אובייקטים של מחקר היסטולוגי. שיטות מחקר המשמשות בהיסטולוגיה, ציטולוגיה ואמבריולוגיה

שיטות מחקר היסטולוגיות

משמשים לחקר המבנה והתפקוד של תאים ורקמות של בני אדם, בעלי חיים וצמחים בתנאים נורמליים, פתולוגיים וניסויים. הבסיס של ג'מ ו. הוא - סט של טכניקות מתודולוגיות המשמשות בייצור תכשירים של תאים ורקמות לבדיקה מיקרוסקופית שלהם. מחקר מיקרוסקופי של תאים ורקמות יכול להתבצע בשתי דרכים עיקריות, בהתאם למצב האובייקט הנחקר: חקר תאים ורקמות חיים, חקר תאים שאינם חיים ורקמות השומרות על המבנה שלהם עקב קיבוע מיוחד. טכניקות.

חקר חפצים חיים - חיוניים (על-ויטליים) - מאפשר להתבונן בתהליכים הפיזיולוגיים בתאים וברקמות, במבנה התוך-חייתי שלהם. זה מתבצע על תאים התלויים בחופשיות בתווך נוזלי (תאי דם, תאי אפיתל של גרידות וכו'), כמו גם על תרביות תאים ורקמות שגדלו על מדיה תזונתית מיוחדת. מושא התבוננות תוך-חייתי יכול להיות סרטי רקמה דקים ושקופים (, קרום שחייה). במחקרים ניסיוניים משתמשים בשיטה של ​​חלונות ביולוגיים (השתלת חדרים שקופים) וחקר השתלות רקמות בסביבה שקופה טבעית, למשל, בחדר הקדמי של העין של בעלי חיים. בהתאם למשימה שעל הפרק, נעשה שימוש בשיטות מיקרוסקופיה מיוחדות שונות במחקרים חיוניים: שדה כהה, ניגודיות פאזה, פלואורסצנטי, קיטוב, אולטרה סגול. שיטות היסטולוגיות חיוניות משמשות בעיקר למחקר ביולוגי וביו-רפואי. השימוש הנרחב שלהם מוגבל על ידי קשיים טכניים גדולים הקשורים לתכונות של רקמות שורדות. במחקר רפואי, במיוחד בתרגול של מעבדות פתולוגיה אנטומית, נעשה שימוש בשיטות ללימוד חפצים קבועים.

מטרת הקיבוע היא לשמר את המבנה התוך-חייתי של תאים ורקמות על ידי חשיפתם מהירה לחומרים כימיים המונעים התפתחות של שינויים שלאחר המוות. בחירת שיטת הקיבוע תלויה במטרות המחקר ובמאפייני החומר לתיקון. לפיכך, תערובות קיבוע המכילות מלחים של מתכות כבדות (לדוגמה, סובלימציה) משמשות לזיהוי מבנים תאיים דקים.המקבע הטוב ביותר למטרות ציטולוגיות הוא אוסמיום טטרוקסיד, המשמש לעתים קרובות במיקרוסקופ אלקטרוני. מקבע אוניברסלי הוא פורמלדהיד, המשמש בצורה של תמיסת פורמלין 10%. כדי להיות אחידים ושלמים, פיסות הרקמה חייבות להיות קטנות, ונפח הנוזל המקבע חייב להיות גדול פי כמה מנפח החומר לקיבוע. לאחר הקיבוע, החלקים נשטפים בדרך כלל במים או באלכוהול. רכיבי רקמה מוצקים (למשל, משקעי סידן) מוסרים באמצעות טכניקות של ניקוי הסתיידות.

הדרך המהירה והקלה ביותר להכין קטע רקמה, המשמש בדרך כלל באבחון אקספרס, היא חתיכה וקבלת קטעי רקמה על מיקרוטום מקפיא. עם זאת, קשה להשיג קטעים דקים מספיק, כמו גם קטעים מחפצים קטנים ורקמות מתפוררות. לכן, פיסות רקמה, ככלל, מוזגות לתוך אמצעי איטום - או צלואידין. המקובע מיובש באלכוהולים בעלי חוזק הולך וגובר, עובר דרך ממס ביניים (קסילן או לפרפין, אלכוהול-אתר לצלואידין) ומוספג בפרפין או בצלואידין. בפרפין מאפשר לך לקבל קטעים דקים יותר (מ-5-8 ל-1-2 מיקרון) מאשר צלואידין. חלקים לבדיקה מיקרוסקופית מוכנים באמצעות שקף או מיקרוטום סיבובי. קטעים דקים במיוחד (עובי בין 90-100 ל-5-15 נ"מ) הנחוצים למחקרים מיקרוסקופיים אלקטרונים מוכנים על אולטראטום. Ultratomes משמשים גם במיקרוסקופ אור כדי לקבל חתכים חצי דקים. החלקים המוכנים מוכתמים כדי להדגיש בבירור את המבנים של תאים ורקמות שתופסים צבעים בצורה שונה. הצבעים העיקריים - בסיסי צביעה והמלחים שלהם (, כחול טולואידין, תכלת, חום ביסמרק) - מכתים את המבנים הבזופיליים כביכול (גרעיני תאים, רקמת חיבור). צבעים חומציים - חומצות צביעה ומלחיהן (חומצה פיקרית, אריתרוזין) - מבנים אסידופיליים, או אוקסיפיליים כתם (ציטופלזמה של התא, קולגן, סיבים אלסטיים). יש להבחין בצביעה באמצעות הספגה - שיטה מיוחדת המבוססת על אזורים מסוימים של תאים ורקמות כדי להחזיר מתכות כבדות (למשל כסף, זהב, אוסמיום) מהמלחים שלהן ובכך לקבל צבע עז.

הכנת תכשיר היסטולוגי משלימה על ידי הנחתו במדיות המבטיחות את שימור מבני החפץ, צבעו ושקיפותו. לרוב, שרפים אורגניים משמשים למטרות אלה, למשל.

1. אנציקלופדיה רפואית קטנה. - מ.: אנציקלופדיה רפואית. 1991-96 2. עזרה ראשונה. - מ.: האנציקלופדיה הרוסית הגדולה. 1994 3. מילון אנציקלופדי למונחים רפואיים. - מ.: האנציקלופדיה הסובייטית. - 1982-1984.

ראה מהן "שיטות מחקר היסטולוגיות" במילונים אחרים:

גישות מתודיות ושיטות מחקר באנטומיה של האדם- לפעמים שומעים שלא נשאר כלום באנטומיה ללימוד, מחקר, כביכול מוצו כל הנושאים, כל מה שאפשר ללמוד כבר נחקר, כל הנושאים נפתרו. כאילו כל מה שנוגע למבנה גוף האדם, ... ... מילון מונחים ומושגים על האנטומיה האנושית

מחקר מעבדה- מחקר מעבדה. ראה מחקרים במעבדה. התנאי החשוב ביותר להשגת תוצאות מחקר אמינות הוא בחירה נכונה של אובייקטי ניתוח, בחירתם בזמן וניסוח בעיית המחקר. כללי דגימה... מחלות דגים: מדריך

I Medicine Medicine היא מערכת של ידע ופרקטיקה מדעית שמטרתה חיזוק ושמירה על הבריאות, הארכת חייהם של אנשים ומניעה וטיפול במחלות אנושיות. כדי לבצע משימות אלו, מ' לומד את המבנה ו... ... אנציקלופדיה רפואית

דרכים לחקור אובייקטים שונים באמצעות מיקרוסקופ. בביולוגיה וברפואה, שיטות אלו מאפשרות לחקור את המבנה של עצמים מיקרוסקופיים שמידותיהם מעבר לרזולוציה של העין האנושית. הבסיס של מ.מ.י. מפצה על…… אנציקלופדיה רפואית

- (תא ציטוס היסטולוגי + תורת לוגו יוונית) מבוססת על מחקר באמצעות מיקרוסקופ של התכונות המבניות של התאים, ההרכב התאי של איברי רקמה, נוזלי גוף של בני אדם ובעלי חיים בתהליכים נורמליים ופתולוגיים. ג ו... ... ... אנציקלופדיה רפואית

I Histology (יוונית היסטוס רקמת + לוגו הוראת) הוא מדע ביו-רפואי החוקר את התפתחותן של רקמות, התפתחותן בגוף (היסטוגנזה), מבנה, תפקודים ואינטראקציה בבעלי חיים רב תאיים ובבני אדם. נושא הלימוד העיקרי של ג' ... ... אנציקלופדיה רפואית

I Vulva (vulva; pudendum femininum) איברי המין הנשיים החיצוניים (על פי המינוח האנטומי הבינלאומי של אזור איברי המין הנשי). אנטומיה ופיזיולוגיה. הפות (איור 1) ממוקם מחוץ לעצמות הערווה של האגן ומחובר אליהן ... ... אנציקלופדיה רפואית

בחקר השינויים הנגרמים בגוף על ידי תהליכי מחלה שונים, היא שואפת, על פי שיטות המחקר הטבועות בה, הן לקבוע תהליכי מחלה אלו, והן את משמעותם ביחס לתמונה הקלינית של המחלה והמוות ... ... מילון אנציקלופדי F.A. ברוקהאוז ואי.א. אפרון

I ביופסיה (ביוס חיים ביווני + ראיית אופסיס, תפיסה חזותית) נטילת רקמות, איברים או תליית תאים תוך-חיונית לבדיקה מיקרוסקופית למטרות אבחון, כמו גם ללימוד הדינמיקה של התהליך הפתולוגי והשפעה ... ... אנציקלופדיה רפואית

המדע החוקר רקמות של בעלי חיים. רקמה היא קבוצה של תאים הדומים בצורתם, בגודלם ובתפקודם ובתוצרים המטבוליים שלהם. בכל הצמחים ובעלי החיים, למעט הפרימיטיביים ביותר, הגוף מורכב מרקמות, ... ... אנציקלופדיית קולייר

- (מיוונית ἱστός רקמה ויוונית λόγος ידע, מילה, מדע) ענף בביולוגיה החוקר את מבנה הרקמות של אורגניזמים חיים. זה נעשה בדרך כלל על ידי ניתוח רקמה לשכבות דקות ושימוש במיקרוטום. בניגוד לאנטומיה, ... ... ויקיפדיה

ספרים

• מיאלומה נפוצה ומחלות תאי פלזמה, Ramasami Kartik, Lonial Sagar. הספר מציג את ההיבטים הקליניים העיקריים של מיאלומה נפוצה ומחלות אחרות של תאי פלזמה. מתוארים מחקרי מעבדה, פתוגנזה, אבחון וטיפול. בשנייה…

אובייקטי המחקר יכולים להיות קבועים (מתים) או תאים ורקמות חיים.

כדי ללמוד את המיקרו-מבנה של חומרי גלם ומוצרי בעלי חיים, ככלל, נעשה שימוש בתאים ורקמות קבועים. ההכנות הן זמניות, מיועדות למחקר בודד וקבועות, אותן ניתן לאחסן ולבחון שוב ושוב. בנוסף, משתמשים בתכשירים מלאים או שלמים.

סמים זמנייםניתן לבשל במהירות יחסית; לשם כך, החומר הנחקר מקובע ומתקבלים חתכים על מיקרוטום מקפיא; בהיעדרו, ניתן ליצור קטע דק של רקמה או איבר בעזרת אזמל או להב. החלק המתקבל מוכתם, מונח על שקופית זכוכית, ולאחר מכן מורחים טיפה של גליצרין ומכוסים בכיסוי. כדי לזהות עמילן, משתמשים בתמיסת יוד ביודיד אשלגן: 0.5 גרם יודיד אשלגן מומס בכמות קטנה של מים, 1 גרם יוד גבישי ומוסיפים מים ל-100 ס"מ 3. כמה טיפות של מגיב מוחלים על חתיכה דקה של נקניק, גבינה וחומר אחר הממוקם על שקופית זכוכית, העמילן הופך כחול-סגול.

הכנות כוללות או שלמותנבדק מבלי לקבל קטע של רקמה או איבר. לדוגמה, סרט של רקמה תת עורית או תכשיר מרוסק של שורש צמח לאחר קיבוע, כביסה וצביעה מוקף בין שקופית לכיסוי. כדי לזהות אלמנטים מבניים בודדים, חתיכות קבועות ומוכתמות של רקמה תת עורית או רקמת שריר חלקה נלקחות עם מחט על שקופית זכוכית - תכשירים כאלה נקראים מריטה. במקרים מסוימים, למשל, כאשר בודקים את סרט הרשתית של גלגל העין או עור ראשן, לאחר קיבוע ושטיפה, לא מתבצעת צביעה, שכן התאים מכילים תכלילים אורגניים (פיגמנט) בעלי צבע טבעי.

שיטת הכנת תכשיר היסטולוגי.השיטה העיקרית לחקר תאים ורקמות קבועים היא היסטולוגית, כלומר. מחקר של קטע רקמה מוכתמת סגור בתווך מיוחד. להשגת חתכים משתמשים במזיגת חומר הבדיקה לפרפין או לצלואידין המאפשרת קבלת חתכים דקים (5-7 מיקרון או 10-30 מיקרון, בהתאמה), להכנה מהירה של חתכים (40-60 מיקרון), הקפאה. נעשה שימוש בטכניקה.

השלבים העיקריים בהכנת דגימה היסטולוגית הם: דגימה, קיבוע, כביסה, התייבשות, הטבעה בפרפין או בצלואידין, צביעה, הנחת מתחת לכיסוי.

בחירת דגימהנעשה תוך התחשבות במטרת הלימוד ובמבנה החומר. גודל הדגימה לא יעלה על 2.5-3.0 ס"מ בממוצע. דגימות כבד וטחול נלקחות עם קפסולה. חלקים מהאטריום נחתכים מהלב, מאחר שהקרומים דקים יותר מאשר בחדרים ובתכשיר אחד ניתן לראות את הקשר הטופוגרפי של האפיקרד, שריר הלב והאנדוקרדיום. מהכליות, בלוטות הלימפה, בלוטות יותרת הכליה נחתכים קטעי איברים שנכנסים עמוק לתוך פני השטח בניצב לפני השטח כך שהקליפת המוח והמדולה מתגלים על התכשיר. אם יש צורך להכין תכשירים של איברים שהשתנו, חתיכות של חומר הבדיקה נחתכות בגבול עם האזור הפגוע כך שאזור המעבר של הנגע נכלל בדגימה. יש לחתוך דגימות משרירי השלד כך שסיבי השריר יהיו בחתכים אורכיים ורוחביים. דוגמאות של דוגמאות של בשר טחון, גבינת קוטג' ודוגמאות מתפוררות אחרות מונחות תחילה בחתיכת גזה וקושרים בחוט. יש לזכור כי בעת פתיחת חלל החזה, הריאות קורסות עקב גמישות, ומאבדות באופן משמעותי מאווריריות, לכן, צינור זכוכית או גומי מוכנס לקנה הנשימה של איברי הנשימה שחולצו, דרכו מוזרק אוויר באופן מתון. . קשירת משי מוחלת על קנה הנשימה מתחת לצינור המוחדר, וקושרים עומס לטבילה מלאה. כדי לתקן את המעיים, חלק מהאיבר המיועד לקיבוע נחבש מראש בקשרים משני הצדדים. הדוגמאות מסופקות עם תוויות נייר עבות המציינות את מספר ותאריך הדגימה.

קיבעון,הָהֵן. שימור האדריכלות הטבעית (לכל החיים) מתבצע על מנת להעביר את הפרוטופלסמה החיה של מבנים למצב בלתי משתנה. ההשפעה של מקבעים מתבטאת בעובדה שכתוצאה מתהליכים ביו-פיזיים, מתרחשת קרישה בלתי הפיכה של חלבונים ברקמות ובאיברים. דגימת הרקמה שנלקחה מהאיבר נטבלה במקבע בהקדם האפשרי; היחס בין נפח החומר ונוזל הקיבוע חייב להיות לפחות 1:9 (איור 3).

קיבוע מוביל לדחיסה מסוימת ולירידה בנפח הדגימה. לרוב, 10-12% פורמלין, אלכוהול אתילי, אצטון משמשים לקיבוע. כדי להכין את הריכוז המצוין של נוזל הקיבוע, 40% פורמלין מדולל במי ברז. אתיל אלכוהול (100% אבסולוטי, או 96%) משמש במקרים בהם יש צורך לזהות חומרים המתמוססים במקבעים מימיים (לדוגמה, גליקוגן) בחתכים. באציטון, החומר הנחקר (לדוגמה, המוח) מקובע רק לכמה שעות. כאשר האיבר הנבדק, כגון רקמת העצם, מכיל סיד, מתבצעת ניקוי הסתיידות או הסתיידות. כדי לעשות זאת, חתיכה קטנה של עצם מורידה (עדיף לתלות אותה על חוט) בתמיסה מימית של 5-8% של חומצה חנקתית, אשר משתנה 2-3 פעמים ביום. התוצאה של הסרת האבדן נשפטת על ידי הדבקת מחט דקה לעצם: אם אין התנגדות, הסתיימה מסתיימת. אחרי פרו-

שְׁטִיפָהמתבצעת כדי להסיר כמות עודפת של מקבע, למשל, לאחר קיבוע עם פורמלין, כביסה מתבצעת עם מי ברז זורמים.

התייבשותמבוצע לדחיסת החומר באתילי אלכוהול בריכוז עולה: 50-70-100. להכנת 50% ו-70% אלכוהול, 96% אלכוהול מדולל במים מזוקקים. להכנת 100% אלכוהול, יש צורך לחמם גופרת נחושת עד להתייבשות מלאה ולהוסיף 96% אלכוהול אתילי לאבקה הלבנה המיובשת. בכל ריכוז של אלכוהול, החומר נשמר 1-24 שעות, תלוי בגודל החתיכות, במבנה האיבר; ב-70% אלכוהול ניתן לשמור את החומר מספר ימים.

למלאמתבצעת במדיום כזה שדגימת הבדיקה הופכת למוצקה, מה שמאפשר לקבל חתכים דקים. לשם כך, השתמש בפרפין (הספגה למשך 1-4 שעות), בצלואידין (הספגה למשך שלושה שבועות). בעת גילוי שומנים ולחקר רקמות ואיברים רופפים, משתמשים במזיגה לג'לטין.

פרוסותלקבל על מזחלת או מיקרוטומים סיבוביים. ניתן לייצר את הקטעים הדקים ביותר (5-7 מיקרון) מחומר המוטבע בפרפין. קטעים בעובי 15-20 מיקרון מוכנים מהחומר המלא בצלואידין. כדי ללמוד את המבנה המיקרו של חומרי גלם ומוצרים ממקור בעלי חיים, ככלל, נעשה שימוש בטכניקת הקפאה. הדבר מזרז את הכנת התכשיר, שכן מתבטלים שלבים ארוכים של התייבשות ומזיגה. לאחר הקיבוע והשטיפה מניחים את חלקי החפץ על במה רטובה של מיקרוטום מקפיא ומתקבלים חתכים בעובי של 40-60 מיקרומטר. החלקים מועברים במברשת למים, שם הם מתיישרים, מקבלים מראה של קרעים אפרפרים הדקים ביותר.

צביעת קטעבוצע להגברת הניגודיות של מבנים שונים בתכשירים המיועדים לבדיקה במיקרוסקופ אור. בתהליך הצביעה מתרחשים תהליכים כימיים ופיזיקליים מורכבים, לכן, בבחירת שיטה, נלקחת בחשבון הזיקה הסלקטיבית של מבני תאים לצבעים מסוימים בעלי תכונות פיזיקוכימיות שונות.

ישנם צבעים בסיסיים (בזאליים), חומציים ומיוחדים. מבנים מוכתמים בצבעים בסיסיים נקראים בזופילי,צבעי חומצה - אוקסיפילי, אסידופילי, אאוזינופילי.

מבין הצבעים הבסיסיים (הבסיסיים), משתמשים בהמטוקסילין, המכתים את הכרומטין של הגרעין ומבנים אחרים המכילים חלבון בכחול או סגול; קרמין, צובע את הליבה באדום בהיר, ספרנין - צבע אדום כהה, תיונין - צבע כחול.

מבין הצבעים החומציים, נעשה שימוש באאוזין (מכתים את הציטופלזמה בוורוד), חומצה פיקרית (צהובה), פוקסין (צבע לבנים), אינדיגו קרמין (כחול).

כאשר לומדים את המבנה המיקרו של חומרי גלם ומוצרי בעלי חיים, משתמשים לרוב בצביעה משולבת עם המטוקסילין ואאוזין. לשם כך, קטעים ממים מועברים למשך 1-3 דקות לתמיסת המטוקסילין; נשטף במים במשך 20-30 דקות, הניח בתמיסת אאוזין למשך 3-5 דקות ונשטף במים במשך 3-5 דקות. את יתר המים מוציאים בנייר סינון, מורחים טיפה של 96% אתנול למשך 1-2 דקות, ומייבשים בתמיסה 25% של חומצה קרבולית בקסילן או טולואן. לאחר מכן מורחים 1-2 טיפות מזור על החתך ומכוסים בכיסוי.

מבין הצבעים שצובעים תכלילים שומניים, משתמשים לעתים קרובות בסודן 111. להכנת תמיסת צבע ב-95 ס"מ 3 של אלכוהול אתילי 85%, מוסיפים 5 ס"מ 3 של אצטון ויוצקים אבקת סודן III עד לקבלת תמיסה רוויה (הצבע חייב להיות מוכל בעודף). את התערובת מחממים ל-50% C ומסננים. חתכים שהושגו על מיקרוטום מקפיא מונחים באתנול 50% למשך 1-2 דקות, ולאחר מכן בסודן III למשך 25 דקות. החלקים נשטפים באלכוהול 50%, נשטפים במים מזוקקים ומוטבעים בגליצרול-ג'לטין.

טיפות שומן ניטרלי הופכות לכתום עקב התמוססות סודן III בשומנים. ניתן לזהות תכלילי שומן גם בחומצה אוסמית, בעוד המבנים השומניים מוכתמים בשחור.

מסקנה מתחת לכיסוימתבצע בסביבות שאינן מאפשרות לאוויר לעבור ומסוגלות לשמור על החתך לאורך זמן. חלקים מוכתמים מיובשים באלכוהולים בעלי חוזק הולך וגובר ומניחים מתחת לכיסוי באשוח, בלסם קנדי ​​או גליצרול-ג'לטין (התכשיר לא אמור לבוא במגע עם אלכוהולים וקסילן).

הכנת תכשירים למיקרוסקופ אלקטרונים.כדי לחקור אובייקטים ביולוגיים, משתמשים בשני סוגים של מיקרוסקופים אלקטרונים: שידור (שידור) וסריקה (ראסטר).

העיקרון של עיבוד חפץ לבדיקה במיקרוסקופ אלקטרוני תמסורת מבוסס על אותם עקרונות כמו במיקרוסקופים אופטיים: דגימה, קיבוע, כביסה, התייבשות, מזיגה, הכנת חתכים אולטרה-דקים, ניגודיות.

בחירת דגימהמתבצע תוך התחשבות במטרת המחקר ובמבנה החומר, תוך ציות לאותם כללים כמו עבור מיקרוסקופ אור. נפח החתיכות של החומר הנלמד לא יעלה על 1 מ"מ 3. המטרה העיקרית של הקיבוע היא לשמור על הרקמה קרובה ככל האפשר לחיים.

קיבועזה מבוצע לשימור טוב יותר של מבנים, לכן יש צורך להשתמש בריאגנטים עם pH מסוים ואיזוטוניקיות, שערכיהם נקבעים לפי סוג הרקמה המתוקנת. תהליך הקיבוע מתבצע בשני שלבים: קידומת ופוסט-קיבוע. לקיבוע משתמשים בתמיסה של 2.5-3% תמיסה של גלוטראלדהיד (pH 7.2-7.4), משך הקיבוע הוא 2-4 שעות. לאחר הקיבוע מתבצע בתמיסה של 2% (pH 7.2-7.4) - 1- שעתיים.לשימור המבנה התוך-וויטלי, מומלץ להשתמש במקבע בטמפרטורה נמוכה (0-4 מעלות צלזיוס), ולהכין מקבעים על תמיסות פוספט-באפר, קקודילט, ורונאל-אצטט.

שְׁטִיפָהזה מתבצע עם 30% אלכוהול קר 5-7 פעמים, החפץ נשמר בכל מנת אלכוהול במשך 30 דקות, כלומר. נשטף מהמקבע למצב כזה כאשר פעולת החמצון של המקבע נפסקת.

התייבשותלבצע עם אלכוהול אתילי בעלי חוזק הולך וגובר: 30, 50, 70, 96, 100% למשך 30 דקות. לשיטות מזיגה מסוימות, מומלץ להוסיף אצטון ופרופילן אוקסיד להפשרה.

למלאמתבצע בשרף אפוקסי (ארלדיט, אפון וכו'). פילמור שרפים בקפסולות מתבצע בתרמוסטט ב-60 מעלות צלזיוס עד להתקשות, ככלל, תוך 1-2 ימים.

קטעים דקים במיוחדמתקבלים באמצעות סכיני זכוכית על אולטרה-מיקרוטום; לשם כך, גושי אפוקסי מושחזים בצורה של פירמידה קטומה טטרהדרלית. מקטעים אפרוריים סדרתיים ממוקמים באמבטיה עם 10% אתנול. הקטעים המתקבלים מותקנים על רשתות נחושת או פלדיום, שעל פני השטח שלהן מוחל סרט פורמוואר באופן ראשוני. כדי לחשוף את המבנים הדרושים, חלקים על הרשתות מטופלים בתמיסות של עופרת ציטראט ואורניל אצטט.

ל מיקרוסקופ אלקטרונים סורקדגימת הבדיקה מקובעת, מיובשת, בהתאם למטרת המחקר, באמצעות המקבעים לעיל. לאחר התייבשות, הדגימה מודבקת על חפץ מחזיק, מכניסה ליחידת מקרטעת ומצופה בשכבה דקה מאוד של זהב או פלטינה. שלא כמו מיקרוסקופ אלקטרונים העברה, מיקרוסקופ אלקטרונים סורק יכול להשתמש בתכשירים קורוזיביים: מושא המחקר נשפך עם כמה חומרים מתקשים, ולאחר מכן נבחנים יציקות ומשטחים. הם גם חוקרים העתקים המתקבלים בהקפאה - שבבים. במקרה זה נבדקת רושם של מחשוף פני השטח של האובייקט. כדי להגביר את הניגודיות, יש להצלל את ההעתקים על ידי ריסוס חלקיקי מתכת (זהב, פלטינה) או פחם.

שאלות מבחן

• 1. באילו שיטות משתמשים בחקר מבני תאים, רקמות ואיברים?
• 2. מהם הכללים הבסיסיים שיש להקפיד עליהם בנטילת דגימות להכנת תכשירים היסטולוגיים?
• 3. מהן התכונות של הכנת תכשירים מרקמת עצם?
• 4. כיצד מתקנים את חומר הבדיקה?
• 5. במה משתמשים לייבוש תכשירים?
• 6. באילו מדיה משתמשים לשפוך את חומר הבדיקה?
• 7. באיזה צבע משתמשים לזיהוי רקמת שומן?
• 8. מהי שיטת החתך הנפוצה ביותר ומדוע?
• 9. שם את השלבים העיקריים של הכנת דגימות למיקרוסקופ אלקטרוני שידור וסריקה.

היסטולוגיה - ("גיסטוס" ביוונית - רקמה, לוגיס - הוראה) זהו מדע המבנה, ההתפתחות והפעילות החיונית של רקמות של אורגניזמים רב-תאיים ובני אדם. החפצים שהם נושא המדע הזה אינם נגישים לעין בלתי מזוינת. לכן, ההיסטוריה של ההיסטולוגיה קשורה קשר הדוק עם ההיסטוריה של יצירת מכשירים כאלה המאפשרים לנו ללמוד את האובייקטים הקטנים ביותר בעין בלתי מזוינת. 2

מהלך ההיסטולוגיה מחולק באופן מקובל לחלקים הבאים: n 1. ציטולוגיה היא מדע התא. n 2. אמבריולוגיה היא מדע ההתפתחות, מההתחלה ועד להיווצרותו המלאה של אורגניזם. n 3. היסטולוגיה כללית - מדע הדפוסים הכלליים הטמונים ברקמות. n 4. היסטולוגיה פרטית - חוקרת מבנה, התפתחות של איברים ומערכות.

ציטולוגיה - (מיוונית κύτος "תא" ו-λόγος - "מחקר", "מדע") n ענף בביולוגיה החוקר תאים חיים, אברוניהם, מבנהם, תפקודם, תהליכי רביית תאים, הזדקנות ומוות. ארבע

EMBRYOLOGY n (מאחר - יוונית ἔμβρυον - עובר, עובר + -λογία מ-λόγος - הוראה) הוא מדע החוקר את התפתחות העובר. 5

ההיסטוריה של יצירת תורת התא 1590. יאנסן המציא את המיקרוסקופ, שבו ניתנה הגדלה על ידי חיבור של שתי עדשות. 1665. רוברט הוק השתמש לראשונה במונח תא. 1650-1700 שנים. אנתוני ואן לוונהוק תיאר לראשונה חיידקים ומיקרואורגניזמים אחרים. 1700 -1800 שנים. תיאורים וציורים חדשים רבים של רקמות שונות, בעיקר ירקות, פורסמו. בשנת 1827 גילה קרל בר את הביצה ביונקים. 1831 -1833 שנים. רוברט בראון תיאר את הגרעין בתאי הצמח. 1838 -1839 שנים. הבוטנאי מתיאס שליידן והזאולוג תיאודור שוואן שילבו את רעיונותיהם של מדענים שונים וניסחו את תורת התא, שקבעה שהיחידה הבסיסית של מבנה ותפקוד באורגניזמים חיים היא התא. 1855 רודולף וירצ'וב הראה שכל התאים נוצרים כתוצאה מחלוקת תאים.

ההיסטוריה של יצירת תורת התא 1665. בבדיקת קטע של פקק במיקרוסקופ, מדען אנגלי, הפיזיקאי רוברט הוק, גילה שהוא מורכב מתאים המופרדים על ידי מחיצות. לתאים האלה הוא כינה "תאים"

ההיסטוריה של יצירת התיאוריה הסלולרית במאה ה-17 עיצב לוונהוק מיקרוסקופ ופתח את הדלת למיקרוקוסמוס עבור אנשים. מגוון של ריצות, גלגלונים ויצורים חיים זעירים אחרים הבזיקו לנגד עיניהם של החוקרים הנדהמים. התברר שהם נמצאים בכל מקום - האורגניזמים הקטנים ביותר האלה: במים, בזבל, באוויר ובאבק, באדמה ובמרזבים, בפסולת מרקיבה ממקור מן החי והצומח.

ההיסטוריה של יצירת תורת התא 1831-1833. רוברט בראון תיאר את הגרעין בתאי הצמח. בשנת 1838, הבוטנאי הגרמני מ' שליידן הפנה את תשומת הלב לגרעין וראה בו את המקור של התא. לדברי שלידן, גרעין מתעבה מחומר גרגירי, שסביבו נוצר גרעין, ומסביב לגרעין - תא, והגרעין עלול להיעלם בתהליך היווצרות התא.

ההיסטוריה של יצירת התיאוריה התאית הזואולוג הגרמני T. Schwann הראה שגם רקמות בעלי חיים מורכבות מתאי. הוא יצר תיאוריה הקובעת שתאים המכילים גרעינים מייצגים את הבסיס המבני והתפקודי של כל היצורים החיים. תורת המבנה התאית גובשה ופורסמה על ידי T. Schwann בשנת 1839. ניתן לבטא את מהותה בהוראות הבאות: 1. התא הוא היחידה המבנית היסודית של מבנה כל היצורים החיים; 2. תאים של צמחים ובעלי חיים הם עצמאיים, הומולוגיים זה לזה במקורם ובמבנהם. כל תא מתפקד ללא תלות באחרים, אך יחד עם כולם. 3. כל התאים נובעים מחומר בין תאי חסר מבנה. (טעות!) 4. פעילות החיים של התא נקבעת לפי הקליפה. (שְׁגִיאָה!)

ההיסטוריה של יצירת תורת התא בשנת 1855 עשה הרופא הגרמני ר' וירצ'וב הכללה: תא יכול להיווצר רק מתא קודם. זה הוביל להבנה של העובדה שצמיחה והתפתחות של אורגניזמים קשורים לחלוקת תאים ולהתמיינות נוספת שלהם, מה שמוביל להיווצרות רקמות ואיברים.

ההיסטוריה של יצירת תיאוריית התא קארל בר עוד בשנת 1827, קארל בר גילה את הביצית ביונקים, הוכיחה שהתפתחות היונקים מתחילה בביצית מופרית. המשמעות היא שהתפתחות של כל אורגניזם מתחילה בביצית מופרית אחת, התא הוא יחידת ההתפתחות.

תולדות יצירת תורת התא 1865 פורסמו חוקי התורשה (ג' מנדל). 1868 התגלו חומצות גרעין (F. Miescher) 1873 התגלו כרומוזומים (F. Schneider) 1874 התגלתה מיטוזיס בתאי צמחים (I. D. Chistyakov) 1878 התגלתה חלוקה מיטוטית של תאי בעלי חיים (W. Fleming, P. I. Peremezhko) 187 פלמינג - התנהגות הכרומוזומים בזמן חלוקה. 1882 מיוזיס התגלה בתאי בעלי חיים (W. Fleming) 1883 הוכח שמספר הכרומוזומים בתאי נבט קטן פי שניים מאשר בתאים סומטיים (E. Van Beneden) 1887 מיוזיס התגלתה בתאי צמחים (E. Strasburger ) 1898 גולגי גילה את מנגנון הרשת של התא, מנגנון גולגי. 1914 גובשה תורת הכרומוזומים של תורשה (T. Morgan). 1924 פורסמה התיאוריה הטבעית-מדעית על מקור החיים על פני כדור הארץ (A.I. Oparin). 1953 גובשו רעיונות לגבי מבנה ה-DNA והמודל שלו נוצר (D. Watson and F. Crick). 1961 טבעו ותכונותיו של הקוד הגנטי נקבעים (F. Crick, L. Barnet, S. Benner).

ההוראות העיקריות של התיאוריה הסלולרית המודרנית 1. תא הוא מערכת חיה יסודית, יחידת מבנה, פעילות חיונית, רבייה והתפתחות אינדיבידואלית של אורגניזמים. 2. התאים של כל האורגניזמים החיים הם הומולוגיים, אחידים במבנה ובמקור. 3. היווצרות תאים. תאים חדשים נוצרים רק על ידי חלוקת תאים קיימים. 4. תא ואורגניזם. תא יכול להיות אורגניזם עצמאי (פרוקריוטים ואיקריוטים חד-תאיים). כל האורגניזמים הרב-תאיים מורכבים מתאי. 5. פונקציות של תאים. בתאים מתבצעים חילוף חומרים, עצבנות ועצבנות, תנועה, רבייה והתמיינות. 6. התפתחות התא. הארגון הסלולרי קם עם שחר החיים ועבר דרך ארוכה בהתפתחות אבולוציונית מצורות נטולות גרעין (פרוקריוטות) לאלו גרעיניות (אוקריוטות).

שיטות למיקרוסקופיה של דגימות היסטולוגיות 1. מיקרוסקופיה אור. 2. מיקרוסקופיה אולטרה סגולה. 3. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית (זוהרת). 4. מיקרוסקופ ניגודיות פאזה. 5. מיקרוסקופ שדה כהה. 6. מיקרוסקופ הפרעות 7. מיקרוסקופ קיטוב. 8. מיקרוסקופיה אלקטרונית. 17

מיקרוסקופ n מכשיר אופטי זה מאפשר לך לצפות בעצמים קטנים. הגדלת התמונה מושגת על ידי מערכת של עדשות אובייקטיביות ועינית. המראה, המעבה והדיאפרגמה מכוונים את שטף האור ומווסתים את הארת האובייקט. החלק המכני של המיקרוסקופ כולל: חצובה, שולחן חפצים, ברגים מאקרו ומיקרומטרים, מחזיק צינור. שמונה עשרה

שיטות מיוחדות למיקרוסקופיה: - מיקרוסקופ ניגודיות פאזה - (לחקר חפצים חיים ללא כתמים) - מיקרוסקופיה מאפשרת לחקור אובייקטים חיים ולא כתמים. כאשר האור עובר דרך עצמים צבעוניים, משרעת גל האור משתנה, וכאשר האור עובר דרך עצמים לא צבעוניים, משתנה הפאזה של גל האור, המשמש לקבלת תמונה בעלת ניגודיות גבוהה במיקרוסקופ ניגודיות פאזה והפרעות. - מיקרוסקופ שדה אפל (לחקר חפצים חיים שאינם מוכתמים). נעשה שימוש בקבל מיוחד המדגיש את המבנים המנוגדים של החומר הלא צבוע. מיקרוסקופיה בשדה כהה מאפשרת לצפות בעצמים חיים. העצם הנצפה מופיע כמואר בשדה חשוך. במקרה זה, קרני המאיר נופלות על העצם מהצד, ורק קרניים מפוזרות נכנסות לעדשות המיקרוסקופ. 19

שיטות מיוחדות של מיקרוסקופיה זוהר mic-p (למחקר של עצמים חיים לא מוכתמים) מיקרוסקופיה משמשת להתבוננות באובייקטים פלורסנטים (זוהר). במיקרוסקופ פלואורסצנטי, אור ממקור רב עוצמה עובר דרך שני מסננים. מסנן אחד חוסם אור לפני הדגימה ומאפשר לאור באורך הגל שמלהיב את הדגימה להאיר. המסנן השני מאפשר לאור באורך הגל שנפלט מהאובייקט הפלורסנטי לעבור דרכו. לפיכך, עצמים פלורסנטים סופגים אור באורך גל אחד ופולטים אור באזור אחר של הספקטרום. -יכולת אולטרה סגול m-pa) mic-p (מגדיל את הרזולוציה -קיטוב mic-p (עבור חפצי מחקר עם סידור מסודר של מולקולות - שלד, שריר, סיבי קולגן וכו') מיקרוסקופיה - יצירת תמונה של מבנים אנזוטרופיים לא צבעוניים (כגון כסיבי קולגן ומיופיברילים).20

שיטות מיוחדות של מיקרוסקופיה - מיקרוסקופ התאבכות (לקביעת השאריות היבשות בתאים, קביעת עובי העצמים) - מיקרוסקופיה משלבת את עקרונות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה וקיטוב ומשמשת לקבלת תמונת ניגודיות של עצמים לא מוכתמים. אופטיקה הפרעה מיוחדת (אופטיקת נומרסקי) מצאה יישום במיקרוסקופים עם ניגודיות הפרעות דיפרנציאלית. ג. מיקרוסקופיה אלקטרונית: -טרנסנסציה (חקר עצמים באמצעות שידור) -סריקה (לימוד פני השטח של עצמים) תיאורטית, הרזולוציה של שידור EM היא 0.002 ננומטר. הרזולוציה האמיתית של מיקרוסקופים מודרניים מתקרבת ל-0.1 ננומטר. עבור עצמים ביולוגיים, רזולוציית EM בפועל היא 2 ננומטר. 21

טכניקות מיוחדות למיקרוסקופיה מיקרוסקופ אלקטרוני תמסורת מורכב מעמודה שדרכה עוברים בוואקום אלקטרונים הנפלטים על ידי חוט קתודה. קרן אלקטרונים הממוקדת על ידי מגנטים טבעתיים עוברת דרך המדגם המוכן. אופי פיזור האלקטרונים תלוי בצפיפות המדגם. האלקטרונים העוברים דרך הדגימה ממוקדים, נצפים על מסך ניאון ומתועדים באמצעות לוח צילום. מיקרוסקופ אלקטרוני סורק משמש כדי לקבל תמונה תלת מימדית של פני השטח של אובייקט הנחקר. שיטת השבבים (הקפאה-ביקוע) משמשת לחקר המבנה הפנימי של ממברנות התא. תאים מוקפאים בטמפרטורת חנקן נוזלי בנוכחות חומר מגן קריו ומשמשים לייצור צ'יפס. מישורי המחשוף עוברים דרך האמצע ההידרופובי של דו-שכבת השומנים. המשטח הפנימי החשוף של הממברנות מוצל בפלטינה, ההעתקים המתקבלים נלמדים ב-EM סורק. 22

שיטות מיוחדות (לא מיקרוסקופיות): 1. ציטו- או היסטוכימיה - המהות היא שימוש בתגובות כימיות ספציפיות למהדרין עם תוצר סופי קל בתאים וברקמות לקביעת כמות החומרים השונים (חלבונים, אנזימים, שומנים, פחמימות, וכו.). ניתן ליישם ברמה של מיקרוסקופ אור או אלקטרונים. 2. ציטופוטומטריה - השיטה משמשת בשילוב עם 1 ומאפשרת לכמת חלבונים, אנזימים וכדומה המזוהים בשיטה הציטוהיסטוכימית 3. אוטורדיוגרפיה - מוחדרים לגוף חומרים המכילים איזוטופים רדיואקטיביים של יסודות כימיים. חומרים אלו כלולים בתהליכים מטבוליים בתאים. לוקליזציה, תנועה נוספת של חומרים אלו באיברים נקבעת על תכשירים היסטולוגיים על ידי קרינה, הנלכדת על ידי תחליב צילום המוחל על התכשיר. 4. ניתוח דיפרקציית רנטגן - מאפשר לקבוע את כמות היסודות הכימיים בתאים, לחקור את המבנה המולקולרי של מיקרו-אובייקטים ביולוגיים. 24 5. מורפומטריה - מדידת גודל ביול. מבנים ברמה התאית והתת-תאית.

שיטות מיוחדות (לא מיקרוסקופיות) 6. מיקרואורגיה - ביצוע פעולות עדינות מאוד עם מיקרומניפולטור במיקרוסקופ (השתלת גרעין, הכנסת חומרים שונים לתאים, מדידת ביופוטנציאלים ועוד) 6. שיטת גידול תאים ורקמות - ב. אמצעי תזונה או בתאי דיפוזיה, מושתלים ברקמות גוף שונות. 7. אולטרה צנטריפוגה - שבירה של תאים או מבנים תת-תאיים על ידי צנטריפוגה בתמיסות בצפיפויות שונות. 8. שיטה נסיונית. 9. שיטת השתלת רקמות ואיברים. 25

הקיבוע משמר את מבנה התאים, הרקמות והאיברים, מונע זיהום חיידקי ועיכול אנזימטי שלהם, ומייצב מקרומולקולות באמצעות הצלבות כימית שלהן. 32

קיבוע פורמלין נוזלי, אלכוהולים, גלוטאראלדהיד - המקבעים הנפוצים ביותר; קריופיקסציה - השמירה הטובה ביותר של מבנים מובטחת על ידי הקפאה מיידית של דגימות בחנקן נוזלי (-196 מעלות צלזיוס); ליאופיליזציה - חתיכות קטנות של רקמה נתונות להקפאה מהירה, שעוצרת תהליכים מטבוליים. התייבשות - הנוהל המקובל לפינוי מים הוא התייבשות באלכוהולים בעלי חוזק עולה (מ-70 עד 60%). מילוי - הופך את הבד לעמיד, מונע ריסוק והתקמטותו במהלך החיתוך, מאפשר לקבל חתכים בעובי סטנדרטי. מדיום ההטבעה הנפוץ ביותר הוא פרפין. נעשה שימוש גם בצלואידין, במדיה פלסטית ובשרפים. 33

התייבשות מכינה את הרקמה הקבועה לחדירה של אמצעי ההטבעה. מים מרקמות חיים, כמו גם מים מתערובות קיבוע (רוב המקבעים הם תמיסות מימיות) יש להסיר לחלוטין לאחר הקיבוע. ההליך הסטנדרטי להסרת מים הוא התייבשות באלכוהול העולה מ-60° ל-100° חוזק. 34

מילוי הוא הליך הכרחי שקודם להכנת קטעים. המילוי הופך את הבד לעמיד, מונע ריסוק וקמטו במהלך החיתוך ומאפשר לקבל קטעים דקים בעובי סטנדרטי. מדיום ההטבעה הנפוץ ביותר הוא פרפין. נעשה שימוש גם בצלואידין, במדיה פלסטית ובשרפים. 35

מיקרוטום רוטרי. 40 n בלוקים המכילים חלק מאיבר מקובעים במחזיק חפצים ניידים. כאשר מורידים אותו, נותרים קטעים סדרתיים על הסכין, הם מוסרים מהסכין ומורכבים על שקופית זכוכית להמשך עיבוד ומיקרוסקופיה.

שיטות צביעת היסטוסיקציה: n גרעיני (בסיסי): n המטוקסילין - כתמים n n n גרעינים כחולים; המטוקסילין ברזל; תכלת II (בסגול); קרמין (באדום); ספרנין (באדום); כחול מתיל (כחול); טולואידין (בכחול); תיונין (בכחול). n ציטופלזמי- (חומצה): n אאוזין - בצבע ורוד; n אריתרוזין; n כתום "G"; n פוקסין חמוץ - לאדום; n חומצה פיקרית - צהוב; n קונגו - אדום - לאדום 44

שיטות מיוחדות לצביעה היסטורית n Sudan III – צביעה כתומה של שומנים ושומנים; n חומצה אוסמית - צביעה של שומנים ושומנים בשחור; n orcein - צביעה חומה של סיבים אלסטיים; n חנקתי כסף - הספגה של אלמנטים עצביים בצבע חום כהה. 45

מבני תאים: n OXYPHILIAן היכולת לצבוע ורוד בצבעים חומציים n בזופילינית היכולת לצבוע כחול בצבעים בסיסיים n נויטרופיליה - n היכולת לצבוע סגול בצבעים חומציים ובסיסיים. 47

1

תא n הוא מערכת חיה יסודית המורכבת מציטופלזמה, גרעין, ממברנה ומהווה את הבסיס להתפתחות, מבנה וחיים של אורגניזמים של בעלי חיים וצמחים.

הגליקוקאליקס הוא קומפלקס אפיממברנה המורכב מסכרידים הקשורים לחלבונים וסכרידים הקשורים לשומן. פונקציות n קליטה (הורמונים, ציטוקינים, מתווכים ואנטיגנים) n אינטראקציות בין-תאיות (עצבנות וזיהוי) n עיכול פריאטלי (מיקרוווילי של תאי גבול מעיים)

פונקציות הציטלמה: - תוחם; - הובלה אקטיבית ופסיבית של חומרים בשני הכיוונים; - פונקציות קולטן; מגע עם תאים שכנים.

רָאשִׁי חפצי מחקר הם תכשירים היסטולוגיים, ושיטת המחקר העיקרית היא מיקרוסקופיה.

התכשיר ההיסטולוגי צריך להיות מספיק שקוף (דק) ובניגוד. הוא עשוי ממבנים חיים ומתים (קבועים). התכשיר יכול להיות תרחיף של תאים, מריחה, טביעה, סרט, תכשיר כולל וחתך דק.

תהליך הכנת הכנות היסטולוגיות למחקרים מיקרוסקופיים כולל את השלבים העיקריים הבאים: 1) לקיחת החומר וקיבועו; 2) דחיסת חומר; 3) הכנת קטעים; 4) מכתים, או קטעים מנוגדים; 5) סיום סעיפים.

לצביעה משתמשים בצבעים היסטולוגיים מיוחדים עם ערכי pH שונים: חומצי, ניטרלי ובסיסי. המבנים המוכתמים על ידם נקראים אוקסיפיליים, נויטרופיליים (הטרופיליים) ובזופילים, בהתאמה.

באילו שיטות משתמש המדע ההיסטולוגי? הם די רבים ומגוונים:

מיקרוסקופיה.

מיקרוסקופ אור. למיקרוסקופים מודרניים יש רזולוציה גבוהה. רזולוציה מוגדרת כמרחק הקטן ביותר (ד) בין שתי נקודות סמוכות שניתן לראות בנפרד. מרחק זה תלוי באורך גל האור (λ) ומתבטא בנוסחה: d = 1/2 λ.

אורך הגל המינימלי של החלק הגלוי של הספקטרום הוא 0.4 מיקרומטר. לכן, כוח הרזולוציה של מיקרוסקופ האור הוא 0.2 מיקרומטר, וההגדלה הכוללת מגיעה לפי 2500.

מיקרוסקופיה אולטרה סגולה . אורך הגל של אור אולטרה סגול הוא 0.2 מיקרומטר, לכן, הרזולוציה של המיקרוסקופ האולטרה סגול היא 0.1 מיקרומטר, אך מכיוון שקרינה אולטרה סגולה אינה נראית, יש צורך במסך זוהר כדי לצפות באובייקט הנחקר.

מיקרוסקופיה פלואורסצנטית (זוהרת). קרינה קצרה (בלתי נראית), הנספגת על ידי מספר חומרים, מעוררת את האלקטרונים שלהם, הפולטים אור באורך גל ארוך יותר, והופכים לחלק הנראה בספקטרום. כך מושגת עלייה ברזולוציה של המיקרוסקופ.

מיקרוסקופ ניגודיות פאזה מאפשר לך לפלוט חפצים לא צבעוניים.

מיקרוסקופיה מקטבת משמש לחקר האדריכלות של מבנים היסטולוגיים, כגון סיבי קולגן.

אלקטרון מיקרוסקופי מאפשר לחקור אובייקטים מוגדלים עשרות אלפי פעמים.

מיקרו-צילום ומיקרופילמוגרפיה . שיטות אלו מאפשרות לחקור עצמים קבועים בתצלומים וחפצים מיקרוסקופיים חיים בתנועה.

שיטות מחקר איכותני וכמותי.

היסטו –וציטוכימיה , כולל כמותי, מאפשר ניתוח איכותי של האובייקטים הנחקרים ברמת הרקמה, התא והתת-תאי.

ציטוספקטרופוטומטריה היא מאפשרת לחקור את התוכן הכמותי של חומרים ביולוגיים מסוימים בתאים וברקמות על סמך קליטת אור באורך גל מסוים על ידי הצבע הקשור אליהם.

צנטריפוגה דיפרנציאלית מאפשר להפריד בין תכולת התאים הנבדלים זה מזה במסה שלהם.

רדיוגרפיה זה מבוסס על הכללת תווית רדיואקטיבית (לדוגמה, יוד רדיואקטיבי, H³-thymidine וכו') בתהליך המטבולי.

מורפומטריה מאפשר למדוד את השטחים והנפחים של תאים, גרעינים ואברונים שלהם באמצעות עינית - ומיקרומטרים של אובייקטים ורשתות מיוחדות.

תוכנת מחשב לעיבוד אוטומטי של חומר דיגיטלי.

שיטת תרבית רקמותהוא שמירה על כדאיות וחלוקה של תאים ורקמות מחוץ לגוף. לשם כך משתמשים במיכלים מיוחדים עם מדיום תזונתי, שבהם נוצרים כל התנאים הדרושים לפעילות חיונית של תאים. בשיטה זו ניתן ללמוד את ההתמיינות וההתפתחות התפקודית של תאים, דפוסי השינוי הממאיר שלהם והתפתחות תהליך גידול, אינטראקציה בין-תאית, פגיעה בתאים וברקמות על ידי וירוסים ומיקרואורגניזמים, השפעת תרופות על חילוף החומרים. תהליכים בתאים ורקמות וכו'.

צביעה תוך-וויטלית (חיונית). משמש לחקר תופעות הפגוציטוזיס ופעילות המקרופאגים, יכולת הסינון של צינוריות הכליה וכו'.

שיטת השתלת רקמות. שיטה זו משמשת לחקר ההתנהגות של תאים ומצבם המורפו-פונקציונלי כאשר הם מושתלים באורגניזם אחר. לדוגמה, שיטה זו משמשת לשמירה על חשיפה של בעלי חיים למינונים קטלניים של קרינה.

מיקרומניפולציה.שיטה זו שימשה בביולוגיה מולקולרית, בהנדסה גנטית וגם בשיבוט, כאשר מוציאים גרעין מביצה עם מערכת הפלואידית של כרומוזומים באמצעות מיקרומניפולטור ומשתילים לתוכו גרעין תא סומטי עם מערכת דיפלואידית של כרומוזומים.

קיים שיטות מחקר רבות, ביניהם בולטים הבאים: תצפית בעוברים חיים באמצעות הקלטת סרט ווידאו (בשימוש בעיקר בניסוי). לשם כך נעשה שימוש במכשיר מיקרו-צילום מיוחד המחובר לתא תרמי בו מתפתח העובר. כאשר לומדים התפתחות של עובר עוף, למשל, עושים חלון בקליפה, שנסגר בצלחת שקופה. שיטה זו אפשרה להתחקות ולחדד את הדינמיקה של שינויים בצורתם ובגודלם של העוברים בתהליך ההתפתחות.

שיטת פרוסה קבועהעוברים באמצעות מיקרוסקופ אור ואלקטרונים, היסטרדיואוטוגרפיה, היסטו- ואימונוציטוכימיה. שיטות אלו מאפשרות לנתח רקמות ושינויים תוך תאיים בדינמיקה של התפתחות חלקי העובר. בעזרת שיטות היסטוריות ואימונוציטוכימיות נלמדים תהליכים ביוכימיים המתרחשים בתאים עובריים - סינתזה של DNA, RNA, חלבונים, חלבוני קולטן ספציפיים ועוד. בעזרת שיטות אלו התקבל מידע חשוב על התמיינות תאים ורקמות בפיתוח של עוברים ועוברים.

שיטת סימון, שהוצע בשנת 1925 על ידי W. Vogt (1888-1941), מאפשר לחקור תנועות תאים בעובר מתפתח. לשם כך, נעשה שימוש בסמנים שאינם רעילים לעוברים (לדוגמה, אדום ניטרלי, חלקיקי פחם), וכן נוגדנים לחלבונים מסוימים. בעת שימוש בנוגדנים, נעשה שימוש ביכולתם לשלב עם צבע ניאון וחלבוני נבט. בעזרת מיקרוסקופ פלואורסצנטי מתחקים אחר התפלגות הצבע וחוקרים את הדינמיקה של סינתזת חלבון ברקמות המתפתחות של העובר.

שיטות מיקרוכירורגיהפותחו בתחילת המאה ה-20 על ידי נציגי בית הספר של ג' ספמן (1869-1941). הם כללו: הסרת קליפות של ביצי בעלי חיים, השתלה של חלקים מעובר אחד למשנהו וכו'. שיטות אלו משמשות גם לחקר ההשלכות של הרס (למשל באמצעות קרן לייזר) של חלקי העובר או הפרט שלו. תאים. ההשתלה כמעין מיקרוכירורגיה משמשת לזיהוי מסלולי נדידת התאים ומקורות התפתחות הרקמה. במקביל, מושתל אתר של העובר, למשל, שליו, באותו מקום של עובר העוף במקום האתר המרוחק. לגרעיני תאי שליו יש מבנה אופייני ולכן ניתנים להבחנה מגרעיני תאי עוברי עוף.

הסבר- כריתה של שטח קטן מהעובר וטיפוחו בסביבה מלאכותית. בשיטה זו ניתן לקבל מידע על מקורות התפתחות הרקמה מאזור נתון של העובר ולזהות דפוסי התפתחות היסטוגנטיים.

השתלת גרעין- שיטה לשיבוט עוברים. למשל, השתלת גרעינים מתאי אפיתל המעי של ראשן הצפרדע בעל הטפרים לתוך ביצת צפרדע, שגרעין שלה הושבת על ידי קרן אולטרה סגולה, הביאה להופעת פרטים חדשים (ניסויים של גרדון). ניסויים אלו הניחו את הבסיס לשיבוט של בעלי חוליות גבוהים יותר ותרמו להופעתה (ב-1997) של הכבשה המפורסמת דולי. ניסויים אמבריולוגיים דומים הראו באופן משכנע שגרעינים של תאים סומטיים מכילים סט שלם של מידע גנטי לפיתוח אורגניזם חדש.

ההישג האחרון אמבריולוגיה ניסיוניתהיה פיתוח שיטת ההפריה החוץ גופית. השתלת עוברים שנולדו במבחנה לתוך הרחם היא הבסיס לטיפול בפוריות. בשנת 1973, ל. שטלס (ארה"ב) חילצה ביצית קדם-ביוץ מהשחלה של אישה לא פורייה והפריה אותה עם הזרעונים של בעלה. זו הייתה תחילתה של הטכניקה של השתלת עוברים אנושיים לטיפול בבעיות פוריות. עם זאת, רק בשנת 1978 בבריטניה, כתוצאה מהשתלה מוצלחת לרחם של אישה עקרה של עובר אנושי בשלב של 8 בלסטומרים, לאחר 2.5 ימי טיפוח, ילד "המבחנה" הראשון בעולם השוקל. הופיעו 2700 גרם.