसमें दो लेंसों के संयोजन द्वारा आवर्धन प्रदान किया गया। 1665. रॉबर्ट हुक ने सबसे पहले सेल शब्द का प्रयोग किया था। 1650-1700 वर्ष। एंथोनी वैन लीउवेनहोएक ने सबसे पहले बैक्टीरिया और अन्य सूक्ष्मजीवों का वर्णन किया। 1700 -1800 वर्ष। विभिन्न ऊतकों, मुख्य रूप से सब्जी, के कई नए विवरण और चित्र प्रकाशित किए गए हैं। 1827 में कार्ल बेयर ने स्तनधारियों में अंडे की खोज की। 1831 -1833 वर्ष। रॉबर्ट ब्राउन ने पादप कोशिकाओं में केन्द्रक का वर्णन किया। 1838 -1839 वर्ष। वनस्पतिशास्त्री मैथियास स्लेडेन और प्राणी विज्ञानी थियोडोर श्वान ने विभिन्न वैज्ञानिकों के विचारों को मिलाकर कोशिका सिद्धांत तैयार किया, जिसने यह माना कि जीवित जीवों में संरचना और कार्य की मूल इकाई कोशिका है। 1855 रुडोल्फ विरचो ने दिखाया कि सभी कोशिकाएँ कोशिका विभाजन के परिणामस्वरूप बनती हैं।

कोशिका सिद्धांत 1665 के निर्माण का इतिहास। एक अंग्रेजी वैज्ञानिक, भौतिक विज्ञानी रॉबर्ट हुक ने माइक्रोस्कोप के तहत कॉर्क के एक हिस्से की जांच करते हुए पाया कि इसमें विभाजन द्वारा अलग की गई कोशिकाएं होती हैं। इन कोशिकाओं को उन्होंने "कोशिका" कहा

कोशिकीय सिद्धांत के निर्माण का इतिहास 17वीं शताब्दी में, लीउवेनहोक ने एक माइक्रोस्कोप डिजाइन किया और लोगों के लिए सूक्ष्म जगत का द्वार खोल दिया। विभिन्न प्रकार के सिलिअट्स, रोटिफ़र्स और अन्य छोटे जीवित प्राणी चकित शोधकर्ताओं की आँखों के सामने चमक उठे। यह पता चला कि वे हर जगह हैं - ये सबसे छोटे जीव हैं: पानी, खाद, हवा और धूल में, पृथ्वी और नाले में, जानवरों और वनस्पति मूल के सड़ने वाले कचरे में।

कोशिका सिद्धांत के निर्माण का इतिहास 1831-1833। रॉबर्ट ब्राउन ने पादप कोशिकाओं में केन्द्रक का वर्णन किया। 1838 में जर्मन वनस्पतिशास्त्री एम. स्लेडेन ने केंद्रक की ओर ध्यान आकर्षित किया और इसे कोशिका का प्रवर्तक माना। स्लेडेन के अनुसार, एक न्यूक्लियोलस एक दानेदार पदार्थ से संघनित होता है, जिसके चारों ओर एक नाभिक बनता है, और नाभिक के चारों ओर - एक कोशिका, और नाभिक कोशिका निर्माण की प्रक्रिया में गायब हो सकता है।

कोशिकीय सिद्धांत के निर्माण का इतिहास जर्मन प्राणी विज्ञानी टी. श्वान ने दिखाया कि जानवरों के ऊतकों में भी कोशिकाएं होती हैं। उन्होंने यह कहते हुए एक सिद्धांत बनाया कि नाभिक युक्त कोशिकाएं सभी जीवित चीजों के संरचनात्मक और कार्यात्मक आधार का प्रतिनिधित्व करती हैं। संरचना का सेलुलर सिद्धांत 1839 में टी। श्वान द्वारा तैयार और प्रकाशित किया गया था। इसका सार निम्नलिखित प्रावधानों में व्यक्त किया जा सकता है: 1. कोशिका सभी जीवित प्राणियों की संरचना की प्राथमिक संरचनात्मक इकाई है; 2. पौधों और जंतुओं की कोशिकाएँ स्वतंत्र होती हैं, उत्पत्ति और संरचना में एक दूसरे से सजातीय होती हैं। प्रत्येक कोशिका दूसरों से स्वतंत्र रूप से कार्य करती है, लेकिन सभी के साथ मिलकर। 3. सभी कोशिकाएँ संरचनाहीन अंतरकोशिकीय पदार्थ से उत्पन्न होती हैं। (गलती!) 4. कोशिका की जीवन गतिविधि कोश द्वारा निर्धारित की जाती है। (गलती!)

कोशिका सिद्धांत के निर्माण का इतिहास 1855 में, जर्मन चिकित्सक आर. विरचो ने एक सामान्यीकरण किया: एक कोशिका केवल पिछली कोशिका से ही उत्पन्न हो सकती है। इससे इस तथ्य का एहसास हुआ कि जीवों की वृद्धि और विकास कोशिका विभाजन और उनके आगे के भेदभाव से जुड़े होते हैं, जिससे ऊतकों और अंगों का निर्माण होता है।

1827 में कार्ल बेयर बैक द्वारा कोशिका सिद्धांत के निर्माण का इतिहास, कार्ल बेयर ने स्तनधारियों में अंडे की खोज की, यह साबित किया कि स्तनधारियों का विकास एक निषेचित अंडे से शुरू होता है। इसका मतलब है कि किसी भी जीव का विकास एक निषेचित अंडे से शुरू होता है, कोशिका विकास की इकाई है।

कोशिकीय सिद्धांत के निर्माण का इतिहास 1865 आनुवंशिकता के नियम प्रकाशित हुए (जी. मेंडल)। 1868 न्यूक्लिक एसिड की खोज की गई (एफ। मिशर) 1873 क्रोमोसोम की खोज की गई (एफ। श्नाइडर) 1874 पौधों की कोशिकाओं में माइटोसिस की खोज की गई (आई। डी। चिस्त्यकोव) 187 फ्लेमिंग - विभाजन के दौरान गुणसूत्रों का व्यवहार। 1882 जंतु कोशिकाओं में अर्धसूत्रीविभाजन की खोज की गई (डब्ल्यू. फ्लेमिंग) 1883 यह दिखाया गया कि रोगाणु कोशिकाओं में गुणसूत्रों की संख्या दैहिक कोशिकाओं की तुलना में दो गुना कम है (ई। वैन बेनेडेन) 1887 पौधों की कोशिकाओं में अर्धसूत्रीविभाजन की खोज की गई थी (ई। स्ट्रासबर्गर) 1898 गोल्गी ने कोशिका के जाल उपकरण, गोल्गी तंत्र की खोज की। 1914 आनुवंशिकता का गुणसूत्र सिद्धांत तैयार किया गया था (टी। मॉर्गन)। 1924 पृथ्वी पर जीवन की उत्पत्ति का प्राकृतिक-वैज्ञानिक सिद्धांत प्रकाशित हुआ (ए.आई. ओपरिन)। 1953 डीएनए की संरचना के बारे में विचार तैयार किए गए और इसका मॉडल बनाया गया (डी. वाटसन और एफ. क्रिक)। 1961 आनुवंशिक कोड की प्रकृति और गुण निर्धारित किए जाते हैं (एफ. क्रिक, एल. बार्नेट, एस. बेनर)।

आधुनिक कोशिकीय सिद्धांत के मुख्य प्रावधान 1. कोशिका एक प्राथमिक जीवित प्रणाली, संरचना, महत्वपूर्ण गतिविधि, प्रजनन और जीवों के व्यक्तिगत विकास की एक इकाई है। 2. सभी जीवित जीवों की कोशिकाएँ समरूप, संरचना और उत्पत्ति में एक समान होती हैं। 3. कोशिका निर्माण। नई कोशिकाएं पहले से मौजूद कोशिकाओं को विभाजित करके ही उत्पन्न होती हैं। 4. कोशिका और जीव। एक कोशिका एक स्वतंत्र जीव (प्रोकैरियोट्स और एककोशिकीय यूकेरियोट्स) हो सकती है। सभी बहुकोशिकीय जीव कोशिकाओं से बने होते हैं। 5. कोशिकाओं के कार्य। कोशिकाओं में, चयापचय, चिड़चिड़ापन और उत्तेजना, आंदोलन, प्रजनन और भेदभाव किया जाता है। 6. कोशिका विकास। सेलुलर संगठन जीवन की शुरुआत में उभरा और परमाणु मुक्त रूपों (प्रोकैरियोट्स) से परमाणु रूपों (यूकेरियोट्स) तक विकासवादी विकास का एक लंबा सफर तय किया।

हिस्टोलॉजिकल नमूनों की माइक्रोस्कोपी के लिए तरीके 1. प्रकाश माइक्रोस्कोपी। 2. पराबैंगनी माइक्रोस्कोपी। 3. फ्लोरोसेंट (ल्यूमिनेसेंट) माइक्रोस्कोपी। 4. चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी। 5. डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी। 6. हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी 7. ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी। 8. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी। 17

माइक्रोस्कोप n यह ऑप्टिकल उपकरण आपको छोटी वस्तुओं का निरीक्षण करने की अनुमति देता है। छवि आवर्धन वस्तुनिष्ठ लेंस और एक ऐपिस की एक प्रणाली द्वारा प्राप्त किया जाता है। दर्पण, संघनित्र और डायाफ्राम प्रकाश प्रवाह को निर्देशित करते हैं और वस्तु की रोशनी को नियंत्रित करते हैं। माइक्रोस्कोप के यांत्रिक भाग में शामिल हैं: एक तिपाई, एक वस्तु तालिका, मैक्रो- और माइक्रोमीटर स्क्रू, एक ट्यूब धारक। अठारह

माइक्रोस्कोपी की विशेष विधियाँ: - चरण-विपरीत माइक्रोस्कोप - (जीवित गैर-दाग वाली वस्तुओं के अध्ययन के लिए) - माइक्रोस्कोपी आपको जीवित और बिना दाग वाली वस्तुओं का अध्ययन करने की अनुमति देती है। जब प्रकाश रंगीन वस्तुओं से होकर गुजरता है, तो प्रकाश तरंग का आयाम बदल जाता है, और जब प्रकाश बिना रंग की वस्तुओं से होकर गुजरता है, तो प्रकाश तरंग का चरण बदल जाता है, जिसका उपयोग चरण-विपरीत और हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी में एक उच्च-विपरीत छवि प्राप्त करने के लिए किया जाता है। - डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोप (जीवित वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए)। एक विशेष कंडेनसर का उपयोग किया जाता है जो अप्रकाशित सामग्री के विपरीत संरचनाओं को उजागर करता है। डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोपी से जीवित वस्तुओं का निरीक्षण करना संभव हो जाता है। प्रेक्षित वस्तु एक अंधेरे क्षेत्र में प्रकाशित के रूप में प्रकट होती है। इस मामले में, प्रदीपक से किरणें वस्तु पर किनारे से गिरती हैं, और केवल बिखरी हुई किरणें ही माइक्रोस्कोप लेंस में प्रवेश करती हैं। 19

माइक्रोस्कोपी की विशेष विधियाँ ल्यूमिनसेंट माइक-पी (जीवित निर्विकार वस्तुओं के अध्ययन के लिए) माइक्रोस्कोपी का उपयोग फ्लोरोसेंट (ल्यूमिनेसेंट) वस्तुओं का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है। एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में, एक शक्तिशाली स्रोत से प्रकाश दो फिल्टर से होकर गुजरता है। एक फिल्टर नमूने के सामने प्रकाश को अवरुद्ध करता है और तरंग दैर्ध्य के प्रकाश की अनुमति देता है जो नमूने को प्रतिदीप्त करने के लिए उत्तेजित करता है। अन्य फिल्टर फ्लोरोसेंट ऑब्जेक्ट द्वारा उत्सर्जित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश को गुजरने की अनुमति देता है। इस प्रकार, फ्लोरोसेंट वस्तुएं एक तरंग दैर्ध्य के प्रकाश को अवशोषित करती हैं और स्पेक्ट्रम के दूसरे क्षेत्र में प्रकाश उत्सर्जित करती हैं। -पराबैंगनी क्षमता m-pa) mic-p (संकल्प बढ़ाता है -ध्रुवीकरण mic-p (अणुओं की एक व्यवस्थित व्यवस्था के साथ अनुसंधान वस्तुओं के लिए - कंकाल, मांसपेशी, कोलेजन फाइबर, आदि) माइक्रोस्कोपी - बिना रंग के अनिसोट्रोपिक संरचनाओं की छवि निर्माण ( जैसे कोलेजन फाइबर और मायोफिब्रिल्स के रूप में)।20

माइक्रोस्कोपी के विशेष तरीके - हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी (कोशिकाओं में सूखे अवशेषों को निर्धारित करने के लिए, वस्तुओं की मोटाई निर्धारित करने के लिए) - माइक्रोस्कोपी चरण-विपरीत और ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी के सिद्धांतों को जोड़ती है और इसका उपयोग अस्थिर वस्तुओं की एक विपरीत छवि प्राप्त करने के लिए किया जाता है। विशेष हस्तक्षेप प्रकाशिकी (नोमार्स्की ऑप्टिक्स) ने सूक्ष्मदर्शी में अंतर हस्तक्षेप विपरीतता के साथ आवेदन पाया है। C. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी: -ट्रांसमिशन (ट्रांसमिशन के माध्यम से वस्तुओं का अध्ययन) -स्कैनिंग (वस्तुओं की सतह का अध्ययन) सैद्धांतिक रूप से, ट्रांसमिशन EM का रिज़ॉल्यूशन 0.002 एनएम है। आधुनिक सूक्ष्मदर्शी का वास्तविक संकल्प 0.1 एनएम तक पहुंचता है। जैविक वस्तुओं के लिए, व्यवहार में ईएम संकल्प 2 एनएम है। 21

विशेष माइक्रोस्कोपी तकनीक एक संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में एक स्तंभ होता है जिसके माध्यम से कैथोड फिलामेंट द्वारा उत्सर्जित इलेक्ट्रॉन निर्वात में गुजरते हैं। रिंग मैग्नेट द्वारा केंद्रित एक इलेक्ट्रॉन बीम तैयार नमूने से होकर गुजरता है। इलेक्ट्रॉन प्रकीर्णन की प्रकृति नमूने के घनत्व पर निर्भर करती है। नमूने से गुजरने वाले इलेक्ट्रॉनों पर ध्यान केंद्रित किया जाता है, एक फ्लोरोसेंट स्क्रीन पर देखा जाता है, और एक फोटोग्राफिक प्लेट का उपयोग करके रिकॉर्ड किया जाता है। अध्ययन के तहत वस्तु की सतह की त्रि-आयामी छवि प्राप्त करने के लिए एक स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है। कोशिका झिल्लियों की आंतरिक संरचना का अध्ययन करने के लिए चिपिंग विधि (फ्रीजिंग-क्लीविंग) का उपयोग किया जाता है। कोशिकाओं को क्रायोप्रोटेक्टेंट की उपस्थिति में तरल नाइट्रोजन तापमान पर जमे हुए हैं और चिप्स बनाने के लिए उपयोग किया जाता है। क्लीवेज प्लेन लिपिड बाईलेयर के हाइड्रोफोबिक बीच से होकर गुजरते हैं। झिल्लियों की उजागर आंतरिक सतह को प्लैटिनम से छायांकित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिकृतियों का अध्ययन स्कैनिंग ईएम में किया जाता है। 22

विशेष (गैर-सूक्ष्म) तरीके: 1. साइटो- या हिस्टोकेमिस्ट्री - सार विभिन्न पदार्थों (प्रोटीन, एंजाइम, वसा, कार्बोहाइड्रेट) की मात्रा निर्धारित करने के लिए कोशिकाओं और ऊतकों में एक हल्के अंत उत्पाद के साथ कड़ाई से विशिष्ट रासायनिक प्रतिक्रियाओं का उपयोग है। आदि।)। एक प्रकाश या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के स्तर पर लागू किया जा सकता है। 2. साइटोफोटोमेट्री - विधि का उपयोग 1 के संयोजन में किया जाता है और साइटोहिस्टोकेमिकल विधि द्वारा पहचाने गए प्रोटीन, एंजाइम आदि की मात्रा निर्धारित करना संभव बनाता है। 3. ऑटोरैडियोग्राफी - रासायनिक तत्वों के रेडियोधर्मी आइसोटोप वाले पदार्थ शरीर में पेश किए जाते हैं। ये पदार्थ कोशिकाओं में चयापचय प्रक्रियाओं में शामिल होते हैं। स्थानीयकरण, अंगों में इन पदार्थों की आगे की गति विकिरण द्वारा हिस्टोलॉजिकल तैयारी पर निर्धारित की जाती है, जिसे तैयारी के लिए लागू एक फोटोग्राफिक इमल्शन द्वारा कैप्चर किया जाता है। 4. एक्स-रे विवर्तन विश्लेषण - आपको जैविक सूक्ष्म-वस्तुओं की आणविक संरचना का अध्ययन करने के लिए, कोशिकाओं में रासायनिक तत्वों की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देता है। 24 5. मॉर्फोमेट्री - बायोल के आकार को मापना। सेलुलर और उप-कोशिकीय स्तरों पर संरचनाएं।

विशेष (गैर-सूक्ष्म) तरीके 6. माइक्रोरजी - एक माइक्रोस्कोप के तहत एक माइक्रोमैनिपुलेटर के साथ बहुत नाजुक संचालन करना (नाभिक प्रत्यारोपण, कोशिकाओं में विभिन्न पदार्थों का परिचय, बायोपोटेंशियल का माप, आदि) 6. कोशिकाओं और ऊतकों के संवर्धन की विधि - में पोषक तत्व मीडिया या प्रसार कक्षों में, शरीर के विभिन्न ऊतकों में प्रत्यारोपित। 7. अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन - विभिन्न घनत्वों के घोल में सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा कोशिकाओं या उपकोशिकीय संरचनाओं का विभाजन। 8. प्रायोगिक विधि। 9. ऊतक और अंग प्रत्यारोपण की विधि। 25

निर्धारण कोशिकाओं, ऊतकों और अंगों की संरचना को संरक्षित करता है, उनके जीवाणु संदूषण और एंजाइमी पाचन को रोकता है, और उनके रासायनिक क्रॉसलिंकिंग के माध्यम से मैक्रोमोलेक्यूल्स को स्थिर करता है। 32

तरल फॉर्मेलिन, अल्कोहल, ग्लूटाराल्डिहाइड को ठीक करना - सबसे आम जुड़नार; क्रायोफिक्सेशन - तरल नाइट्रोजन (-196 डिग्री सेल्सियस) में नमूनों की तात्कालिक ठंड से संरचनाओं का सबसे अच्छा संरक्षण सुनिश्चित किया जाता है; Lyophilization - ऊतक के छोटे टुकड़े तेजी से ठंड के अधीन होते हैं, जो चयापचय प्रक्रियाओं को रोकता है। निर्जलीकरण - पानी निकालने की मानक प्रक्रिया बढ़ती ताकत (70 से 60% तक) के अल्कोहल में निर्जलीकरण है। भरना - कपड़े को टिकाऊ बनाता है, इसे काटने के दौरान कुचलने और झुर्रियों से बचाता है, मानक मोटाई के कटौती प्राप्त करना संभव बनाता है। सबसे आम एम्बेडिंग माध्यम पैराफिन है। सेलॉइडिन, प्लास्टिक मीडिया और रेजिन का भी उपयोग किया जाता है। 33

निर्जलीकरण एम्बेडिंग मीडिया के प्रवेश के लिए निश्चित ऊतक तैयार करता है। जीवित ऊतक से पानी, साथ ही फिक्सिंग मिश्रण से पानी (अधिकांश जुड़नार जलीय घोल होते हैं) को निर्धारण के बाद पूरी तरह से हटा दिया जाना चाहिए। पानी निकालने की मानक प्रक्रिया अल्कोहल में निर्जलीकरण है जो 60° से 100° तक बढ़ जाती है। 34

भरना एक आवश्यक प्रक्रिया है जो अनुभागों की तैयारी से पहले होती है। भरना कपड़े को टिकाऊ बनाता है, इसे काटने के दौरान कुचलने और झुर्रीदार होने से रोकता है, और मानक मोटाई के पतले वर्गों को प्राप्त करना संभव बनाता है। सबसे आम एम्बेडिंग माध्यम पैराफिन है। सेलॉइडिन, प्लास्टिक मीडिया और रेजिन का भी उपयोग किया जाता है। 35

रोटरी माइक्रोटोम। 40 n अंग के एक टुकड़े वाले ब्लॉक एक चल वस्तु धारक में तय होते हैं। जब इसे नीचे किया जाता है, तो सीरियल सेक्शन चाकू पर बने रहते हैं, उन्हें चाकू से हटा दिया जाता है और आगे की प्रक्रिया और माइक्रोस्कोपी के लिए ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है।

हिस्टोसेक्शन धुंधला तरीके: एन परमाणु (मूल): एन हेमटॉक्सिलिन - दाग एन एन एन एन नाभिक नीला; लौह हेमटॉक्सिलिन; अज़ूर II (बैंगनी रंग में); कारमाइन (लाल रंग में); सफारी (लाल रंग में); मिथाइल ब्लू (नीला से); टोल्यूडीन (नीले रंग में); थियोनिन (नीले रंग में)। एन साइटोप्लाज्मिक- (एसिड): एन ईओसिन - गुलाबी रंग में; एन एरिथ्रोसिन; n नारंगी "जी"; n खट्टा फुकसिन - लाल करने के लिए; एन पिक्रिक एसिड - पीला; n कांगो - लाल - से लाल 44

हिस्टोसेक्शन एन सूडान III को धुंधला करने के लिए विशेष तरीके - लिपिड और वसा के नारंगी धुंधलापन; एन ऑस्मिक एसिड - काले रंग में लिपिड और वसा का रंग; n orcein - लोचदार तंतुओं का भूरा रंग; n सिल्वर नाइट्रेट - गहरे भूरे रंग में तंत्रिका तत्वों का संसेचन। 45

सेल संरचनाएं: एन ऑक्सिफिलिया अम्लीय रंगों के साथ गुलाबी दागने की क्षमता n बेसोफिलियन मूल रंगों के साथ नीले रंग को दागने की क्षमता n न्यूट्रोफिलिया - n अम्लीय और मूल रंगों के साथ बैंगनी दागने की क्षमता। 47

1

सेल n एक प्राथमिक जीवित प्रणाली है जिसमें साइटोप्लाज्म, नाभिक, झिल्ली शामिल है और यह जानवरों और पौधों के जीवों के विकास, संरचना और जीवन का आधार है।

ग्लाइकोकैलिक्स एक एपिमेम्ब्रेन कॉम्प्लेक्स है जो प्रोटीन-बाउंड सैकराइड्स और लिपिड-बाउंड सैकराइड्स से बना होता है। कार्य एन रिसेप्शन (हार्मोन, साइटोकिन्स, मध्यस्थ और एंटीजन) एन इंटरसेलुलर इंटरैक्शन (चिड़चिड़ापन और मान्यता) एन पार्श्विका पाचन (आंतों की सीमा कोशिकाओं की माइक्रोविली)

कोशिका द्रव्य के कार्य: - परिसीमन; - दोनों दिशाओं में पदार्थों का सक्रिय और निष्क्रिय परिवहन; - रिसेप्टर कार्य; पड़ोसी कोशिकाओं के साथ संपर्क।

मुख्य अनुसंधान की वस्तुएं हिस्टोलॉजिकल तैयारी हैं, और मुख्य शोध पद्धति माइक्रोस्कोपी है।

ऊतकीय तैयारी पर्याप्त रूप से पारदर्शी (पतली) और इसके विपरीत होनी चाहिए। यह जीवित और मृत (स्थिर) दोनों संरचनाओं से बना है। तैयारी कोशिकाओं का निलंबन, एक धब्बा, एक छाप, एक फिल्म, कुल तैयारी और एक पतला खंड हो सकता है।

सूक्ष्म अध्ययन के लिए हिस्टोलॉजिकल तैयारी करने की प्रक्रिया में निम्नलिखित मुख्य चरण शामिल हैं: 1) सामग्री लेना और इसे ठीक करना; 2) सामग्री संघनन; 3) वर्गों की तैयारी; 4) धुंधला, या विपरीत वर्गों; 5) वर्गों का निष्कर्ष।

धुंधला होने के लिए, विभिन्न पीएच मानों के साथ विशेष हिस्टोलॉजिकल रंगों का उपयोग किया जाता है: अम्लीय, तटस्थ और बुनियादी। उनके द्वारा दागी गई संरचनाओं को क्रमशः ऑक्सीफिलिक, न्यूट्रोफिलिक (हेटरोफिलिक) और बेसोफिलिक कहा जाता है।

हिस्टोलॉजिकल साइंस किन तरीकों का इस्तेमाल करता है? वे काफी असंख्य और विविध हैं:

माइक्रोस्कोपी।

हल्की माइक्रोस्कोपी। आधुनिक सूक्ष्मदर्शी में उच्च विभेदन होता है। रिज़ॉल्यूशन को दो आसन्न बिंदुओं के बीच सबसे छोटी दूरी (डी) के रूप में परिभाषित किया जाता है जिसे अलग-अलग देखा जा सकता है। यह दूरी प्रकाश तरंग दैर्ध्य (λ) पर निर्भर करती है और सूत्र द्वारा व्यक्त की जाती है: d = 1/2 ।

स्पेक्ट्रम के दृश्य भाग की न्यूनतम तरंगदैर्घ्य 0.4 µm है। इसलिए, प्रकाश सूक्ष्मदर्शी की संकल्प शक्ति 0.2 µm है, और कुल आवर्धन 2500 गुना तक पहुंच जाता है।

पराबैंगनी माइक्रोस्कोपी . पराबैंगनी प्रकाश की तरंग दैर्ध्य 0.2 माइक्रोन है, इसलिए, पराबैंगनी माइक्रोस्कोप का संकल्प 0.1 माइक्रोन है, लेकिन चूंकि पराबैंगनी विकिरण अदृश्य है, अध्ययन के तहत वस्तु का निरीक्षण करने के लिए एक ल्यूमिनसेंट स्क्रीन की आवश्यकता होती है।

फ्लोरोसेंट (ल्यूमिनेसेंट) माइक्रोस्कोपी। शॉर्ट-वेव (अदृश्य) विकिरण, कई पदार्थों द्वारा अवशोषित होने के कारण, उनके इलेक्ट्रॉनों को उत्तेजित करता है, जो लंबी तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश का उत्सर्जन करता है, स्पेक्ट्रम का दृश्य भाग बन जाता है। इस प्रकार, माइक्रोस्कोप के संकल्प में वृद्धि हासिल की जाती है।

चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी आपको बिना रंग की वस्तुओं का उत्सर्जन करने की अनुमति देता है।

ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी कोलेजन फाइबर जैसे ऊतकीय संरचनाओं के वास्तुशिल्प का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी हजारों बार आवर्धित वस्तुओं का अध्ययन करना संभव बनाता है।

माइक्रोफोटोग्राफी और माइक्रोफिल्मोग्राफी . ये विधियां तस्वीरों में स्थिर वस्तुओं और गति में जीवित सूक्ष्म वस्तुओं का अध्ययन करना संभव बनाती हैं।

गुणात्मक और मात्रात्मक अनुसंधान के तरीके।

हिस्टो –और साइटोकेमिस्ट्री , मात्रात्मक सहित, ऊतक, सेलुलर और उप-कोशिकीय स्तरों पर अध्ययन के तहत वस्तुओं के गुणात्मक विश्लेषण की अनुमति देता है।

साइटोस्पेक्ट्रोफोटोमेट्री यह कोशिकाओं और ऊतकों में कुछ जैविक पदार्थों की मात्रात्मक सामग्री का अध्ययन उनके साथ जुड़े डाई द्वारा एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश के अवशोषण के आधार पर करना संभव बनाता है।

डिफरेंशियल सेंट्रीफ्यूजेशन आपको उन कोशिकाओं की सामग्री को अलग करने की अनुमति देता है जो उनके द्रव्यमान में एक दूसरे से भिन्न होती हैं।

रेडियोग्राफ़ यह चयापचय प्रक्रिया में एक रेडियोधर्मी लेबल (उदाहरण के लिए, रेडियोधर्मी आयोडीन, H³-थाइमिडीन, आदि) को शामिल करने पर आधारित है।

मोर्फोमेट्री आपको ऐपिस - और ऑब्जेक्ट-माइक्रोमीटर और विशेष ग्रिड का उपयोग करके कोशिकाओं, उनके नाभिक और ऑर्गेनेल के क्षेत्रों और मात्रा को मापने की अनुमति देता है।

कंप्यूटर अनुप्रयोग डिजिटल सामग्री के स्वचालित प्रसंस्करण के लिए।

ऊतक संवर्धन विधिशरीर के बाहर कोशिकाओं और ऊतकों की व्यवहार्यता और विभाजन का रखरखाव है। ऐसा करने के लिए, पोषक माध्यम वाले विशेष कंटेनरों का उपयोग किया जाता है, जिसमें कोशिकाओं की महत्वपूर्ण गतिविधि के लिए सभी आवश्यक शर्तें बनाई जाती हैं। इस पद्धति का उपयोग करके, कोशिकाओं के भेदभाव और कार्यात्मक विकास, उनके घातक परिवर्तन के पैटर्न और एक ट्यूमर प्रक्रिया के विकास, अंतरकोशिकीय बातचीत, वायरस और सूक्ष्मजीवों द्वारा कोशिकाओं और ऊतकों को नुकसान, चयापचय पर दवाओं के प्रभाव का अध्ययन करना संभव है। कोशिकाओं और ऊतकों, आदि में प्रक्रियाएं।

इंट्रावाइटल (महत्वपूर्ण) धुंधला हो जाना फागोसाइटोसिस की घटना और मैक्रोफेज की गतिविधि, वृक्क नलिकाओं की निस्पंदन क्षमता आदि का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है।

ऊतक प्रत्यारोपण विधि. इस पद्धति का उपयोग कोशिकाओं के व्यवहार और उनकी रूपात्मक अवस्था का अध्ययन करने के लिए किया जाता है जब उन्हें दूसरे जीव में प्रत्यारोपित किया जाता है। उदाहरण के लिए, इस पद्धति का उपयोग जानवरों को विकिरण की घातक खुराक के संपर्क में रखने के लिए किया जाता है।

सूक्ष्म हेरफेर।इस पद्धति का उपयोग आणविक जीव विज्ञान, आनुवंशिक इंजीनियरिंग और क्लोनिंग में भी किया गया है, जब एक माइक्रोमैनिपुलेटर का उपयोग करके गुणसूत्रों के एक अगुणित सेट के साथ एक अंडे से एक नाभिक हटा दिया जाता है और गुणसूत्रों के द्विगुणित सेट के साथ एक दैहिक कोशिका नाभिक को इसमें प्रत्यारोपित किया जाता है।

मौजूद कई शोध विधियां, जिनमें से निम्नलिखित हैं: फिल्म और वीडियो रिकॉर्डिंग का उपयोग करके जीवित भ्रूणों का अवलोकन (मुख्य रूप से प्रयोग में प्रयुक्त)। इसके लिए एक विशेष माइक्रोफोटोग्राफिक उपकरण का उपयोग किया जाता है, जो एक थर्मल चैंबर से जुड़ा होता है जिसमें भ्रूण विकसित होता है। उदाहरण के लिए, चिकन भ्रूण के विकास का अध्ययन करते समय, आप खोल में एक खिड़की बनाते हैं, जो एक पारदर्शी प्लेट से बंद होती है। इस पद्धति ने विकास की प्रक्रिया में भ्रूण के आकार और आकार में परिवर्तन की गतिशीलता का पता लगाना और उसे परिष्कृत करना संभव बना दिया।

फिक्स्ड स्लाइस विधिप्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, हिस्टोरेडियोऑटोग्राफी, हिस्टो- और इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री का उपयोग कर भ्रूण। ये विधियां भ्रूण के कुछ हिस्सों के विकास की गतिशीलता में ऊतक और इंट्रासेल्युलर परिवर्तनों का विश्लेषण करना संभव बनाती हैं। हिस्टो- और इम्यूनोसाइटोकेमिकल विधियों की सहायता से, भ्रूण कोशिकाओं में होने वाली जैव रासायनिक प्रक्रियाओं का अध्ययन किया जाता है - डीएनए, आरएनए, प्रोटीन, विशिष्ट रिसेप्टर प्रोटीन आदि का संश्लेषण। इन विधियों का उपयोग करके, विकास में कोशिका और ऊतक भेदभाव पर महत्वपूर्ण जानकारी प्राप्त की गई थी। भ्रूण और भ्रूण की।

अंकन विधिडब्ल्यू वोग्ट (1888-1941) द्वारा 1925 में प्रस्तावित, एक विकासशील भ्रूण में कोशिका आंदोलनों का अध्ययन करना संभव बनाता है। ऐसा करने के लिए, मार्कर जो भ्रूण के लिए गैर-विषैले होते हैं (उदाहरण के लिए, तटस्थ लाल, चारकोल कण), साथ ही कुछ प्रोटीनों के लिए एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। एंटीबॉडी का उपयोग करते समय, फ्लोरोसेंट डाई और रोगाणु प्रोटीन के साथ संयोजन करने की उनकी क्षमता का उपयोग किया जाता है। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी की मदद से डाई के वितरण का पता लगाया जाता है और भ्रूण के विकासशील ऊतकों में प्रोटीन संश्लेषण की गतिशीलता का अध्ययन किया जाता है।

माइक्रोसर्जरी के तरीके 20वीं शताब्दी की शुरुआत में जी. स्पीमैन (1869-1941) के स्कूल के प्रतिनिधियों द्वारा विकसित किए गए थे। उनमें शामिल थे: जानवरों के अंडों के खोल को हटाना, एक भ्रूण के कुछ हिस्सों को दूसरे में प्रत्यारोपण करना, आदि। इन विधियों का उपयोग भ्रूण या उसके व्यक्ति के कुछ हिस्सों के विनाश (उदाहरण के लिए, लेजर बीम का उपयोग करके) के परिणामों का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है। कोशिकाएं। एक प्रकार की माइक्रोसर्जरी के रूप में प्रत्यारोपण का उपयोग कोशिका प्रवास के मार्ग और ऊतक विकास के स्रोतों की पहचान करने के लिए किया जाता है। उसी समय, भ्रूण की एक साइट, उदाहरण के लिए, एक बटेर, दूरस्थ साइट के स्थान पर चिकन भ्रूण की उसी साइट में प्रत्यारोपित की जाती है। बटेर कोशिका के नाभिक में एक विशिष्ट संरचना होती है और इसलिए यह चिकन भ्रूण कोशिकाओं के नाभिक से अलग होती है।

व्याख्या- भ्रूण के एक छोटे से क्षेत्र का छांटना और कृत्रिम वातावरण में इसकी खेती। इस पद्धति का उपयोग करके, भ्रूण के किसी दिए गए क्षेत्र से ऊतक विकास के स्रोतों के बारे में जानकारी प्राप्त करना और विकास के हिस्टोजेनेटिक पैटर्न की पहचान करना संभव है।

परमाणु प्रत्यारोपण- भ्रूण क्लोनिंग के लिए एक विधि। उदाहरण के लिए, पंजे वाले मेंढक टैडपोल के आंतों के उपकला की कोशिकाओं से नाभिक का प्रत्यारोपण एक मेंढक के अंडे में होता है, जिसके नाभिक को एक पराबैंगनी किरण द्वारा निष्क्रिय किया गया था, जिससे नए व्यक्तियों (गेर्डन के प्रयोगों) की उपस्थिति हुई। इन प्रयोगों ने उच्च कशेरुकियों के क्लोनिंग की नींव रखी और प्रसिद्ध भेड़ डॉली की उपस्थिति (1997 में) में योगदान दिया। इसी तरह के भ्रूण संबंधी प्रयोगों ने स्पष्ट रूप से दिखाया है कि दैहिक कोशिकाओं के नाभिक में एक नए जीव के विकास के लिए आनुवंशिक जानकारी का एक पूरा सेट होता है।

नवीनतम उपलब्धि प्रायोगिक भ्रूणविज्ञानइन विट्रो फर्टिलाइजेशन की विधि का विकास था। इन विट्रो में गर्भित भ्रूण का गर्भाशय में प्रत्यारोपण बांझपन उपचार का आधार है। 1973 में, एल. शेट्टल्स (यूएसए) ने एक बांझ महिला के अंडाशय से एक प्रीवुलेटरी अंडे को हटा दिया और उसे अपने पति के शुक्राणु के साथ निषेचित किया। यह बांझपन के इलाज के लिए मानव भ्रूण के प्रत्यारोपण की तकनीक की शुरुआत थी। हालांकि, केवल 1978 में यूके में, 8 ब्लास्टोमेरेस के चरण में एक मानव भ्रूण की एक बांझ महिला के गर्भाशय में सफल प्रत्यारोपण के परिणामस्वरूप, 2.5 दिनों की खेती के बाद, दुनिया का पहला "टेस्ट-ट्यूब" बच्चे का वजन 2700 ग्राम दिखाई दिया।